140例高脂血癥患者膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因TaqIB多態(tài)性與他汀類藥物的調(diào)脂效果

作者：張鵬輝，李果明，王焱，鄭克勤 作者單位：1.廣東醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)研究室；2.廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科，廣東湛江524023【摘要】目的探討膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(cholesterylestertransferprotein，CETP)基因TaqIB多態(tài)性與粵西地區(qū)高脂血癥患者他汀類藥物治療效果之間的關(guān)系。方法PCR擴(kuò)增140例高脂血癥患者TaqIB多態(tài)位點(diǎn)相應(yīng)的DNA片段，經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化并電泳后確定基因型，用SPSS10.0軟件采用ANOVA檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果TaqIB多態(tài)B1B2基因型個(gè)體的甘油三酯(triglyceride,TG)基線水平比B2B2基因型個(gè)體明顯高出0.65mmol/L(P=0.041)，B2B2基因型個(gè)體的高密度脂蛋白膽固醇(highdensitylipoprotein,HDLC)基線水平分別比B1B1個(gè)體和B1B2個(gè)體明顯高出0.58mmol/L(P=0.000)和0.62mmol/L(P=0.000)。高脂血癥患者經(jīng)辛伐他汀治療4周后HDLC和低密度脂蛋白膽固醇(lowdensitylipoproteincholesterol,LDLC)水平變化量在TaqIB多態(tài)位點(diǎn)不同基因型間的3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.120，P=0.003；F=3.925，P=0.022)。PostHoc多重比較結(jié)果表明，B1B2基因型個(gè)體的HDLC水平升高值較B2B2基因型個(gè)體明顯增多0.24mmol/L(P=0.003)，B1B2基因型個(gè)體LDLC水平降低值比B1B1個(gè)體明顯減少0.25mmol/L(P=0.024)。結(jié)論B1B1和B1B2基因型個(gè)體他汀類藥物調(diào)脂效果較好，而B2B2個(gè)體對(duì)他汀類藥物治療反應(yīng)較弱，膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因TaqIB多態(tài)可能是預(yù)測(cè)中國粵西地區(qū)高脂血癥患者他汀類藥物調(diào)脂效果個(gè)體化差異的標(biāo)記物之一，具有一定的臨床意義。【關(guān)鍵詞】膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因；單核苷酸多態(tài)性；他汀類藥物；調(diào)脂效果TaqIBpolymorphisminCETPgenein140hyperlipemiapatientsandlipidregulatingeffectsofstatinsZHANGPenghui,LIGuoming,WANGYan,ZHENGKeqin(1.DepartmentofMedicalGenetics;2.DepartmentofCardiology,theAffiliatedHospitalofGuangdongMedicalCollege,Zhanjiang524023，China)Abstract:ObjectiveToprobethecorrelationbetweenlipidregulatingeffectsofstatinsandTaqIBpolymorphisminCETPgeneinhyperlipemiapatients.MethodsThetargetDNAfragmentsofTaqIBpolymorphismwereamplifiedandanalyzedbyPCRRFLPtechniquein140hyperlipemiapatients.ResultsTheTGbaselinelevelinB1B2individualswas0.65mmol/LhigherthanthoseinB2B2individuals(P=0.041).ThebaselineHDLClevelinB2B2individualswas0.58mmol/LhigherthaninB1B1individuals(P=0.000),andwas0.62mmol/LhigherthaninB1B2individuals(P=0.000).Aftersimvastatintherapyfor4weeks,theHDLClevelinB1B2individualswere0.24mmol/LhigherthanthoseinB2B2individuals(P=0.003).LDLClevelthoseinB1B2individualswere0.25mmol/LlowerthanthoseinB1B1individuals(P=0.024).ConclusionTheB1B1andtheB1B2genotypesoftheCETPTaqIBpolymorphismmightresponsebettertosimvastatintherapy,whiletheB2B2carriersresponselittletosimvastatintherapy.CETPTaqIBpolymorphismisoneofthemarkerstopredicttheindividualdifferenceinlipidregulatingeffectsofstatinsinhyperlipemiapatientsinthewestofGuangdongprovince.Keywords:cholesterylestertransferproteingene;singlenucleotidepolymorphism;statins;lipidregulatingeffect膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(cholesterylestertransferprotein，CETP)基因作為參與細(xì)胞膽固醇代謝過程的一個(gè)關(guān)鍵成員，定位于16號(hào)染色體長臂，有16個(gè)外顯子和15個(gè)內(nèi)含子，對(duì)低密度脂蛋白膽固醇(lowdensitylipoproteincholesterol,LDLC)的代謝起著重要作用，是血清LDLC水平的主要決定因素之一，也是動(dòng)脈粥樣硬化的易感基因之一［1］。近年來陸續(xù)有研究［23］報(bào)道CETP基因的單核苷酸多態(tài)與他汀類藥物的調(diào)脂效果及冠心病治療效果的關(guān)系，揭示CETP基因多態(tài)在膽固醇代謝以及對(duì)調(diào)脂藥物反應(yīng)中的重要作用。目前TaqIB是CETP基因中研究較多的一個(gè)多態(tài)，該多態(tài)位于CETP基因內(nèi)含子1中，可在其內(nèi)形成一個(gè)TaqI限制性酶切位點(diǎn)（TaqI多態(tài)性），根據(jù)這一限制性酶切位點(diǎn)是否存在，分為B1等位基因（存在TaqIB限制性酶切位點(diǎn)）、B2等位基因（不存在TaqIB酶切位點(diǎn)）。本研究分析了140例高脂血癥患者CETP基因TaqIB多態(tài)性與患者基線血脂水平及他汀類藥物治療效果的關(guān)系。1對(duì)象與方法1.1研究對(duì)象2006年3月至2008年3月在廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科2區(qū)住院的無血緣關(guān)系的140例高脂血癥患者［總膽固醇（TC）35.69mmol/L,LDLC33.64mmol/L］，其中男75例，女65例，均為漢族，年齡為（66.49±10.96）歲，最近1月內(nèi)未服用調(diào)脂藥物，且經(jīng)詢問病史、體檢、心電圖及胸部X線攝片等檢查排除其他疾病。收集上述病例調(diào)脂治療前的全套血脂檢測(cè)結(jié)果以及其他有關(guān)臨床資料、他汀類藥物（辛伐他汀，20mg/d）調(diào)脂治療4周后的全套血脂檢測(cè)結(jié)果。1.2血漿脂類水平檢測(cè)研究對(duì)象均于禁食12h后取外周血5mL，所有檢測(cè)均由廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科使用BECKMANCOULTER公司試劑盒并在BECKMANCOULTERSYNCHRONLX20生化檢測(cè)儀上進(jìn)行。1.3多態(tài)基因型的確定PCR擴(kuò)增用鹽析法提取基因組DNA。擴(kuò)增引物堿基序列為正義：5'CACTAGCCCAGAGAGAGAGGAGTGCC 3'；反義：5'CTGAGCCCAGCCGCACACTAAC3'。PCR反應(yīng)體積為50pL，其中含寶生物工程（大連）有限公司生產(chǎn)的PrimeSTARTMHS混合液（內(nèi)含高保真擴(kuò)增酶、buffer、dNTP、Mg2+）25pL、上下游引物25pmol/L各0.5pL（終濃度0.25pmol/L）、模板DNA70?100ng2pL、滅菌水22pL。PCR擴(kuò)增反應(yīng)參數(shù)為：冷啟動(dòng)，94°C預(yù)變性5min，98°C變性10s，60°C退火15s，72C延伸30s，30個(gè)循環(huán)，最后72C延伸10min。RFLP分析PCR產(chǎn)物10pL，寶生物工程（大連）有限公司生產(chǎn)的TaqI限制性內(nèi)切酶2pL，10Xbuffer2pL，0.1%BSA2pL，滅菌水5pL。混勻后65C酶切2h。取10pL酶切產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳后，以DL2000DNAmarker作分子量參照，電泳時(shí)間40min，用凝膠成像系統(tǒng)觀察電泳結(jié)果并確定基因型。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS10.0軟件對(duì)高脂血癥患者辛伐他汀治療前的基線血脂水平及治療4周后的血脂水平變化量作單因素方差分析（OnewayANOVA）、PostHoc多重比較。PV0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果TaqIB多態(tài)位點(diǎn)的PCRRFLP電泳結(jié)果見圖1。1.B1B2雜合子（171bp、364bp、535bp）；2.B1B1純合子（171bp、364bp）；3.B2B2純合子（535bp）；M：DL 2000分子量標(biāo)準(zhǔn)。TaqIB多態(tài)B1B2基因型個(gè)體的TG基線水平比B2B2基因型個(gè)體明顯高出0.65mmol/L(P=0.041),B2B2基因型個(gè)體的HDLC基線水平分別比B1B1個(gè)體和B1B2個(gè)體明顯高出0.58mmol/L(P=0.000)和0.62mmol/L(P=0.000)。高脂血癥患者的基線血脂水平詳見表1。表1CETP基因TaqIB多態(tài)各基因型患者辛伐他汀治療前基線血脂水平(略)高脂血癥患者經(jīng)辛伐他汀治療4周后HDLC和LDLC水平變化量在TaqIB多態(tài)位點(diǎn)不同基因型的3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.120,P=0.003；F=3.925,P=0.022)。PostHoc多重比較結(jié)果表明,B1B2基因型個(gè)體的HDLC水平升高值較B2B2基因型個(gè)體(B2B2基因型個(gè)體HDLC水平升高值為負(fù)值)明顯增多0.24mmol/L(P=0.003),B1B2基因型個(gè)體LDLC水平降低值比B1B1個(gè)體明顯減少0.25mmol/L(P=0.024),即B1B1基因型個(gè)體LDLC水平降得更低。辛伐他汀治療4周后CETP基因TaqIB多態(tài)各基因型患者的血脂水平變化量的比較詳見表2。表2辛伐他汀治療4周后CETP基因TaqIB多態(tài)各基因型患者的血脂水平變化量(略)3討論流行病學(xué)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，血清膽固醇水平的改變，尤其是LDLC濃度的升高是致動(dòng)脈粥樣硬化的主要原因之一，甚至可使早發(fā)性冠心病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加數(shù)倍［4］。他汀類藥物通過抑制內(nèi)源性膽固醇合成的限速酶HMGCoA還原酶，降低體內(nèi)膽固醇的合成，從而調(diào)節(jié)血清膽固醇水平。大量的臨床實(shí)踐表明，由于患者的遺傳背景各不相同，此類調(diào)血脂藥物的療效具有明顯的個(gè)體差異性［5 6］。Fiegenbaum等［7］和Carlquist等［2］的研究結(jié)果顯示，B2B2基因型攜帶者在服用他汀類藥物后收到更好的調(diào)脂效果。而與上述兩個(gè)研究結(jié)果有所不同的是，Kotake等［8］和vanVenrooij等［9］的研究結(jié)果則表明，經(jīng)過他汀類藥物的治療后，其中攜帶有B1B1基因型的患者能收到更好的治療效果。Kuivenhoven等［10］對(duì)807例參加REGRESS的冠心病患者進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，在用普伐他汀40mg/d治療2a后，B1B1基因型患者冠狀動(dòng)脈狹窄進(jìn)展減慢，但對(duì)于B2B2基因型無影響，而對(duì)于血脂的影響，CETP各基因型之間無明顯的差異。朱燕林等［11］對(duì)北京協(xié)和醫(yī)院內(nèi)科63例患者的研究表明，經(jīng)辛伐他汀治療后，B1B1基因型個(gè)體較B2等位基因攜帶者TC及LDLC水平降低顯著。但也有研究未能得出陽性結(jié)果。Boekholdt等［12］、deGrooth等［13］及Freeman等［14］的研究結(jié)果均表明三類基因型受試者的普伐他汀的治療作用沒有明顯區(qū)別。本文發(fā)現(xiàn)B2B2基因型個(gè)體的HDLC基線水平明顯比B1B1和B1B2基因型個(gè)體高，而較高HDLC水平有助于降低心血管疾病的發(fā)病率，提示B2B2基因型個(gè)體發(fā)生心血管疾病的危險(xiǎn)性可能低于其他兩種基因型的個(gè)體。B1B1和B1B2個(gè)體經(jīng)辛伐他汀治療4周后HDLC水平上升而B2B2個(gè)體則下降，B1B2個(gè)體上升幅度最大；3種基因型個(gè)體經(jīng)辛伐他汀治療4周后LDLC水平均下降，B1B1個(gè)體下降幅度最大，其次是B1B2個(gè)體，B2B2個(gè)體下降幅度最小。顯見，粵西地區(qū)高脂血癥患者中CETP基因B1B1和B1B2基因型個(gè)體的辛伐他汀的調(diào)脂效果較好，而B2B2個(gè)體對(duì)辛伐他汀的反應(yīng)較弱，這提示患者在接受調(diào)脂治療前先作有關(guān)的基因型分析，根據(jù)分析結(jié)果采用合適的調(diào)脂藥物，可能收到更好的治療效果。本文結(jié)果與國內(nèi)外有關(guān)TaqIB多態(tài)性對(duì)他汀類藥物調(diào)脂效果的部分研究結(jié)論未能一致，可能與種族、實(shí)驗(yàn)對(duì)象、實(shí)驗(yàn)方法存在差異有關(guān)。本文結(jié)果表明膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因TaqIB多態(tài)可能是預(yù)測(cè)中國粵西地區(qū)高脂血癥患者他汀類藥物調(diào)脂效果個(gè)體化差異的標(biāo)記物之一，具有一定的臨床意義。然而，高脂血癥患者的辛伐他汀治療的效果除了受到遺傳因素的影響外，還受到年齡、性別、體重、身高以及一些生活習(xí)慣比如吸煙等條件的影響，且本研究受條件所限，病例數(shù)相對(duì)較少，而且沒有測(cè)定患者血漿膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白濃度和活性等指標(biāo)，研究有一定的局限性，還有待在日后的研究中進(jìn)一步完善。晉升網(wǎng)()致力于成為醫(yī)務(wù)工作者晉升職稱心靈導(dǎo)師；是目前國內(nèi)收錄醫(yī)學(xué)期刊、醫(yī)學(xué)雜志最多最權(quán)威的醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)平臺(tái)；提供免費(fèi)醫(yī)學(xué)期刊在線閱讀；網(wǎng)羅和甄選海量優(yōu)秀醫(yī)學(xué)論文檢索，獨(dú)立研發(fā)醫(yī)學(xué)在線資源分享庫和醫(yī)學(xué)在線模擬考試庫；整合刊類、標(biāo)題、關(guān)鍵詞檢索及全文檢索，并獨(dú)家研發(fā)刊社管理和刊社加盟系統(tǒng)、在線投稿、在線查稿、在線閱讀、遠(yuǎn)程審稿、在線下載等系統(tǒng)；聚刊社力量，建服務(wù)平臺(tái)，讓晉升網(wǎng)通過“專業(yè)”走入每一個(gè)醫(yī)務(wù)人員的身邊是我們不懈的追求目標(biāo)；【參考文獻(xiàn)】TOC\o"1-5"\h\zLusisAJ.Atherosclerosis[J].Nature,2000,407(6801):233 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