實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血沉測(cè)定及白細(xì)胞計(jì)數(shù)組員：王芳軍,劉巧艷，趙素云，胡博一、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)目的

掌握網(wǎng)織紅細(xì)胞（Ret)試管法計(jì)數(shù)的原理及操作方法。原理

網(wǎng)織紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)殘存少量核蛋白體及核糖核酸等嗜堿性物質(zhì)，經(jīng)煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)等染液活體染色后，呈藍(lán)色網(wǎng)狀或點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)，可與成熟紅細(xì)胞相區(qū)別。器材

顯微鏡、試管、吸管、玻片、推片、香柏油、擦鏡紙、擦鏡液試劑

新亞甲藍(lán)標(biāo)本新鮮全血血涂片制備推片載玻片血液將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚薄取決于速度和角度。一張滿意的血涂片應(yīng)厚薄均勻

頭體尾涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭部寫上姓名和編號(hào)李四B123參考區(qū)間成人、兒童：0.5%-1.5%新生兒：2.0%-6.0%注意事項(xiàng)1.試劑準(zhǔn)備推薦使用新亞甲藍(lán)染液，試劑應(yīng)定期配制，用前過濾。2.染色染液與血液比以1:1為宜,染色時(shí)間不能過短。試劑用后及時(shí)蓋好蓋子，以免揮發(fā)。3.標(biāo)本應(yīng)及時(shí)染色，及時(shí)測(cè)定。4.計(jì)數(shù)選擇紅細(xì)胞分布均勻，網(wǎng)織紅細(xì)胞著色好的、背景清晰的部位計(jì)數(shù)。應(yīng)兼顧血片邊緣和尾部。5.觀察選擇紅細(xì)胞分布均勻，網(wǎng)織紅細(xì)胞著色好的部位計(jì)數(shù)，凡含有兩個(gè)以上網(wǎng)織顆粒的細(xì)胞均應(yīng)計(jì)為網(wǎng)織紅細(xì)胞。由于網(wǎng)織紅細(xì)胞體積較大，故應(yīng)兼顧血片邊緣和尾部。應(yīng)注意網(wǎng)織紅細(xì)胞與HbH包涵體的鑒別，前者為藍(lán)綠色網(wǎng)織狀或點(diǎn)粒狀結(jié)構(gòu)，分布不均，后者為藍(lán)綠色圓形小體，均勻散在于整個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)，一般在溫育10-60分鐘后出現(xiàn)。6.結(jié)果評(píng)價(jià)（1）95%可信限法：網(wǎng)織紅細(xì)胞的95%可信區(qū)間是R±2sxp.Sxp為標(biāo)準(zhǔn)誤，R為網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，N為所數(shù)紅細(xì)胞數(shù)。正常網(wǎng)織紅細(xì)胞在整個(gè)紅細(xì)胞中所占比例很低，但其絕對(duì)值卻是很高的。通過計(jì)算確定網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的95%可信區(qū)間為0.028-0.052。對(duì)標(biāo)本再計(jì)數(shù)一次，若結(jié)果落入此范圍內(nèi)，說明兩次計(jì)數(shù)無顯著性差異，若否，則應(yīng)進(jìn)行第三次計(jì)數(shù)。（2）比值法R1，R2分別為兩次計(jì)數(shù)結(jié)果，N為網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。R<2時(shí)結(jié)果可靠1.采血采靜脈血1.6ml加入含0.4ml109mmol/L枸櫞酸鈉溶液抗凝劑的采血管中（即采血量到采血管2ml刻度線處），混勻。2.吸血混勻血吸入血沉管內(nèi)至刻度“0”處，拭去管外殘余血。3.立血沉管將血沉管直立于血沉架上。4.讀數(shù)

1h末準(zhǔn)確讀取紅細(xì)胞下沉后露出的血漿高度。5.報(bào)告方式

XXmm/h操作步驟注意事項(xiàng)

1.嚴(yán)格控制采血量，使抗凝劑與血液比例為1：4。2.血沉管應(yīng)垂直放置，不得傾斜。

3.測(cè)量時(shí)，血沉架應(yīng)避免直接光照、移動(dòng)和振動(dòng)。4.本實(shí)驗(yàn)最適宜溫度為18～25℃，并要求在采血后2h內(nèi)完成。5.紅細(xì)胞沉降率在1h沉降過程中，