ICS65.020.20CcsB41DB32江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB32/T4366-2022人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程Technicalregulationsforproductionofsheepanti-humanapolipoproteinAⅠpolyclonalantiserum2022-09-06發(fā)布2022-10-06實(shí)施江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB32/T4366-2022前言本文件按照GB/T1.1-2020《化工作導(dǎo)則第1部分：化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省畜牧業(yè)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所、句容市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、江蘇大學(xué)、江蘇省農(nóng)科院。本文件主要起草人：徐志偉、姚明霞、徐一然、溫小林、鄧碧華、于建寧、李云、胡強(qiáng)、張兆麗、譚圣偉、盛媛媛。IDB32/T4366-2022人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程1范圍本文件運(yùn)用于人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備中羊品種選擇和飼養(yǎng)要求、免疫佐劑選用、抗原乳化、抗原接種、抗體效價(jià)評(píng)估、抗血清制備的步驟和方法。2規(guī)范性引用文件本文件無(wú)規(guī)范性引用文件。3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。載脂蛋白AⅠApolipoproteinAⅠ用于運(yùn)輸血液中脂類(lèi)的高密度主要載脂蛋白,A1是載脂蛋白A族中最多的一種組分，約占HDL顆粒的65%，主要在肝臟、部分在小腸合成。4羊的選擇和飼養(yǎng)要求選用體重30kg—40kg生長(zhǎng)發(fā)育良好、10月齡左右的健康羊。采用群養(yǎng)放牧，適當(dāng)補(bǔ)飼方式，每天早晚觀察羊的健康狀況。5抗原要求人血清通過(guò)優(yōu)化PEG沉淀、離子交換吸附的方法，純度達(dá)96%。6免疫佐劑選用首次免疫佐劑采用弗氏完全佐劑，從第二次免疫開(kāi)始，采用弗氏不完全佐劑。7抗原乳化采用高速剪切法乳化抗原。乳化容器需放置在降溫夾套中，將佐劑按需要量置于乳化容器中，用吸管以60滴/min的速度緩慢加入載脂蛋白AⅠ抗原溶液，用漩渦混合器以1.5萬(wàn)1DB32/T4366-2022rmp/min混合均勻，抗原溶液全部加完后，再持續(xù)混合15min。8抗原接種免疫劑量和部位每只羊免疫抗原劑量為1mg，抗原濃度為1mg/ml,為各部位平均接種。不同免疫次數(shù)間的間隔天數(shù)和部位，見(jiàn)表1。表1免疫劑量和部位間隔天數(shù)（d）0次數(shù)第1次第2次第3~9次免疫接種部位腹股溝、肘部、耳后、額下、背側(cè)和足窩腹股溝、肘部、耳后、額下、背側(cè)和腹股溝淋巴結(jié)點(diǎn)159腹股溝、肘部、耳后、額下和背側(cè)9抗體效價(jià)評(píng)估在第7次免疫后動(dòng)脈采血檢測(cè)抗體水平，采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行效價(jià)測(cè)定,效價(jià)不低于1：16，可以判定為合格，可以采血。10抗血清制備10.1采血在檢測(cè)抗體水平達(dá)到效價(jià)要求后，采用動(dòng)脈一次性采血。血液用250mL玻璃瓶收集，血液占玻璃瓶的1/5。10.2血清制備把收集好血液的玻璃瓶，放在37℃恒溫水浴鍋中1h后，把玻璃瓶從水浴鍋中取出；再把血清從玻璃瓶中吸出；用低速離心機(jī)4500rmp/min，離心15min，取上清液，顏色為乳白色或微黃色，去掉沉淀物雜質(zhì)。10.3外觀質(zhì)量血清應(yīng)呈黃色或微紅色血清狀液體，允許少量的絮狀物或沉淀。10.4血清保存2DB32/T4366-2022血清用滅菌處理的塑料瓶保存。在-2