專題一基因工程專題一基因工程

假如你是一位育種專家，你能培育出下面幾種“生物”嗎？請問你準備用什么方法？假如你是一位育種專家，你能培育出下面幾種“生物”嗎？請問你這些定向改造基因的設想能實現嗎？經過多年的努力，科學家終于在20世紀70年代創立了可以定向改造生物的新技術

——基因工程這些定向改造基因的設想能實現嗎？經過多年的努力，科學家終于在一.基因工程的概念DNA重組技術生物體外基因DNA分子水平定向改造生物基因重組

基因工程是指按照人們的愿望，進行嚴格的設計，并通過體外DNA重組和轉基因等技術，賦予生物以新的遺傳特性，從而創造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產品。由于基因工程是在DNA分子水平上進行設計和施工的。因此又叫做DNA重組技術。

一.基因工程的概念DNA重組技術生物體外基因DNA分子水平定1.1DNA重組技術的基本工具三種基本工具剪刀針線運輸車限制性核酸內切酶DNA連接酶運載體1.1DNA重組技術的基本工具三種基本工具剪刀針線運輸車問題探討：蘇云金芽孢桿菌毒蛋白普通棉花抗蟲棉問題探討：蘇云金芽孢桿菌毒蛋白普通棉花抗蟲棉基因工程培育抗蟲棉的簡要過程普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌（有抗蟲性狀）提取抗蟲基因棉花細胞(含抗蟲基因)棉花植株(有抗蟲特性)重組DNA導入形成培育抗蟲棉的關鍵步驟有哪些？基因工程培育抗蟲棉的簡要過程普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢基因工程培育抗蟲棉的關鍵步驟：關鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿菌細胞內提取出來關鍵步驟二：抗蟲基因與DNA“縫合”關鍵步驟三：抗蟲基因進入棉花細胞“分子手術刀”—限制性核酸內切酶“分子縫合針”—DNA連接酶“分子運輸車”—基因進入受體細胞的載體基因工程培育抗蟲棉的關鍵步驟：關鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽⒈主要來源：（1）限制性核酸內切酶——“分子手術刀”原核生物限制酶就是細菌的一種防御性工具，切割外源DNA、使之失效，從而達到保護自身的目的。簡稱：限制酶分布：主要在原核生物中你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？二.基因工程的工具⒈主要來源：（1）限制性核酸內切酶——“分子手術刀”原核生物原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機制，以防止外來病原物的侵害。限制酶就是細菌的一種防御性工具，當外源DNA侵入時，會利用限制酶將外源DNA切割掉，以保證自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，從而達到保護自身的目的。限制酶在原核生物中的作用原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在長期的進化過程中T磷酸二酯鍵1234512345A2、作用特點：T磷酸二酯鍵1234512345A2、作用特點：DNA重組技術的基本工具概述經典課件2、作用特點：識別特定核苷酸序列,切斷兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。具有特異性。一種限制酶一般只能識別一種特定的核苷酸序列，并且能在特定的切點上切割DNA分子。（1）限制性核酸內切酶——“分子手術刀”3、限制酶識別序列大多數限制酶的識別序列由6個核苷酸組成少數的識別序列由4、5或8個核苷酸組成2、作用特點：識別特定核苷酸序列,切斷兩個具有特異性。一種限思考與探究P72、為什么限制酶不剪切細菌本身的DNA？

通過長期的進化，含有某種限制酶的細胞，其DNA分子中或者不具備這種限制酶的識別切割序列，或者通過甲基化酶將甲基轉移到所識別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。這樣，盡管細菌中含有某種限制酶也不會使自身的DNA被切斷，并且可以防止外源DNA的入侵。思考與探究P72、為什么限制酶不剪切細菌本身的DNA？

限制酶所識別的序列，無論是6個堿基還是4個堿基，都可以找到一條中心軸線（如圖），中軸線兩側的雙鏈DNA上的堿基是反向、對稱、重復排列的。想一想限制酶所識別的序列有什么特點？限制酶所識別的序列，無論是6個堿基還是4個堿限制酶所識別的序列的特點

中心軸線兩側的雙鏈DNA上的堿基是反向對稱重復排列的。EcoRⅠSmaⅠ3、限制性核酸內切酶的作用特點能識別特定核苷酸序列；（專一性）限制酶所識別的序列的特點中心軸線兩側的雙鏈DNA3、限制性核酸內切酶的作用特點：②從特定部位的兩

個核苷酸之間切開。（切點：磷酸二酯鍵）T1234512345A（專一性）3、限制性核酸內切酶的作用特點：T1234512345DNA重組技術的基本工具概述經典課件SmaⅠ平末端平末端4.限制酶的作用結果：SmaⅠ平末端平末端4.限制酶的作用結果：

EcoRⅠ黏性末端黏性末端4.限制酶的作用結果：EcoRⅠ黏性末端黏性末端4.限制酶的作用結果：

EcoRⅠ黏性末端黏性末端重復演示EcoRⅠ黏性末端黏性末端重復演示

EcoRⅠ黏性末端黏性末端

大腸桿菌(E.coli)的一種限制酶EcoRΙ能識別GAATTC序列，并在G和A之間切開。EcoRⅠ黏性末端黏性末端大腸桿菌什么叫黏性末端？

被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個伸出的核苷酸，他們之間正好互補配對，這樣的切口叫黏性末端。什么叫黏性末端？被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切SmaⅠ平末端平末端限制酶SmaΙ能識別GGGCCC序列，并在G和C之間切開。SmaⅠ平末端平末端限制酶SmaΙ能識別GGGCCC序平末端

當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。平末端當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同來源的DNA片段混合將不同種來源的DNA片段連接起來生物A基因片段生物B基因片段……G

AATTC…………CTTAA

G…………G

AATTC…………CTTAA

G……酶切……GAATTC…………GAATTC……EcoRⅠ……GAA（1）限制性核酸內切酶——“分子手術刀”4.作用結果：產生黏性末端或平末端（1）限制性核酸內切酶——“分子手術刀”4.作用結果：產生黏要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產生幾個黏性(平)末端？要切兩個切口，產生四個黏性(平)末端。如果把兩種來源不同的DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？

會產生相同的黏性(平)末端，然后讓兩者的黏性(平)末端黏合起來，就似乎可以合成重組的DNA分子了。思考?要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產生幾（2）“分子縫合針”——DNA連接酶①作用:

把切下來的DNA片段拼接成新的DNA，即將脫氧核糖和磷酸連接起來.②作用原理：恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵（2）“分子縫合針”——DNA連接酶①作用:

可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶即恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·co

T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低T4DNA連接酶T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效③類型：E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源功能大腸桿菌T4噬菌體恢復磷酸二酯鍵只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端(效率較低)相同點差別（2）“分子縫合針”——DNA連接酶③類型：E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源功能大腸DNA連接酶尋根問底P6DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎?為什么?DNA連接酶尋根問底P6DNA連接酶與DNA聚合酶是一回AG

T

AC

TA

A

T

DNA母鏈DNA聚合酶DNA聚合酶TTAGATATCCGACGGTTTAA……………………………………………………AGTACTAATDNADNA聚合酶DNA聚合酶1)只能將單個核苷酸連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵形成磷酸二酯鍵1)在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵2)以一條DNA鏈為模板，將單個核苷酸通過磷酸二酯鍵連接成一條互補的DNA鏈2)能將DNA雙鏈上的兩個缺口同時連接起來，不需要模板1)只能將單個核苷酸連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵形【探規尋律】幾種酶的作用部位限制性核酸內切酶、DNA連接酶、DNA聚合酶作用于①部位,DNA解旋酶作用于②部位。【探規尋律】幾種酶的作用部位（3）“分子運輸車”

——基因進入受體細胞的載體⒈載體需要的條件：

⑴有1~多個限制酶切點

⑵對受體細胞無害

⑶導入基因能在受體細胞中復制、表達

⑷有某些標記基因，便于篩選⒉常用運載體：

⑴質粒

⑵動植物病毒

（3）λ噬菌體的衍生物

⑶假如目的基因導入受體細胞后不能復制或不能轉錄，轉基因生物能有預想的效果嗎？

⑴作為分子運輸車——載體，如果沒有切割位點將會怎樣？

⑵霍亂菌的質粒多個限制酶切點，你會用它來做分子運輸車嗎？

⑷目的基因有沒有進入受體細胞，如何去發現？

（最常用）（3）“分子運輸車”

—

質粒是一種裸露的、結構簡單、獨立于細菌擬核DNA之外，并且有自我復制能力的雙鏈環狀DNA分子。質粒是一種裸露的、結構簡單、獨立于細菌擬核DNA之外，并且DNA重組技術的基本工具概述經典課件常用的載體質粒：能復制并帶著插入的目的基因一起復制有切割位點有標記基因的存在，可用含氨芐青霉素的培養基鑒別獨立于細菌擬核DNA之外的一種可以自我復制的小型環狀的DNA分子常用的載體質粒：能復制并帶著插入的目的基因一起復制有切割位點1）載體DNA必需有一個或多個限制酶的切割位點，以便目的基因可以插入到載體上去。這些供目的基因插入的限制酶的切點所處的位置，還必須是在質粒本身需要的基因片段之外，這樣才不至于因目的基因的插入而失活。2）載體DNA必需具備自我復制的能力，或整合到受體染色體DNA上隨染色體DNA的復制而同步復制。3）載體DNA必需帶有標記基因，以便重組后進行重組子的篩選。4）載體DNA必需是安全的，不會對受體細胞有害，或不能進入到除受體細胞外的其他生物細胞中去。5）載體DNA分子大小應適合，以便提取和在體外進行操作，太大就不便操作。實際上自然存在的質粒DNA分子并不完全具備上述條件，都要進行人工改造后才能用于基因工程操作。1）載體DNA必需有一個或多個限制酶的切割位點，以便目的基小結基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有專一性(識別序列)切開DNA分子的磷酸二酯鍵產生黏末端或平末端DNA連接酶連接磷酸二酯鍵種類E.coliDNA連接酶T4

DNA連接酶運載工具具備的條件能在宿主細胞中自我復制并穩定存在具一種至多種限制酶切點具標記基因質粒、λ噬菌體衍生物、動植物病毒小結基因工程限制酶主要存在于原核生物中DNA連連接磷酸二酯基因工程的基本操作程序1、目的基因的獲取2、基因表達載體的構建3、將目的基因導入受體細胞4、目的基因的檢測與鑒定基因工程的基本操作程序1、目的基因的獲取2、基因表達載體的構1.限制酶在DNA的任何部位都能將DNA切開嗎？以下是四種不同限制酶切割形成的DNA片段:你是否能用DNA連接酶將它們連接起來？…CTGCA

…G

①…AC…TG②

CG…GC…③…G

…CTTAA

④G…

ACGTC…

⑤…GC…CG⑥GT…

CA…

⑦AATTC…G…⑧②和⑦能連接形成…AC…TGGT…

CA…

④和⑧能連接形成…G

…CTTAA

AATTC…G…

CG…GC…

…GC…CG

③和⑥能連接形成①和⑤能連接形成…CTGCA

…G

G…

ACGTC…

反向對稱思考與探究P71.限制酶在DNA的任何部位都能將DNA切開嗎？以下是四種不1.個人墜落防護系統是用來把工作人員與固定掛點連接起來所必需的一整套產品，可完全防止出現從高處墜落的情況或是能完全地制止這種情況的發生。2.單獨使用這些產品不能對墜落提供防護。但是，如果這些構件能夠良好的組合在一起，那么它們將形成一種對工作場所的安全和整體的墜落防護計劃都極其重要的個人墜落防護系統。3.如果安全繩沒有垂直地固定在工作場所上方，發生墜落時將使得工人在空中出現搖擺，并可能撞到其他物體上或撞到地面造成傷害。4.一個有才能的領導者會給所在的團隊或組織帶來成功的希望，使人們對他產生一種敬佩感。敬佩感是一種心理磁鐵，它會吸引人們自覺去接受影響力。5.老虎型給他明確方向的語言、讓他知道做這件事對他的好處，說話中要給他很肯定的感覺，不要懷疑他或不放心，直接說明不要拐彎抹角，請他記錄彼此溝通的內容。6.孔雀型先聊輕松的話題再進入主題、運用圖畫方式進行溝通，對于事情就事論事不責罵當事人，給他贊揚及鼓勵，多運用一些肢休語言，可到熱鬧場合進行洽談。7.無尾熊型不要強勢與他溝通，溝通中運用一些溫馨的語言，可聊聊天再進入主題，交待任務不要一次太多，讓他知道你會協助他，經常尋問這事情的進展，讓他知道在溝通中不要有所忌諱。8.貓頭鷹型不要強勢與他溝通，交待任務最好自行確認后再說，不講不實際的事不說沒有憑證的話，說話要完整化，任務分配時可分解數項告知，讓他知道事情做完的成敗會有人負責，對事不對人，不要批評他的專業。演示完畢，感謝聆聽！1.個人墜落防護系統是用來把工作人員與固定掛點連接起來所必需專題一基因工程專題一基因工程

假如你是一位育種專家，你能培育出下面幾種“生物”嗎？請問你準備用什么方法？假如你是一位育種專家，你能培育出下面幾種“生物”嗎？請問你這些定向改造基因的設想能實現嗎？經過多年的努力，科學家終于在20世紀70年代創立了可以定向改造生物的新技術

——基因工程這些定向改造基因的設想能實現嗎？經過多年的努力，科學家終于在一.基因工程的概念DNA重組技術生物體外基因DNA分子水平定向改造生物基因重組

基因工程是指按照人們的愿望，進行嚴格的設計，并通過體外DNA重組和轉基因等技術，賦予生物以新的遺傳特性，從而創造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產品。由于基因工程是在DNA分子水平上進行設計和施工的。因此又叫做DNA重組技術。

一.基因工程的概念DNA重組技術生物體外基因DNA分子水平定1.1DNA重組技術的基本工具三種基本工具剪刀針線運輸車限制性核酸內切酶DNA連接酶運載體1.1DNA重組技術的基本工具三種基本工具剪刀針線運輸車問題探討：蘇云金芽孢桿菌毒蛋白普通棉花抗蟲棉問題探討：蘇云金芽孢桿菌毒蛋白普通棉花抗蟲棉基因工程培育抗蟲棉的簡要過程普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌（有抗蟲性狀）提取抗蟲基因棉花細胞(含抗蟲基因)棉花植株(有抗蟲特性)重組DNA導入形成培育抗蟲棉的關鍵步驟有哪些？基因工程培育抗蟲棉的簡要過程普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢基因工程培育抗蟲棉的關鍵步驟：關鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿菌細胞內提取出來關鍵步驟二：抗蟲基因與DNA“縫合”關鍵步驟三：抗蟲基因進入棉花細胞“分子手術刀”—限制性核酸內切酶“分子縫合針”—DNA連接酶“分子運輸車”—基因進入受體細胞的載體基因工程培育抗蟲棉的關鍵步驟：關鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽⒈主要來源：（1）限制性核酸內切酶——“分子手術刀”原核生物限制酶就是細菌的一種防御性工具，切割外源DNA、使之失效，從而達到保護自身的目的。簡稱：限制酶分布：主要在原核生物中你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？二.基因工程的工具⒈主要來源：（1）限制性核酸內切酶——“分子手術刀”原核生物原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機制，以防止外來病原物的侵害。限制酶就是細菌的一種防御性工具，當外源DNA侵入時，會利用限制酶將外源DNA切割掉，以保證自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，從而達到保護自身的目的。限制酶在原核生物中的作用原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在長期的進化過程中T磷酸二酯鍵1234512345A2、作用特點：T磷酸二酯鍵1234512345A2、作用特點：DNA重組技術的基本工具概述經典課件2、作用特點：識別特定核苷酸序列,切斷兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。具有特異性。一種限制酶一般只能識別一種特定的核苷酸序列，并且能在特定的切點上切割DNA分子。（1）限制性核酸內切酶——“分子手術刀”3、限制酶識別序列大多數限制酶的識別序列由6個核苷酸組成少數的識別序列由4、5或8個核苷酸組成2、作用特點：識別特定核苷酸序列,切斷兩個具有特異性。一種限思考與探究P72、為什么限制酶不剪切細菌本身的DNA？

通過長期的進化，含有某種限制酶的細胞，其DNA分子中或者不具備這種限制酶的識別切割序列，或者通過甲基化酶將甲基轉移到所識別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。這樣，盡管細菌中含有某種限制酶也不會使自身的DNA被切斷，并且可以防止外源DNA的入侵。思考與探究P72、為什么限制酶不剪切細菌本身的DNA？

限制酶所識別的序列，無論是6個堿基還是4個堿基，都可以找到一條中心軸線（如圖），中軸線兩側的雙鏈DNA上的堿基是反向、對稱、重復排列的。想一想限制酶所識別的序列有什么特點？限制酶所識別的序列，無論是6個堿基還是4個堿限制酶所識別的序列的特點

中心軸線兩側的雙鏈DNA上的堿基是反向對稱重復排列的。EcoRⅠSmaⅠ3、限制性核酸內切酶的作用特點能識別特定核苷酸序列；（專一性）限制酶所識別的序列的特點中心軸線兩側的雙鏈DNA3、限制性核酸內切酶的作用特點：②從特定部位的兩

個核苷酸之間切開。（切點：磷酸二酯鍵）T1234512345A（專一性）3、限制性核酸內切酶的作用特點：T1234512345DNA重組技術的基本工具概述經典課件SmaⅠ平末端平末端4.限制酶的作用結果：SmaⅠ平末端平末端4.限制酶的作用結果：

EcoRⅠ黏性末端黏性末端4.限制酶的作用結果：EcoRⅠ黏性末端黏性末端4.限制酶的作用結果：

EcoRⅠ黏性末端黏性末端重復演示EcoRⅠ黏性末端黏性末端重復演示

EcoRⅠ黏性末端黏性末端

大腸桿菌(E.coli)的一種限制酶EcoRΙ能識別GAATTC序列，并在G和A之間切開。EcoRⅠ黏性末端黏性末端大腸桿菌什么叫黏性末端？

被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個伸出的核苷酸，他們之間正好互補配對，這樣的切口叫黏性末端。什么叫黏性末端？被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切SmaⅠ平末端平末端限制酶SmaΙ能識別GGGCCC序列，并在G和C之間切開。SmaⅠ平末端平末端限制酶SmaΙ能識別GGGCCC序平末端

當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。平末端當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同來源的DNA片段混合將不同種來源的DNA片段連接起來生物A基因片段生物B基因片段……G

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G……酶切……GAATTC…………GAATTC……EcoRⅠ……GAA（1）限制性核酸內切酶——“分子手術刀”4.作用結果：產生黏性末端或平末端（1）限制性核酸內切酶——“分子手術刀”4.作用結果：產生黏要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產生幾個黏性(平)末端？要切兩個切口，產生四個黏性(平)末端。如果把兩種來源不同的DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？

會產生相同的黏性(平)末端，然后讓兩者的黏性(平)末端黏合起來，就似乎可以合成重組的DNA分子了。思考?要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產生幾（2）“分子縫合針”——DNA連接酶①作用:

把切下來的DNA片段拼接成新的DNA，即將脫氧核糖和磷酸連接起來.②作用原理：恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵（2）“分子縫合針”——DNA連接酶①作用:

可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·coliDNA連接酶或T4DNA連接酶即恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，E·co

T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低T4DNA連接酶T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效③類型：E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源功能大腸桿菌T4噬菌體恢復磷酸二酯鍵只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端(效率較低)相同點差別（2）“分子縫合針”——DNA連接酶③類型：E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源功能大腸DNA連接酶尋根問底P6DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎?為什么?DNA連接酶尋根問底P6DNA連接酶與DNA聚合酶是一回AG

T

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DNA母鏈DNA聚合酶DNA聚合酶TTAGATATCCGACGGTTTAA……………………………………………………AGTACTAATDNADNA聚合酶DNA聚合酶1)只能將單個核苷酸連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵形成磷酸二酯鍵1)在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵2)以一條DNA鏈為模板，將單個核苷酸通過磷酸二酯鍵連接成一條互補的DNA鏈2)能將DNA雙鏈上的兩個缺口同時連接起來，不需要模板1)只能將單個核苷酸連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵形【探規尋律】幾種酶的作用部位限制性核酸內切酶、DNA連接酶、DNA聚合酶作用于①部位,DNA解旋酶作用于②部位。【探規尋律】幾種酶的作用部位（3）“分子運輸車”

——基因進入受體細胞的載體⒈載體需要的條件：

⑴有1~多個限制酶切點

⑵對受體細胞無害

⑶導入基因能在受體細胞中復制、表達

⑷有某些標記基因，便于篩選⒉常用運載體：

⑴質粒

⑵動植物病毒

（3）λ噬菌體的衍生物

⑶假如目的基因導入受體細胞后不能復制或不能轉錄，轉基因生物能有預想的效果嗎？

⑴作為分子運輸車——載體，如果沒有切割位點將會怎樣？

⑵霍亂菌的質粒多個限制酶切點，你會用它來做分子運輸車嗎？

⑷目的基因有沒有進入受體細胞，如何去發現？

（最常用）（3）“分子運輸車”

—

質粒是一種裸露的、結構簡單、獨立于細菌擬核DNA之外，并且有自我復制能力的雙鏈環狀DNA分子。質粒是一種裸露的、結構簡單、獨立于細菌擬核DNA之外，并且DNA重組技術的基本工具概述經典課件常用的載體質粒：能復制并帶著插入的目的基因一起復制有切割位點有標記基因的存在，可用含氨芐青霉素的培養基鑒別獨立于細菌擬核DNA之外的一種可以自我復制的小型環狀的DNA分子常用的載體質粒：能復制并帶著插入的目的基因一起復制有切割位點1）載體DNA必需有一個或多個限制酶的切割位點，以便目的基因可以插入到載體上去。這些供目的基因插入的限制酶的切點所處的位置，還必須是在質粒本身需要的基因片段之外，這樣才不至于因目的基因的插入而失活。2）載體DNA必需具備自我復制的能力，或整合到受體染色體DNA上隨染色體DNA的復制而同步復制。3）載體DNA必需帶有標記基因，以便重組后進行重組子的篩選。4）載體DNA必需是安全的，不會對受體細胞有害，或不能進入到除受體細胞外的其他生物細胞中去。5）載體DNA分子大小應適合，以便提取和在體外進行操作，太大就不便操作。實際上自然存在的質粒DNA分子并不完全具備上述條件，都要進行人工改造后才能用于基因工程操作。1）載體DNA必需有一個或多個限制酶的切割位點，以便目的基小結基因工程的工具限制酶主要存在于原核生物中具有專一性(識別序列)切開DN