山東大學實驗報告2015年5月31日姓名班級13級生命基地班學號同組者科目細胞生物學實驗實驗題目染色體標本制作與觀察第II.實驗分析結果分析：

本實驗采用的是小鼠的睪丸細胞，在40倍鏡下觀察，視野中可見許多未成熟的精子（如圖1），另外能夠找到很多處于分裂間期和前期的染色體，其凝集程度不是很高；分析可知，處于減數第一次分裂的中期的細胞是二倍體，可觀察到20對即40條染色體，有些在進行減數第二次分裂中期，這樣的細胞是單倍體，應有20條染色體。觀察中會出現少于20條染色體的情況，或者多于20條少于40條的情況，可能原因：1）在制備細胞懸液過程中有染色體的丟失。如用吸管吹散細胞時用力過大造成細胞破裂，使得染色體彌散在溶液中，在隨后的離心中將會丟失。2）在距離載玻片一定高度滴片時因高度過高，使得染色體過于分散而導致丟失。3）滴完片在敲打載玻片的過程中導致染色體的丟失。4）染色時，由于在染液中染了30min，部分染色體可能會隨染液丟失。實驗中沒有觀察到完全展開好的染色體，染色體大多呈棒狀而不是V字形，這說明在對染色體展平的步驟沒有做好，以后應改進。

做好本次實驗的關鍵步驟：低滲處理過程。低滲溶液的量、處理時間均與細胞的數量有關。低滲過度，細胞會破裂；低滲不足則染色體聚在一起分散不開。離心速度以及離心時間也能影響染色體標本的制備。離心速度過大或離心時間過長,則會引起細胞破裂；反之,離心速度過小或離心時間過短,則細胞沉降不下來,則會引起大量細胞的丟失。3）固定液要隨用隨配。固定徹底后再打散細胞團塊，否則細胞容易破碎，染色體分散亦受到影響。4）用吸管吹散細胞時用力必須盡量輕柔。用力過大則會造成細胞破裂，而染色體也會彌散在溶液中,在隨后的離心中將會丟失。5）載玻片要預冷。拿出預先冰好的載玻片后要立即滴加細胞懸液，這就需要在拿載玻片之前先用滴管吸好液體，若玻片的冷卻溫度不夠，則會影響染色體的附著和鋪展。6)滴片時的高度很重要。高度過低細胞不會破裂，過高則染色體過于分散甚至丟失,無法辨別出染色體的準確數量。在觀察中還發現，視野中細胞不是很分散，存在大量細胞團，這可以歸結為多方面原因。首先，如果在剪碎組織時沒有剪好，則會導致細胞勻漿中含有大量細胞團，由于這些細胞聚集在一起，就有一定的組織強度，十幾厘米的高度很難摔碎。其次，如果低滲不完全，細胞可能膨脹程度不夠，很難摔碎。再次，如果混勻細胞時沒有完全混勻，則會導致細胞聚集在一起，敲細胞時很難敲碎，同樣觀察不到理想的效果；如果吹得太用力，則會導致細胞被吹碎，視野中有大量細胞碎片，影響觀察。最后，如果滴片時的高度不夠，細胞分散不好，也很能破碎，染色體也就不能很好地展開。【注意事項】1、注射秋水仙素：應選擇腹腔注射，如果觀察到小鼠被注射后皮膚隆起，則表明注射到皮下，應重新注射；如果在拔出針時觀察到有血珠溢出，則是因為注射時損傷了部分器官或血管，秋水仙素會隨血液傳遞到全身，其傳遞速度會加快，其死亡時間可能小于15-16h，應隨時觀察小鼠，以防其突然死亡。即使注射到小鼠的腹腔中，也很有可能注射到起脂肪組織中，使小鼠的死亡時間變慢。因此應根據具體實驗，適當調整注射時間和等待時間。

2、處死小鼠：最好選擇在小鼠將要死亡時處死小鼠，因為此時，秋水仙素的作用發揮到最大，分裂期中期的細胞最多；如果等小鼠死亡后處死小鼠，小鼠尸體可能已僵硬，難以取到精巢。

3、剪碎組織：可以取少于1mL0.3%

KCl溶液，沒過杯底即可，如果液體太多則很難剪到組織，比較浪費時間。

4、銅網過濾：應把組織盡量剪碎后再用銅網過濾；如果燒杯中仍有較大顆粒，則小心不要把那些顆粒倒出，在燒杯中再加入少量0.3%

KCl溶液，繼續剪；如果銅網上還有很多比較大的顆粒，先用少量0.3%

KCl溶液將其沖入燒杯，再進行剪碎。

5、實驗步驟中的（4）所提到的30min包括（5）中的離心配平時間，因此，真正的靜置時間應少于30mins，細胞與0.3%

KCl接觸的總時間應為45mins左右。6、離心：離心的轉速是800-1000r/min，這樣低的轉速是為了防止細胞破裂。

7、再次離心和固定：這樣做是因為第一次離心之前細胞經過了低滲處理，雖然抽去了上清液，但是不可能抽干凈，因此，再次離心保證細胞離開低滲環境。8、吹散細胞：應該輕輕地吹細胞，如果太用力會導致細胞破裂。

9、摔碎細胞：摔碎細胞時應注意滴管與載玻片的距離，如果距離太小，則細胞很難摔碎，不會觀察到染色體；但如果距離太大，