金花葵，錦葵科、秋葵屬，別名黃秋葵、菜芙蓉。產地在北方，草本一年生，在200多個秋葵植物中最具藥用和保健功能，有很高的藥用價值［1］。金花葵籽中含有豐富的不飽和脂肪酸,如油酸、亞油酸、花生四烯酸等,不飽和脂肪酸有明顯降低高密度脂蛋白血清膽固醇的作用,進而減少高血壓,心臟病及中風等疾病發病率，同時不飽和脂肪酸在維護生物膜的結構和功能方面有重要作用。目前不飽和脂肪酸產品已經廣泛應用于醫藥、營養補充劑、保健食品等領域。因此測定不飽和脂肪酸,對評價金花葵藥用價值具有重要意義［2］。國內外對于不飽和脂肪酸的分析測定方法很多,有氣相色譜法、銀離子高效液相色譜法、氣質聯用分析法、紫外可見分光光度法薄層色譜法、高效液相色譜法、未衍生高效液相色譜法［3-8］等，但存在一些問題,如紫外可見分光光度法比較麻煩，分析時間較長,而高效液相色譜法對儀器要求較高等。氣相色譜質譜聯用（GC-MS技術的發展較快,采用GC-MS分析法測定不飽和脂肪酸效率較高，彭志兵等利用GC-MS對金花葵籽油中的脂肪酸成分進行了定性與定量分析，樣品提取方法采用索氏提取法,本文采用索氏提取法、石油醚浸泡法以及超聲波提取法提取金花葵籽油，并對3種提取方法的出油率進行比較,選擇最佳提取方法,并對氣相和質譜的條件進行了優化,提高了GC-MS分析結果的準確性,為探討金花葵籽油的營養及市場開發提供了參考的數據。1材料與方法1.1儀器氣相色譜/質譜儀（美國Agilent7890AGC/5975CMS;ZKSY-6恒溫水浴鍋；9960A超聲清洗器:美國檢測分析金花葵籽油中不飽和脂肪酸的GC-MS測定李浡1,胡定煜2,李雙石1,辛秀蘭1,陳亮3,劉琦4(1.北京電子科技職業學院，北京100029;2.中國人民武裝警察部隊學院,河北廊坊065000;3.北京化工大學,北京100029;4.甘肅農業大學,甘肅蘭州730070摘要:采用索氏提取法、石油醚浸泡法以及超聲波提取法提取金花葵籽油，并對3種提取方法的含油率進行比較。利用GC-MS方法對金花葵籽油中不飽和脂肪酸的含量進行測定,并對氣相的條件進行了優化。測定結果表明金花葵籽油含有亞油酸32.35%,油酸43.89%,棕稠油酸0.40%,不飽和脂肪酸占76.64%,含量較豐富。關鍵詞:GC-MS;不飽和脂肪酸;索氏提取法;超聲提取法DeterminationoftheUnsaturatedFattyAcidsofHibiscusManihotSeedOilbyGC-MSLIBo1,HUDing-yu2,LIShuang-shi1,XINXiu-lan1,CHENLiang3,LIUQi4(1.BeijingPolytechnic,Beijing100029,China;2.ChinesePeople'sArmedPoliceForcesAcademy,Langfang065000,Hebei,China;3.BeijingUniversityofChemicalTechnology,Beijing100029,China;4.GansuAgriculturalUniversity,Lanzhou730070,Gansu,ChinaAbstract:TheoilwasextractedfromHibiscusmanihotseedusingSoxhletextractionmethod,petroleumethersoakmethodandultrasonicextractionmethod.Oilextractionrateofthreeextractionmethodswerecompared.TheunsaturatedfattyacidcompositionsofseedoilwereanalyzedbyGC/MSandGasChromatographicconditionwasoptimized.Theresultsshowedthatthecontentoflinoleicacid,oleicacidandpalmitoleicacidwere32.35%,43.89%and0.40%respectivelyandunsaturatedfattyacidswere76.64%.Keywords:GC-MS;unsaturatedfattyacids;Soxhletextractionmethod;ultrasonicextractionmethod基金項目:北京市屬市管高等學校人才強教深化計劃項目;科研基地一生物技術在制藥和農產品加工中的應用平臺建設作者簡介:李浡(1973-,女(漢，講師,博士研究生,研究方向:生物化學。食品研究與開發FoodResearchAndDevelopment2012年5月第33卷第5期121表1程序升溫色譜條件Table1ChromatographyConditionsofprogrammedtemperature序號柱溫/℃升溫速度/(℃/min柱溫/℃升溫速度/(℃/min柱溫/℃1140(1min10200(1min10280(6min21002--2803140（1min10200（1min5280（6min檢測分析CBL光電子技術有限公司；Laborato4000effiencient旋轉蒸發儀:德國海道夫儀器有限公司；TDZ4A-WS離心機;SY150超聲波提取器。1.2材料與試劑金花葵籽產于河南省平頂山；甲醇（色譜純、正己烷（分析純、氫氧化鉀（分析純、石油醚（分析純、無水硫酸鈉（分析純:均購自北京化工廠。水為二次蒸餾水。1.3金花葵籽油的提取1.3.1索氏提取法準確稱取已粉碎的金花葵籽樣品10.00g于濾紙筒中,放于索氏提取器中,加入200mL石油醚,于80℃水浴中提取8h。1.3.2石油醚浸泡法準確稱取已粉碎的金花葵籽樣品10.00g,置于三角瓶中,加入100mL石油醚，并不斷振蕩48h。1.3.3超聲波提取法準確稱取已粉碎的金花葵籽樣品10.00g，加入100mL石油醚置于超聲波提取器中超聲處理30min,在石油醚中浸泡過夜。1.4稱重將上述3種方法提取的金花葵籽油，然后用旋轉蒸發儀于60℃蒸發至無石油醚,在100℃的干燥箱中烘干至衡量,稱取金花葵籽油質量。1.5脂肪酸的甲酯化脂肪酸的甲酯化:提取的金花葵籽油0.2g,加入1mL0.5mol/L的KOH-CH3OH溶液,70℃水浴1h,加2mL正己烷,加5mL蒸餾水,超聲處理5min,吸取上層清液,用亞硫酸鈉干燥,備用。1.6檢測方法1.6.1氣相色譜條件HP-5MS30mx0.25mm,0.25^m彈性石英毛細管柱;載氣為高純氮氣（純度99.999%;程序升溫,初溫140℃,保持1min,以10.0℃/min升至200℃,保持1.0min,再以5℃/min升溫至280℃,保持6.0min;運行時間：30min;分流比100:1,流速1.0mL/min;進樣口溫度280℃,進樣量1.0rL。1.6.2質譜條件接口溫度280℃,EI電離源，電子能量70eV,離子源溫度230℃,四極桿溫度150℃,電子倍增器電壓1.624V,Scan全掃描方式,溶劑延遲5min。2結果與分析2.1金花葵籽油的提取在索氏提取法中,稱取金花葵籽油重量為2.74g,測定含油率為27.4%,超聲提取法中,提取金花葵籽油重量為2.93g,含油率為29.3%,浸泡提取法中,重量為1.36g,含油率為13.6%,根據幾種提取方法測定的結果,超聲提取所需的時間較短,而且提取率高,效果比較好些。2.2氣相條件的選擇柱溫是影響組分分離的一個重要參數。溫度太低,柱效較低且保留時間長,分析速度慢;但溫度太高,不同組分的分配系數差別變小,不易分離,特別是對保留行為差別較大的應采用程序升溫方式，以獲得較好的分離。實驗中對柱溫條件進行了設定,見表1。在程序1中分離效果不理想,兩個峰沒有分開,程序2分離效果較好,各組分峰形尖銳，但是分離時間較長。程序3分離效果較好,各組分峰形尖銳。綜合以上的條件分析,可以確定程序3為最佳升溫程序。2.3分析鑒定結果金花葵籽油甲酯化后經GC/MS分析,其脂肪酸甲酯的總離子流圖如圖1所示。經計算機質譜數據庫（NIST08.L檢索,與標準譜圖對照、比較,確認了金花葵籽油的化學成分,并按面積歸一化計算各峰面積的相對百分含量,結果見表2。由表2分析可知，金花葵籽油中含有大量不飽和脂肪酸占76.64%,其中亞油酸32.35%,油酸43.89%和棕櫚油酸0.40%。3結論結果表明,3種提取方法中,超聲提取法提取金花葵籽油含油率為29.3%,提取率最高。超聲波可強化萃取分離過程的傳質速率和效果,從而有利于油脂的提取［9-10］。在植物油脂提取中,采用超聲波可大大縮短提油時間。經過比較,本實驗中選擇的氣相色譜條件是柱溫140℃,保持1min,以10.0℃/min升至200℃,保持1.0min,再以5℃/min升溫至280℃,保持6.0min;運行時間:30min;分流比100:1,流速1.0mL/min。在此氣相條件下,分離效果最佳。采用GC-MS測定金花葵籽油中的不飽和脂肪酸,含量高達76.64%,其中亞油酸32.35%,油酸43.89%和棕櫚油酸0.40%。研究表明不李浡,等:金花葵籽油中不飽和脂肪酸的GC-MS測定122圖1金花葵籽油脂肪酸甲酯總離子流圖Fig.1TotalionchromatogramoffattyacidmethylesterofHibiscusmanihotseedoil5.5e+075.0e+074.5e+074.0e+073.5e+073.0e+072.5e+072.0e+071.5e+071.0e+0750000006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.00時間/min豐度表2金花葵籽油中脂肪酸成分的鑒定結果Table2AnalyzedresultsoffattyacidofHibiscusmanihotseedoil序號保留時間/min相對含量中文名英文名相似度19.170.40棕櫚油酸((Z-9-十六碳烯酸甲酯(Z-9-Hexadecenoicacid,methylester9829.4915.35棕櫚酸(十六烷酸甲酯Hexadecanoicacid,methylester99312.5532.35亞油酸((Z,Z-9,12-十八碳二烯酸甲酯（Z,Z-9,12-Octadecadienoicacid,methylester99412.7343.89油酸（9-十八碳三烯酸甲酯9-Octadecatrienoicacid,methylester99513.123.38硬脂酸（十八烷酸甲酯Octadecanoicacid,methylester99617.960.54花生酸（二十烷酸甲酯Eicosanoicacid,methylester99723.760.63廿二烷酸甲酯Docosanoicacid99飽和脂肪酸是人體內不能合成而又必需的脂肪酸,具有穩定細胞膜的功能,維持細胞因子和脂蛋白平衡的作用,對高脂血癥患者的血脂和載脂蛋白水平有良好的調節作用，能夠降低血脂[11-14]。油酸可降低血漿總膽固醇和低密度脂蛋白的水平,減少機體內自由基脂質超氧化物,從而在預防動脈粥樣硬化,降低患冠心病的危害性方面具有重要作用。亞油酸具有顯著的降血脂和抗動脈粥樣硬化的作用,還具有免疫、抗炎癥、抗腫瘤等功能[15-16]。因此,金花葵籽可以作為優質食用油源,具有很好的開發價值和應用前景。參考文獻：[1]劉臨.原子吸收光譜法測定金花葵中微量元素[J].微量元素與健康研究,2008,25(7:27-29[2]徐文暉，王俊儒，梁宗鎖.不飽和脂肪酸分離技術研究概況[J].食品研究與開發,2007,28(8:153-156[3]洪濱，劉會洲.國內EPA及DHA研究現狀和發展趨勢[J].化工冶金,1996,17(1:82-84[4]馮家力，潘振球，陳波.奶粉中EPA及DHA的衍生氣相色譜分析[J].中華預防醫學雜志，1997,31(4:239-240[5]吳冀華，裘愛冰.氣相色譜法分析共軛亞油酸異構體[J].中國油脂,2002,27(1:65-67[6]張亞剛，樊莉，文彬，等.紫外可見分光光度法在共軛亞油酸定量分析中的應用[J].新疆石油學院學報,2002,14(2:59-63[7]榮會，姜莉，安曉紅，等.月見草油中y-亞麻酸含量的快速測定[J].現代科學儀器,2002(1:57-58[8]蒙締紅，任立偉.未衍生高效液相色譜法測定螺旋藻粉中Y-亞麻酸含量[J].分析科學學報,2000,16(1:58-60[9]熊犍，宋臻善.超聲波技術在油脂工業中的應用[J].食品工業科技,2006,27(8:194-196[10]胡愛軍，丘泰球，劉石生，等.物理場強化油脂浸出技術[J].中國油月旨,2002,27(3:10-13[11]CurbJD,WerowskeG,DobbsJC,etal.Serumlipideffectsofahigh-monounsaturatedfatdietbasedonmacadamianuts[J].ArchInternMed,2000,160(8:1154-1158[12]WilliamsCM,FrancisknapperJA,WebD,etal.Cholesterolreductionusingmanufacturedfoodshighinmonounsaturatedfattyacids:arandomizedcrossoverstudy[J].BrJNutr,1999,81(6:439-446[13]ChangNW,HuangPC.Comparativeeffectsofpolyunsaturated