關于艾滋病梅毒乙肝實驗室檢測技術第1頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六

艾滋病抗體檢測及樣品處理

一、HIV抗體檢測篩查方法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）化學發光或免疫熒光試驗快速檢測（RT）（建議配備合格的快速檢測試劑，灰區。）第2頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六二、篩查程序初篩和復檢流程（圖1）第3頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六第4頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六三、篩查試驗結果的報告（建議用修改后附表3）（例）HIV抗體篩查試驗用附表1進行報告，陰性反應報告為“HIV抗體陰性（-）”；陽性反應報告為“HIV抗體待復檢”。第5頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六四、HIV感染產婦所生兒童HIV抗體檢測策略及流程1、適用范圍HIV感染產婦所生嬰幼兒；已滿18個月的嬰幼兒，其母親HIV感染狀態不詳，兒童出現HIV相關臨床表現，臨床懷疑HIV感染的兒童。第6頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六2、檢測程序第7頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六五、樣品的處理1樣品的保存用于抗體和抗原檢測的血清或血漿樣品，短期（1周）內進行檢測的可存放于2～8℃，一周以上應存放于-20℃以下。2.樣品的運送（例）（1）應符合生物安全要求；(2)應采用三層容器對樣品進行包裝。第8頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六第一層容器：直接裝樣品，應防滲漏。樣品應置于帶蓋的試管內。在試管的周圍應墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。第二層容器：容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。第三層容器：容納并保護第二層容器的運輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標簽、聯系方式，還應易于消毒。第9頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六第10頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六(3)用于抗體檢測的血清和血漿樣品應在凍存條件下運送。第11頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六質量控制

一、艾滋病抗體檢測的統計學室內質量控制1、試劑盒內部對照即試劑盒提供的陽性和陰性對照血清。用于判斷實驗的有效性，不能作為室內質控品使用，內部對照結果無效，必須重新試驗。第12頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六2、室內質控品為非試劑盒組份的外部質控品，是為了監控檢測的重復性而設置的，包括強陽性、弱陽性和陰性質控血清。也可以只設置一個弱陽性質控，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。作用：判斷該批臨床樣品檢測的有效性，每次實驗必須包含室內質控品，其結果無效，必須重新試驗。第13頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六二、統計室內質控的主要表示方法—建立質控圖最常用的質控圖是Levey-Jennings質控圖，下面以ELISA方法檢測HIV抗體為例，描述建立質控圖步驟：第14頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六第15頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六第16頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六第17頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六2、繪制質控圖（a）在常規條件下，對同一批血清連續測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數（

）和標準差（s）,超出2s或3s的數據不應刪除。（b）將均值（

）和標準差（s）分別在質控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱座標（Y軸），每一批次試驗作橫座標（x軸），繪制質控圖。第18頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六（c）從第21次起，將每次質控血清的檢測結果依次點入該質控框架圖中，檢驗進入質控狀態。第19頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六3、質控規則及其使用質控規則的使用應檢出隨機誤差和系統誤差，目前有許多質控規則，常用的是12S和13S規則。（a）告警（12S）：當外部質控品的S/CO值超出+2s范圍時，系統處于告警狀態，應予注意，是否可以繼續檢測需要進一步觀察。若將12S做失控標準，有較高的假失控概率，所以一般不采用。第20頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六（b）失控（13S）：當外部質控品的S/CO值超出+3s范圍時，系統處于失控狀態，本次實驗結果不能被接受，可能是系統誤差、隨機誤差或外部質控品穩定性下降所致。（c）漂移：連續幾次（3～5次）外部質控品的S/CO值都落在均值的一側則稱為漂移，提示實驗條件發生了較大的變化。（d）趨勢：連續幾次（5～7次）外部質控品的S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數的緩慢改變引起。第21頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六艾滋病實驗室生物安全

一、HIV的生物危害第一類、第二類病原微生物統稱為高致病性病原微生物。人類免疫缺陷病毒（HIV）屬第二類病原微生物，是高致病性病原微生物。第22頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六二、HIV相關檢測的生物安全級別HIV抗體檢測應在符合Ⅱ級生物安全實驗室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實驗室中進行。第23頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六三、生物安全保證措施1、建立安全制度艾滋病檢測實驗室應建立下列安全制度(1)實驗室的安全工作制度或安全標準操作程序（S-SOP）。(2)意外事故處理預案，主要是生物安全意外事故。(3)

信息安全及保密制度：（例）

第24頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六2、培訓和管理3、個人保健和防護4、安全操作5、實驗室的清潔和消毒工作完畢應對工作臺面消毒，推薦用0.1～0.2%的次氯酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥20min以上；操作過程中如有樣品、檢測試劑外濺，應及時消毒。第25頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六如有大量高濃度的傳染性液體濺出，在清潔之前應先用1%的次氯酸鈉溶液浸泡，然后戴上手套擦凈。離心樣品時要使用密閉的罐和密封頭，防止離心時液體溢出或在超/高速離心時形成氣溶膠。第26頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六四、污染物處理1、艾滋病實驗室產生的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、培養物和其它物品，均應視為感染性廢棄物，應置于專用的密封防漏容器中，安全運至消毒室，經高壓消毒后再進行處理或廢棄。第27頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六2、艾滋病檢測實驗室常用的消毒方法（1）物理消毒方法a高壓蒸汽消毒，121℃，保持15～20min;b干燥空氣烘箱消毒（干烤消毒），140℃，保持2～3h。（2）

化學消毒方法

含氯消毒劑（次氯酸鈉，含有效氯2000～5000mg/L）、75%乙醇、2%戊二醛第28頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六（3）艾滋病檢測實驗室物品常用的消毒方法a、廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉。b、生物安全柜工作臺面和儀器表面：75%乙醇。c、溢出物：5000mg/L次氯酸鈉。d、污染的臺面和器具：2000mg/L次氯酸鈉,也可以用過氧化氫或過氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。第29頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六艾滋病檢測實驗室質量管理

一、范圍艾滋病檢測實驗室質量管理包括質量保證、質量控制和質量評價第30頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六二、質量保證1、人員培訓檢測技術人員需經過上崗培訓和在崗持續培訓。篩查實驗室技術人員至少每2年1次。第31頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六2、環境條件艾滋病抗體篩查實驗室的設置及其建筑、設施、設備必須符合《全國艾滋病檢測工作管理辦法》的要求。HCV，HBV及梅毒等血清學檢測在滿足實驗室管理要求和保證生物安全的條件下，可以與HIV檢測共享空間和設備，應避免交叉污染。第32頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六3、樣品采集、運送和處理4、檢測方法和試劑的選擇5、設備維護與校準6、實驗耗材7、文件和文件管理第33頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六8、標準操作程序（SOP）篩查實驗室SOP文件包括：（1）樣品的接收、登記、處理、保存和運輸；（2）檢測方法和步驟；（3）試劑使用和保存；（4）儀器的使用維護和校準；（5）質量控制要求及程序；（6）結果解釋與報告；（7）保密程序；（8）實驗室數據、相關文件記錄與保存；（9）不確定樣品追蹤和處理；（10）實驗室安全防護及實驗室的清理和消毒；第34頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六（11）標題和編號；（12）編寫和修訂日期；（13）編寫和修訂人員姓名；（14）方法、目的和應用范圍；（15）檢測設備；（16）試劑及有效期；（17）安全防護相關步驟；（18）結果的解釋和報告；（19）附錄，包括相關的附加文件如標準表格、設備和試劑盒說明書等。第35頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六9、實驗原始記錄表（附表4）10、結果報告11、樣品登記和保存第36頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六三、質量控制四、質量評價包括內部質量評價和外部質量評價。1、內部質量評價2、外部質量評價篩查實驗室應參加省級職能工作考核和PT。第37頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六3、職能工作考核現場評價內容，篩查實驗室現場評價應包括：實驗室人員組成及其職責分工；實驗室分區、布局、恒溫設施；儀器設備及其使用、校準記錄；質量保證文件、實驗室SOP文件及原始記錄；實驗室的安全防護措施，安全用品及安全規程；第38頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六消毒與污物處理方法及設施；HIV檢測資料數據庫的建設、存檔、備份、安全和保密；樣品保存和安全；開展的HIV檢測項目和檢測試劑等。第39頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六梅毒、乙肝檢測要點

一、梅毒螺旋體感染人體后出現兩種抗體，特異體抗體和非特異性抗體。特異性抗體(TPHA)：為lgM，這種抗體一旦產生，終身是陽性。靈敏度高、特異性強非特異性抗體（反應素RPR）：為lgA與lgM的混合物，隨病情發展而變化。可與正常生物組織中的類脂抗原發生非特異性結合。第40頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六二、梅毒特異性抗體檢測：用于證實試驗，即使患者已經經過充分的治療，IgG抗體仍保持陽性所以不能用以觀察療效、復發及再感染。方法有：TP-ELISA酶聯免疫法、TPPA。第41頁，共45頁，2022年，5月20日，3點24分，星期六梅毒非特異性抗體檢測：用于梅毒診斷療效觀察和對復發或再感染的監測。方法有：性病實驗室試驗（又稱VDRL試驗）、快速血漿反應素(RPR)試驗、梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）、世界衛生組織推薦用RPR等方法進行過篩試驗，出現陽性者再用TPHA等方法進