關于禽類繁殖生物技術第1頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第十三章禽類繁殖生物技術

第2頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

一、公禽的生殖器官（一）睪丸

公禽睪丸位于腹腔脊柱腹側，由短的睪丸系膜懸吊于腹腔體，前接胸腹膈和肺，背部接腎前部。

睪丸由睪丸間質和睪丸實質組成。

公禽睪丸精細管壁由生精細胞和支持細胞組成。

第3頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

一、公禽的生殖器官（二）附睪

禽類附睪是一長紡錘形的管狀膨大物，位于睪丸背內側凹緣，與睪丸一起包在被膜內，由睪丸網、睪丸輸出小管、附睪小管和附睪管共同組成。

禽類附睪管短，向后與長而彎曲的輸精管相接。禽類附睪不發達，較小，僅在睪丸活動期才明顯擴大，且附睪內不貯存精子。

第4頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

一、公禽的生殖器官（三）輸精管

輸精管左右兩側各一條，與輸尿管平行，為極彎曲的白色細管，長約10cm。

輸精管上皮能分泌酸性磷酸酶，精子最后在此成熟，其囊狀部常有大量成熟精子，精子也可被輸精管上皮所吸收。第5頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

一、公禽的生殖器官（四）交媾器公雞的交媾器：公雞沒有真正的陰莖，但有一套完整的突起，稱交媾器，位于泄殖腔后端腹側，一般情況下隱匿在泄殖腔內，由輸精管乳頭、脈管體、陰莖和淋巴褶四部分組成。水禽的交媾器：水禽（鴨和鵝）的交媾器由一對輸精管乳頭和陰莖組成。水禽的交媾器較發達，為螺旋錐狀體，其表面有螺旋形的輸精溝。

第6頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

二、公禽的精子與精液（一）精子的形態特點禽類的精子有一個很長的頭部，頭的前端有尖形的頂體，有一個短的中段連接著一個長長的尾部。（二）精液性狀

禽類的精液為乳白色或略帶黃色，是不透明的乳狀液體，略帶腥味。若混有血液，則精液呈粉紅色，被糞便污染的精液則呈黃褐色。禽類的精液由精子和精清組成。禽類精液的密度大，其粘度高。

禽類新鮮精液一般呈弱堿性。第7頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

二、公禽的精子與精液（三）禽類精液的化學成分

1、禽類精子本身含酯類和糖蛋白，也含有各種酶，因此精子在無氧或有氧條件下都可分解糖類為精子提供能量，而精清則是鹽類和若干氨基酸組成的水溶液。

2、精液中含有粘多糖、葡萄糖、甘油等。另外，禽類精液中谷氨酸和鉀含量高，而氯化物的含量低。雞精液中堿性磷酸酶活性較高。第8頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

三、母禽的生殖器官（一）卵巢

1、禽類的左側卵巢以短的卵巢系膜韌帶懸吊于腹腔背側，前端與左肺緊接，腹側接腺胃和脾，彼此被腹氣囊隔開，背側與左腎前部相接，向后以腹膜褶與輸卵管相連。

2、卵巢實質含皮質和髓質，髓質與皮質之間為致密結締組織性的白膜，白膜伸入皮質和髓質內，形成卵巢基質。

3、禽類卵巢的成熟卵泡完全突出于卵巢表面，成熟卵泡從內向外由卵黃膜、放射帶、卵黃周膜、顆粒層和卵泡膜組成，借卵泡柄與卵巢相連。

第9頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

三、母禽的生殖器官（一）卵巢

4、卵帶:卵泡上與柄相對的中央有一條無結締組織而且血管較少的灰白色狹帶。

5、體積和外形：隨年齡的增長和機能狀態的發展而有很大的變化。

（二）輸卵管

1、位置：前端開口于卵巢正后方，沿腹腔的左背側壁后行，后端開口于泄殖腔。

2、主要功能:完成卵細胞的受精和完成胚胎的早期發育，是保證胚胎體外發育并形成蛋的重要器官。

第10頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

三、母禽的生殖器官（二）輸卵管

3、輸卵管的長度和形態隨著年齡和不同生理階段而有差異。

4、輸卵管分為漏斗部、蛋白分泌部、峽部、子宮部和陰道部五個部分。

①漏斗部：位于卵巢正后方，是精子和卵子受精的場所，分為漏斗部本身與漏斗頸部。

②蛋白分泌部：前端與漏斗部界限不明顯，后端有明顯窄環與峽部區分，其基本功能是分泌蛋白。第11頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

三、母禽的生殖器官（二）輸卵管

③峽部：位于蛋白分泌部和子宮之間，峽部分泌物形成蛋的內外兩層蛋殼膜，并補充蛋白的水分。

④子宮部：分泌子宮液、蛋殼、殼上的膠護膜和蛋殼色素。

⑤陰道：開口于泄殖腔背壁左側，子宮與陰道以括約肌為界限，陰道位于子宮與泄殖腔之間的厚壁窄管。第12頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

四、母禽的卵泡發育、排卵與蛋的形成（一）卵子的發生與卵泡的發育

1、卵子的發生可分為增殖期、生長期和成熟期。

2、在生長期內，卵原細胞停止增殖開始生長，稱為初級卵母細胞。

3、在卵母細胞生長和發育的整個過程中，卵泡的滲透性及膜的厚度發生改變，并參與卵母細胞的形成、生長和成熟過程。

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四、母禽的卵泡發育、排卵與蛋的形成（二）排卵

1、卵泡成熟后，在激素和神經系統的控制下，使卵泡表面無血管的“卵帶區”破裂，釋放出卵母細胞的過程稱排卵。

2、卵巢分泌孕酮，孕酮水平達到激發垂體釋放促黃體素的反應閾值,于是垂體開始釋放促黃體素，該激素作用于卵泡，使卵帶處的微血管消失或變色，縫痕擴大，在卵泡膜肌纖維作用下，卵帶區破裂，卵子排出。

第14頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

四、母禽的卵泡發育、排卵與蛋的形成（三）蛋的形成與產出

1、成熟卵泡在促性腺激素的作用下破裂排出卵黃進入漏斗部，雞卵黃從排出至全部納入漏斗部約需13分鐘，此時若與精子相遇，在15～18分鐘內便發生受精。

2、卵黃通過漏斗部進入輸卵管的膨大部后，首先被腺體分泌的濃蛋白包圍，由于輸卵管的蠕動作用，使卵黃在輸卵管內沿長軸做被動性的機械旋轉，使這層濃蛋白扭轉而形成系帶和系帶層濃蛋白，然后被分泌的稀蛋白包圍形成內稀蛋白層，而后又形成外濃蛋白層。

3、由于膨大部的蠕動，促使卵黃進入峽部，在此處形成內外蛋殼膜，包圍整個蛋白和卵黃，

4、卵黃經峽部進入子宮部，在此停留約18～20小時或更長一些時間，形成蛋殼和外稀蛋白層。

第15頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第一節禽類的生殖生理

五、禽類的胚胎發育（一）禽類胚胎的體內發育

1、禽類的胚胎發育的營養物質并不完全由母體直接提供，而主要來源于蛋。

2、禽類胚胎的體內發育在蛋的形成過程中完成；雞蛋產出體外時，雞胚發育已達內外兩個胚層的原腸期。

（二）禽類胚胎的體外發育

1、雞胚體外發育的臨界溫度為23.9℃。

2、受精蛋獲得孵化條件，胚胎繼續發育，在原有兩個胚層的基礎上形成中胚層，之后在內、中、外三個胚層基礎上形成個體所有的組織和器官。

第16頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第二節禽類的人工授精一、采精方法

（一）截取法

母禽是公禽天然的性刺激，以此為原理而采得精液的方法稱截取法，據有無假陰道又可分為臺禽法和假陰道法。（二）電刺激法

電刺激法用弱電流刺激公禽射精，可用于雞、鴨、鵝和火雞等公禽，生產中主要用于番鴨精液的采集，也常用此法選擇采精能力強的雞、鴨、鵝等種禽。

第17頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第二節禽類的人工授精一、采精方法

（三）按摩法

1、按摩采精法分為背部按摩、腹部按摩和背腹式按摩三種方式。

2、背腹式按摩采精法多用于體型較大、重型品種的鴨與鵝的采精，有時也用于公雞采精的調教期，而雞與體型小的鴨和鵝的采精，多用背式按摩采精。第18頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第二節禽類的人工授精二、精液品質評定

1、精液的外觀

正常禽類精液為乳白色或略呈黃色，乳狀稠度，不透明液體。

2、采精量

用有刻度的集精杯上直接讀出。雞的采精量一般平均為0.2～0.5ml。

3、精子活力禽類精液中直線運動的精子才有受精能力，而呈圓周運動或擺動的精子則無受精能力。

4、精子密度

是每毫升精液中所含的精子總數，直接影響蛋的受精率。雞的精子密度一般為20～50億/ml。原精液目測法估計精子活力時，一般分為密、中等和稀三個等級。

5、精子畸形率畸形率越高，受精率越低，亦是精液品質的重要指標之一

6、PH值禽類新鮮精液呈弱堿性。第19頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第二節禽類的人工授精三、精液的保存

（一）精液的液態保存

1、常溫保存

新鮮精液常用隔水降溫，在18～20℃保存1小時用于輸精，使用簡單的稀釋液，如生理鹽水或復方生理鹽水，稀釋比例為1：1或１:２。

2、低溫保存低溫保存時，將經稀釋的精液置于30℃水浴，再放入2～5℃冰箱，在1～2小時內完成降溫過程。第20頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第二節禽類的人工授精三、精液的保存

（二）精液的冷凍保存

（1）采精：冷凍用精液無糞便和透明液污染。（2）稀釋：采精后盡快稀釋，在精液中按比例加入稀釋液，稀釋倍數視精子密度而定，但須確保陰道輸精時輸精量不超過0.4ml。（3）降溫：在5℃條件下放置2～4小時，使精液溫度由30℃以上降至5℃。（4）加防凍劑：一般添加量甘油為3～10%，二甲基亞砜為4～6%、乙烯二醇為4～10%。

第21頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第二節禽類的人工授精三、精液的保存

（二）精液的冷凍保存

（5）平衡：加入防凍劑后在5℃平衡15分鐘至2小時。（6）分裝冷凍：每分鐘降溫1℃至-20～-30℃，然后以每分鐘降溫50℃降溫至-150℃，再投入液氮保存。（7）解凍：在0～5℃緩慢解凍或30～40℃快速解凍。（8）輸精：在子宮部或膨大部輸精，若陰道部輸精則輸精深度2～4cm，且輸精時有效精子含量為7～10億。第22頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第二節禽類的人工授精四、母禽的輸精

禽類的輸精是用一定的器具將精液注入母禽生殖道一定部位的技術。（一）輸精方法

1、陰道部輸精

2、子宮內輸精

3、膨大部輸精

（二）輸精時間

雞和火雞的輸精在產完蛋的下午4點鐘以后進行。鴨在夜間產蛋，輸精宜在上午10點以后進行。鵝在上午產蛋，輸精可在白天12點以后進行。

第23頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第二節禽類的人工授精四、母禽的輸精（三）輸精間隔和輸精量

生產實踐中，雞每次輸精時含原精液0.025～0.05ml，其中有效精子數為0.5～1億，在盛產期，輸入原精液0.025ml，輸精間隔5～7天，產蛋中后期輸入原精液0.05ml，輸精間隔4～5天。（四）輸精注意事項

1、在半小時內輸精；

2、若著力于右側，則易引起母禽排糞；

3、斜插則不易輸入精液且易損傷輸卵管；

第24頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第二節禽類的人工授精四、母禽的輸精（四）輸精注意事項

4、放松對母禽腹部壓力，以免精液逆流出輸卵管，使精液全部輸入；

5、插入輸精管不要用力過大，以免驚嚇、損傷母禽和造成輸卵管損傷；

6、將輸精管偏向一側緩緩插入；

7、不輸入空氣或氣泡；

8、遵守無菌操作，防止相互感染。

第25頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術一、禽類的性別控制

（一）雞的性別決定

1、性染色體決定學說性別由性染色體決定，即個體的性別取決于受精時雌雄配子所攜帶的性染色體的類型。把雌性異型性染色體稱為ZW型，雄性為ZZ型。

2、常染色體平衡學說生物的性別是受細胞核內染色體上雄性化基因系統與雌性化基因系統的平衡決定的，哪一類基因系統占優勢就會影響胚胎性別的發育。第26頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術一、禽類的性別控制

（一）雞的性別決定

3、TDF學說哺乳動物雄性是由位于Y染色體上的一種稱之為睪丸決定因子（TDF）的基因所編碼的組織相容性抗原H-Y所決定的。

4、其它基因學說

SF1、SOX9、AMH等，且它們可能在性別決定的不同層次上發揮著不同的作用，但由于它們都不是性連鎖基因，一定程度上決定了它們不可能在性別決定中起決定作用。第27頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術一、禽類的性別控制

（二）雞的性別分化

1、性別的分化就是由遺傳性別發育成表型性別的過程。

2、一般認為引起哺乳動物性別分化的機制是雄性特異的Y染色體Sry的表達。

3、Lillve提出了胚胎分化的激素學說;Witsch等人提出了性腺分化的誘導學說。

4、性別分化是以性別決定機制為基礎，由激素類物質誘導發生。

第28頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術一、禽類的性別控制

（三）性別鑒定

1、一般形態性別鑒別方法哺乳動物最早的性別鑒定是對供體精子染色體的鑒別。

2、細胞水平上的性別鑒定用碘化丙錠對雌性和雄性細胞核進行染色，再用流式細胞儀進行檢測。

3、分子水平上的性別鑒定利用性連鎖DNA序列進行家禽性別鑒定。

①通過DNA印跡雜交該方法是通過對雞W染色體上XhoI家族的重復序列進行克隆和測序，用生物素標記的0.7kb重復片段的重組質粒為探針，利用雜交技術對雞進行了性別鑒定，缺點是需要對DNA純化。

第29頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術一、禽類的性別控制

（三）性別鑒定

3、分子水平上的性別鑒定

②細胞原位雜交（ISH）利用原位雜交技術檢測核苷酸序列較方便，無論是用提純的DNA，還是細胞，甚至血液進行原位雜交，雌性和雄性都能清楚地鑒定。

③聚合酶鏈式反應(PCR)鑒定W染色體，PCR技術鑒定5～7天雞胚性別的方法。

（四）雞的性別反轉

人工誘導雞性別反轉的方法

（1）外源激素誘導：用雌激素或雄激素處理禽胚，調節皮質部與髓質部的發育，從而控制性別。

第30頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術一、禽類的性別控制

（四）雞的性別反轉

人工誘導雞性別反轉的方法

（2）免疫學方法誘導：用睪丸和卵巢制成的抗血清處理性別未分化的雞胚，可以誘導性反轉。

（3）芳香化酶抑制劑誘導：芳香化酶抑制劑抑制雌激素生成，睪酮濃度相對增加，使胚胎向雄性轉化。

第31頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術二、禽類的胚胎操作

（一）禽類的體外受精和胚胎移植

1、體外受精

①母雞在產蛋后15分鐘或20分鐘回收排出的卵子，收集的卵子放在含有60～70ml改良的Ringer’s液中，取0.2～0.5ml稀釋的精液，放在胚珠上，并在410C的條件下培養15分鐘，使其體外受精，之后，在Ringer’s溶液中漂洗以除去精子。

②將母雞輸卵管喇叭口拉出，撐開，體外受精的卵從燒杯灌入張開的喇叭口，使卵移向輸卵管膨大部前部，放回卵巢囊中，縫合切口。

第32頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術二、禽類的胚胎操作

（一）禽類的體外受精和胚胎移植

2、胚胎移植

Tanaka(1994)移植了76個體外受精獲得的受精卵產出53個正常蛋，31枚受精，孵出6只雛雞。

（二）禽類早期胚胎體外培養

1、人造材料蛋殼培養體系人造材料蛋殼培養是一種完全脫離天然蛋殼，采用人造材料容器等進行的雞或鵪鶉胚胎體外培養方法。第33頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術二、禽類的胚胎操作

（二）禽類早期胚胎體外培養

2、代用蛋殼體系

我國禽類胚胎體外培養技術:

①胚胎發生階段的雞胚：從囊胚到孵化72小時（雞）或到60小時（鵪鶉），直接把新生雞胚在常規下孵化72小時，或以切去銳端的普通蛋殼作為代用殼,整個卵黃移入其中,注滿培養液,無毒薄膜密封,縱軸水平方向固定,繼續孵化。

②72小時到出雛：取切去鈍端的雙黃蛋殼作為代用殼,胚胎移入后注入單純稀蛋白至蛋殼切口下一定位置,無毒薄膜封口,繼續孵化。

第34頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術二、禽類的胚胎操作

（二）禽類早期胚胎體外培養

3、三期培養體系

①

Ferry（1988）首先建立了受精卵－囊胚的體外培養方法：將卵裂前受精卵（連帶卵黃和部分濃蛋白）胚盤向上置于60ml的玻璃杯中，注入培養液至胚盤水平位置，無毒薄膜密封杯口，41～42℃培養24h。

②

Ono（1994）改用20ml塑料杯，以單純稀蛋白為培養液，41.5℃培養24h。

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（三）禽類嵌合體技術

1、禽類嵌合體制作方法

①囊胚細胞分離；

②注射卵進行孵化；③蛋的內容物轉移入大一點的蛋殼中，重新封口。

2、禽類嵌合體制作分類

（1）胚盤細胞嵌合體：1970年，Marzullo將白萊航雞的胚盤細胞注入到橫斑洛克雞的胚盤內，從孵化后期死亡的雛雞羽色來看，得到了嵌合胚胎。

第36頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術二、禽類的胚胎操作

（三）禽類嵌合體技術

2、禽類嵌合體制作分類

（2）原始生殖細胞(PGCs)嵌合體：

1976年，Reynaud切下公雞生殖嵴部位制成細胞懸浮液，注射到紫外線照射過的雞胚血管里，發現公雞PGSS隨血流移動到雞生殖腺中生存，Tajima通過移植從雞胚血液中分離純化的PGCs成功獲得了白萊航雞和洛島紅雞的性系嵌合體。

（3）種間嵌合體：Hajji等將鵪鶉生殖嵴部位的PGCs，注射到雞胚血管里，性分化后在雞的生殖腺中發現了鵪鶉的PGCs，并獲得了供體后代。

第37頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術二、禽類的胚胎操作

（三）禽類嵌合體技術

3、禽類嵌合體鑒定

注射鵪鶉囊胚細胞的雞胚組織在孵化12小時后進行觀察。組織固定在Zenker’s液中，切片厚度為6μm，Feulgen-Rossenbeck's染色，按照LeDouarin的方法辨別鵪鶉囊胚細胞和雞囊胚細胞。

第38頁，共43頁，2022年，5月20日，14點53分，星期五第三節禽類繁殖生物技術三、家禽的轉基因技術

（一）轉基因技術

1、成熟卵泡微注射法即向母雞排卵前成熟卵泡中注射外源基因。Shuman（1986）注射反轉錄病毒，Kopchich注射牛GH基因。

2、受精卵原核微注射法注射部位是受精卵胚盤質膜下方20um處的細胞質。

3、單細胞受