《文件已閱聲明表》《Procedurecirculationform》文件名稱:C—肽檢測作業指導書表號已閱聲明：自己承諾已認識此文件中的相關內容,今后的工作中將嚴格依照此文件執行,不隨意對外傳閱此文件,如有因與文件不切合的操作,責任由自己擔當。Ihaveunderstoodtherelevantcontentofthewillkeepthedocumentsecretandberesponsibletoproperlyperformprocedure）閱讀人簽字表姓名（NAME）職務（POSITION）簽字（SIGNATURE）簽字日期（DATE）《文件更正記錄頁》《Procedureamendmentform》表號序號頁碼內容改正說明(Descriptionof審批人贊同見效日期NO.(Page)Modifiedcontents)(Approvedby)(Approveddate)1換版《文件信息表》《Procedureinformationform》文件名TitleofDOC.版本號(EditionNo.)文控部門(Doc.ControlDept.)回顧日期/簽字(Reviewdate/signature)取代文件(Replaces)存放地址(Location)/擁有人Holder）作者簽字/日期(Authorsignature/date)審批人簽字/日期(Authorizedby:Signature/Date)接收人簽字/日期Receiptor/Date）副本數(CopyNo.)

表號:KM-MP03?02?04C—肽檢測作業指導書（KM-SOP0300?319）見效日期(Operativedate)2008-03-13實驗室文控室回顧日期(Review回顧人員簽字(Signature)date)C—肽檢測作業指導書（）No.地址（Location）擁有人(Holder)1診斷部文控室陳彬2發光室段學成姜小琴陳建波本文件是第個文件拷貝/共發放2個文件拷貝。—肽檢測作業指導書（StandardoperationprocedureforanalysisofC-Peptide）1原理（Testprinciple）：夾心法，總檢測時間：18分鐘。第一次孵育：20ul標本和一份生物素抗C肽特異性單克隆抗體一起孵育，一份釕復合體標記的C肽特異性單克隆抗體后，反應形成一“三明治”樣抗原-抗體復合體。第二次孵育：加入鏈親和素包被的微粒，復合體在鏈親和素和生物素相互作用下形成固相。將反應液吸入檢測池中，檢測池中的微粒經過電磁作用吸附在電極表面。未結合的物質經過ProCell除去。在電極上加以必然的電壓，使復合體化學發光，用光電倍增器檢測發光的強度。經過檢測儀的定標曲線獲得最后的檢測結果，定標曲線是經過2定標點和試劑條形碼上獲得的主曲線生成的。2樣本收集和儲蓄（SpecimenCollectionandStorage）：收集要求(specimencollection)：血清（serum）：必定用標準試管或內有分別膠的試管收集。血漿（plasma）：使用肝素鋰和

EDTA-K3抗凝。尿液（urine）：以

ElecsysDiluentMultiAssay1:10

稀釋標本用量（volume）：老例抽血量最少2ml,最少血清/血漿標本量為,單次用量50ul,儀器加樣量(samplevolume)20ul。標本儲蓄條件(samplestorage)：標本在15-25℃可保留4小時，2-8℃可保留24小時，在-20℃可保留1個月。樣品最多能夠凍融1次。如標本中有積淀出現，必定先作離心辦理再進行解析。已經加熱失活的標本無法解析。使用疊氮化物為牢固劑的標本或質控液無法解析。拒收(specimenrejection)：溶血、脂血、黃疸標本拒收，3試劑（Reagent）：ElecsysC-肽試劑盒，貨號0903.1.1試劑內組份：試劑包裝，100個測試：鏈親和素包被的微粒R1：生物素抗C-肽單克隆抗體R2：釕復合體標記的抗

C-肽特異性單克隆抗體3.1.2未隨試劑盒供應的組分ElecsysC

肽定標液（

C-PCalSet

）貨號

090伯樂質控品（

BL）1和

3ElecsysDiluentMultiAssa

稀釋液Elecsys

系統緩沖液

(ProCellM)

貨號Elecsys

檢測池洗液

(CleanCellM)

貨號Elecsys

系統緩沖液

/測量池沖刷液預熱杯

(PC/CC-Cup)

貨號001Elecsys

解析杯/解析吸頭盒

(AssayCups/AssayTipsCombimagazineM)

貨號Elecsys

廢物袋(WasteLiner)

貨號001Elecsys系統沖刷液(SysClean)貨號3.1.3儲蓄及牢固性存放于2－8℃。請垂直擺放ElecsysC肽試劑盒，以保證使用前自動混雜過程中微粒完好有效。牢固性：2－8℃（未開封）：有效期內均可使用。開封后，2－8℃：可存放12周。在Elecsy601解析儀上：可保留8周。試劑準備(reagentpreparation)：將試劑從冰箱中取出并平衡至室溫；不同樣批號的試劑不能夠混用；新試劑與前一批號試劑不同樣，則需做樣本結果的比對，并記錄，差異在允許范圍內方可使用。Putreagentfromrefrigeratorytoroomtemperatureforpropertime;Newreagentlotsmustbetestedinparallelwitholdlotsbeforeorconcurrentlywithbeingplacedinservicetoensurethatthecalibrationofthenewlotofreagenthasmaintainedconsistentresultsforpatientspecimens.Recordtheresults.儀器（Instrument）：ElecsysCobas601。儀器準備（Prepareapparatus）：使用前保證儀器水通道、液體垃圾通道暢達，保證系統沖刷液（SysClean）、測量池沖刷液(CleanCellM)、反應杯/吸樣頭盒（AssayCups/AssayTipsCombimagazineM)、廢物袋(WasteLiner)、系統緩沖液(ProCellM)的足夠。爾后開機，在儀器的試劑盤中加入所需的試劑。若是特別情況下儀器無法閱讀條形碼，能夠手工輸入15位數字。將冷藏試劑預溫到20度后放置于儀器的試劑盤上，防范產生泡沫。儀器自動控制試劑溫度和開/并試劑瓶蓋。5安全防范（SafetyPrecautions）：操作時必定衣著手套和工作服；工作后的臺面應消毒擦洗；用過的加樣槍優等耗材應作為醫用垃圾辦理；為了防范形成氣溶膠，所有樣品盡可能不要在空氣中間裸露太長時間；遇到樣本灑出，被污染的地域應馬上用次氯酸鈉溶液沖刷，擦拭用的物品應扔掉在標有生物污染的垃圾筒中。6校準（Calibration）：校準品：ElecsysCobas601原裝校準品。要求在有效期內使用，過期的校準液應停止使用，保留于2-8℃可牢固到有效期。Stopusingoverduecalibrationmaterial。Useitwithinexpirationdate，storagein2-8℃。復溶：用復溶專用加樣槍正確吸取1ml去離子水于瓶中，溶解靜置30分鐘，混勻并用蓋容器分裝200ul/個，注明配制日期，校準品批號，配制人以及有效日期，于-20℃凍存備用。Labelconfectingdate,calibrationlot。Personwhoconfected，expirationdate

。復溶后校準品成分的牢固性：保留于-20℃，可牢固2個月。當以下任何一種情況出現時，請重新校準：(If

one

of

the

two

happened，recalibration)試劑批號改變(Reagentlotchanges)(同一批號的試劑盒在解析儀上使用高出

在試劑盒被解析儀鑒別后的1個月（28天）。

24小時內)同一試劑盒在解析儀上使用高出

7天依照需要：如質控數據高出額定的限度。Recalibrationbasedonqualitycontrolproblem定標核實：沒有必要對定標進行核實。解析儀的軟件會自動對定標結果的正確性進行解析，當出現任何誤差時系統會自動提示。步驟：在校準（CALIBRATION）菜單中編寫校準液的資料，在兩個樣本管中分別加入最少200ul的1、2校準品并放到已指定地址的校準架中，后放入樣本通道中。爾后在計算機屏幕上采用相應的項目及所需的定標方式（BLANK、2POINTS或FULL、SPAN），后點擊SAVE鍵，再點擊START鍵。結果判斷：儀器會自動提示可否經過校準。若是未經過會有相應的原因講解以及解決方法的指導。校準后必定及時做質控且須獲得經過。校準周期：質控在控的情況下一個月內對同批號試劑有效。若是質控高出限度有需要校準時，應重新校準。7操作過程（ProceduralSteps）：樣本準備：先檢查標本可否合格（標本與作業指導書上標本要求可否一致），核對驗單上的條碼和標本上的條碼可否一致，按樣本每天唯一號原則進行編號。將帶有編號的標本離心取血清(serum)/血漿（plasma），將待測物加入相應的樣本管。取出空樣本架，將含有血清（serum）/血漿（plasma）或尿（urine）液的樣本管加入樣品架中，并將實驗號與對應的樣品架地址記錄下來，將樣品架推入樣品槽中。因需要必然量樣本做底，每個樣品管最少加入樣品200ul（樣本用量75ul）。實驗號與樣本架號“一一”對應以便于聯機。在[WORKLIST]界面點[TestSelection]輸入實驗號，指定C-P項目。結果出來后，在[WORKLIST]中的[DataReview]可看到該樣本所做的項目和結果。點擊打印，作為原始記錄加以保留，并且操作者要簽上名字及操作日期。數據聯機入系統：計算機：設備管理→接口管理→點擊羅氏全自動化學發光儀→點擊開始，出現預辦理窗口→儀器：進入[WORKLIST]中的[DataReview]→選擇需要傳達實驗號→按Senttohos，再按sent，結果即傳輸。數據審察：在保證儀器與電腦數據辦理系統正常聯機的情況下（即數據傳達和接收無中斷），仔細核對每一個數據有無錯誤（如：誤傳、漏傳），可否與臨床診斷相切合，如發現異常情況，應仔細核對實驗號與樣本架號，原始導出結果與系統結果可否對應等，如有必要，復查該結果。8質量控制（Qualitycontrol）：使用伯樂質控品1和3做質控。在測準時，對于不同樣濃度范圍的標本，每24小時必定進行一次質控測試。每次更換試劑盒或進行定標后也須進行質控測試。每個實驗室須依照各自的情況確定合適的質控間隔和范圍。測定值必定處于規定的范圍內。C-P最大贊同誤差ALE為25%，室內質控CV為L:;H:;偏移為%,過程牢固性<2%.依照公式:△SEc=（ALE-Bias）/利用計算軟件可得,低值選擇的質控規則:13s/22s/R4s/41sN=2;高值選擇的質控規則13s/22s/R4s/41sN=2,當質控失控時，應依照《室內質量控制程序》辦理9稀釋（Dilution）：血清（serum）和血漿（plasma）：盡管因其較高的測定范圍一般無需對標本進行稀釋(diluent)，但C-肽濃度高出檢測范圍的標本可用ElecsysDiluentMultiAssay稀釋(diluent)。建議對標本進行1:10稀釋(diluent)（可由解析儀自動稀釋(diluent)或人工稀釋(diluent)）。稀釋(diluent)后標本C-肽濃度必須>ml(>4ng/ml)。如用人工稀釋(diluent)，則要將測定結果乘上稀釋(diluent)的倍數。如用解析儀自動稀釋(diluent)，在計算測定結果時儀器會自動將稀釋(diluent)因素考慮在內。尿液（urine）：檢測前所有尿液（urine）標本必定有ElecsysDiluentMultiAssay稀釋(diluent)。如用解析儀稀釋(diluent)，在計算測定結果時儀器會自動將稀釋(diluent)因素考慮在內。若尿液（urine）標本C-肽濃度高出檢測范圍，可用ElecsysDiluentMultiAssay進行1:20或更高比率稀釋(diluent)后重新測定稀釋(diluent)（解析儀自動或人工稀釋(diluent)）。稀釋(diluent)后標本C-肽濃度必定>ml(>4ng/ml)。如用人工稀釋(diluent)，則要將測定結果乘上稀釋(diluent)的倍數。如用解析儀自動稀釋(diluent)，在計算測定結果時儀器會自動將稀釋(diluent)因素考慮在內。10計算（Calculations）：解析儀自動計算得出每份標本的測定濃度（單位可為ug/L或ng/ml）。11參照范圍（ExpectedValues）：血清（serum）和血漿（plasma）：空腹結果講解（InterpretationofResults）：能夠直接報告所檢測結果，不用進行結果講解。13方法的限制性（MethodLimitations）：精美度（Precision）：13.1.1批間精美度：MeanSDCV（%）13.1.2批內精美度：MeanSDCV（%）矯捷度（Sensitivity）：ng/ml特異性（Specificity）：C肽試劑盒采用兩種人C-肽特異性單克隆抗體。這些抗體與人胰島素原的C-鏈有交織反應，并且可能與部分合成的胰島素原（分裂產物）有交織反應。但空腹健康個體的胰島素原濃度和分裂產物濃度比C-肽濃度低100倍，因此，這種交織反應沒有臨床意義。據報道，胰島瘤患者中胰島素原濃度比空腹健康個體中胰島素原濃度高60倍。解析測試范圍（AMR）：廠商血清和血漿為ml(由系統主曲線的最低限和最高限決定)。C-肽濃度低于檢測最低限則報告為<ml，而高于檢測上限則報告為>40ng/ml也許標本以更高比率稀釋后重新測定。病人結果報告范圍（CRR）：~ml（廠商mL）C-肽濃度低于檢測最低限則報告為<ml，而高于檢測上限則報告為>400ng/ml也許標本以更高比率稀釋后重新測定。攪亂物質（InterferingSubstances）：測定結果不受黃疸（膽紅素<855umol/l或<50mg/dl）、溶血（hemolysis）（血紅蛋白<l或<1.8g/dl）、高脂血（癥）（內脂<2000mg/dl）和生物素(<205nmol/ml，或<50ng/ml的影響。標準：回收率90-110%。對于因某些疾病需要而接受高劑量生物素治療的患者（>5mg/天），必定在末次生物素治療8小時后收集標本。濃度達1200IU/ml的類風濕因子對檢測沒有攪亂。當C肽濃度達60nmol/l(180ng/ml)時，未出現高劑量鈞狀效應。體外對17種血清常用藥物和13種尿液常用藥物進行試驗未發現藥物對本測定結果有影響。由于本試劑盒使用單克隆鼠抗體，因此因治療也許診斷需要而接受單克隆鼠抗體的患難與患者，其標本而影響測定結果。ElecsysC肽附帶有試劑增加劑以減少以上不良影響。因此，在診斷中必定結合患者病史、各項實驗室檢查及其他臨床資料來綜合評估測定結果。注意事項（Notices）：僅供體外診斷使用。在使用原始試管辦理標本時，應依照試管生產商所供應的指導。檢測前，請保證患者標本、定標淮及質控液放置在20-25℃的環境中。由于蒸發因素的影響，標本、定標液及質控液在放入解析儀后請在2小時內完成測定。試劑：2～8℃保留