現(xiàn)代分子生物學II考試重點現(xiàn)代分子生物學II考試重點現(xiàn)代分子生物學II考試重點xxx公司現(xiàn)代分子生物學II考試重點文件編號：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準審核制定方案設計，管理制度現(xiàn)代分子生物學II考試重點(80%)一、名詞解釋基因：啟動子：增強子：全酶：核心酶：核酶：三元復合物：SD序列：同工tRNA：分子伴侶：信號肽：核定位序列：操縱子：弱化子:葡萄糖效應（代謝物阻遏效應、降解物抑制作用）：安慰性誘導物：順式作用元件：反式作用因子：基因家簇：斷裂基因。二、填空題1、真核生物的mRNA加工過程中，5’端加上（），在3’端加上（），后者由（）催化。如果被轉(zhuǎn)錄基因是不連續(xù)的，那么，（）一定要被切除，并通過（）過程將（）連接在一起。2、–10位的（TATA）區(qū)和–35位的（TTGACA）區(qū)是RNA聚合酶與啟動子的結(jié)合位點，能與σ因子相互識別而具有很高的親和力。3、決定基因轉(zhuǎn)錄基礎頻率的DNA元件是（啟動子）,它是（RNA聚合酶）的結(jié)合位點4、原核生物RNA聚合酶核心酶由（2αββ′ω）組成，全酶由（2αββ′ωσ）組成。5、基因表達調(diào)控主要表現(xiàn)在兩種水平：（轉(zhuǎn)錄水平）和（轉(zhuǎn)錄后水平）。其中，后者又包括mRNA加工成熟水平上的調(diào)控和（翻譯水平上的調(diào)控）。6、不同生物使用不同的信號來指揮基因調(diào)控。原核生物中，（營養(yǎng)狀況）和（環(huán)境因素）對基因表達起主要影響。在高等真核生物中，（激素水平）和（發(fā)育階段）是基因表達調(diào)控的最主要手段。7、原核生物的基因調(diào)控主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上，根據(jù)調(diào)控機制的不同可分為（正轉(zhuǎn)錄調(diào)控）和（負轉(zhuǎn)錄調(diào)控）兩大類。在負轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)中，調(diào)節(jié)基因的產(chǎn)物是（阻遏蛋白）。根據(jù)其性質(zhì)可分為（負控誘導）和（負控阻遏）系統(tǒng)。8、在葡萄糖存在的情況下，即使在細菌中加入乳糖、半乳糖或其他的誘導物，與其相應的操縱子也不會啟動，不會產(chǎn)生出代謝這些糖的酶來，這種現(xiàn)象稱為（葡萄糖效應）或稱為降解物抑制作用。9、細菌實施應急反應的信號是（鳥苷四磷酸）和（鳥苷五磷酸）。產(chǎn)生這兩種物質(zhì)的誘導物是（空載tRNA）。10、Lac阻遏蛋白由__I__基因編碼，結(jié)合__O__序列對Lac操縱子（元）起阻遏作用。11、Trp操縱子的精細調(diào)節(jié)包括__阻遏機制_及_弱化機制_兩種機制。12、原核DNA合成酶中（）的主要功能是合成前導鏈和（）片段。13、在DNA復制過程中，（）可以穩(wěn)定已被解開的DNA單鏈，阻止復性和保護單鏈不被核酸酶降解。14、在細胞周期特定時間可發(fā)生（）、（）、（）和ADP核糖基化等修飾。15、無細胞翻譯系統(tǒng)翻譯出來的多肽鏈通常比在完整的細胞中翻譯的產(chǎn)物要長，這是因為（）。16、Trp操縱子的精細調(diào)節(jié)包括（）及（）兩種機制。17、組蛋白甲基化誘導了DNA的（）：因為前者是招募DNA（）的信號，在異染色質(zhì)蛋白HP1的協(xié)助下，DNA發(fā)生（）。結(jié)果基因轉(zhuǎn)錄被抑制。18、人類基因組測序策略一般有克隆重疊群法和（）法。19、端粒的組成成分主要是蛋白質(zhì)和RNA，其中的蛋白質(zhì)具有（）活性，而RNA則作為合成（），所以端粒DNA通常帶有富含（）的短重復序列。20、核糖體上能夠結(jié)合tRNA的部位有（）部位，（）部位和（）部位。21、在轉(zhuǎn)錄起始階段RNA聚合酶移動到轉(zhuǎn)錄起始點上，第一個rNTP轉(zhuǎn)錄開始，σ因子釋放，此時形成（）三元復合體。12-21【參考答案】1DNA聚合酶III,岡崎；2單鏈結(jié)合蛋白；3甲基化、乙酰化、磷酸化；4沒有經(jīng)歷后加工，如剪切；5阻遏機制，弱化機制；6甲基化，甲基化酶，甲基化；7全基因組鳥槍；8逆轉(zhuǎn)錄酶，端粒DNA的模板，G；9A位點，P位點，E位點；10酶-啟動子-rNTP。三、選擇題1、下列有關(guān)TATA盒(Hognessbox)的敘述,哪個是正確的:BA.它位于第一個結(jié)構(gòu)基因處B.它和RNA聚合酶結(jié)合C.它編碼阻遏蛋白D.它和反密碼子結(jié)合2、轉(zhuǎn)錄需要的原料是:A.DNTPB.dNDPC.dNMPD.NTPE.NMP(D)3、DNA模板鏈為5’-ATTCAG-3A.5’-GACTTA-3’B.5’-CTGAAT-3’C.5’-UAAGUC-34、DNA復制和轉(zhuǎn)錄過程有許多相同點,下列描述哪項是錯誤的DA.轉(zhuǎn)錄以DNA一條鏈為模板,而以DNA兩條鏈為模板進行復制B.在這兩個過程中合成均為5`-3`方向C.復制的產(chǎn)物通常情況下大于轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物D.兩過程均需RNA引物5、下面那一項不屬于原核生物mRNA的特征（C）A：半衰期短B：存在多順反子的形式C：5’端有帽子結(jié)構(gòu)D：36、真核細胞中的mRNA帽子結(jié)構(gòu)是（A）A.7-甲基鳥嘌呤核苷三磷酸B.7-甲基尿嘧啶核苷三磷酸C.7-甲基腺嘌呤核苷三磷酸D.7-甲基胞嘧啶核苷三磷酸7、下面哪一項是對三元轉(zhuǎn)錄復合物的正確描述（B）（A）σ因子、核心酶和雙鏈DNA在啟動子形成的復合物（B）全酶、模板DNA和新生RNA形成的復合物（C）三個全酶在轉(zhuǎn)錄起始點形成的復合物（D）σ因子、核心酶和促旋酶形成的復合物8、多數(shù)氨基酸都有兩個以上密碼子，下列哪組氨基酸只有一個密碼子？D

A．蘇氨酸、甘氨酸B．脯氨酸、精氨酸C．絲氨酸、亮氨酸D．色氨酸、甲硫氨酸E．天冬氨酸和天冬酰胺9、tRNA分子上結(jié)合氨基酸的序列是BA．CAA-3′B．CCA-3′C．AAC-3′D．ACA-3′E．AAC-3′10、關(guān)于遺傳密碼，下列說法正確的是BCEA．20種氨基酸共有64個密碼子B．堿基缺失、插入可致框移突變C．AUG是起始密碼D．UUU是終止密碼E．一個氨基酸可有多達6個密碼子11、tRNA能夠成為氨基酸的轉(zhuǎn)運體、是因為其分子上有ADA．-CCA-OH3′末端B．3個核苷酸為一組的結(jié)構(gòu)C．稀有堿基D．反密碼環(huán)E．假腺嘌吟環(huán)12、蛋白質(zhì)生物合成中的終止密碼是(ADE)。（A）UAA（B）UAU（C）UAC（D）UAG（E）UGA13、Shine-Dalgarno順序(SD-順序)是指:（A）A.在mRNA分子的起始碼上游8-13個核苷酸處的順序B.在DNA分子上轉(zhuǎn)錄起始點前8-13個核苷酸處的順序C.16srRNA3‘端富含嘧啶的互補順序D.啟動基因的順序特征14、“同工tRNA”是：(C)(A)識別同義mRNA密碼子(具有第三堿基簡并性)的多個tRNA(B)識別相同密碼子的多個tRNA(C)代表相同氨基酸的多個tRNA(D)由相同的氨酰tRNA合成酶識別的多個tRNA15、反密碼子中哪個堿基對參與了密碼子的簡并性(搖擺)。（A）（A）第—個(B)第二個(C)第三個(D)第一個與第二個16、與mRNA的GCU密碼子對應的tRNA的反密碼子是（B）（A）CGA（B）IGC（C）CIG（D）CGI17、真核與原核細胞蛋白質(zhì)合成的相同點是（C）A翻譯與轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)進行B模板都是多順反子C都需要GTPD甲酰蛋氨酸是第一個氨基酸18、是翻譯延長所必需的B12、氨基酸與tRNA連接D13、遺傳密碼的擺動性AA、mRNA上的密碼子與tRNA上的反密碼子不一定嚴格配對B、轉(zhuǎn)肽酶C、酯鍵D、磷酸化酶E、N-C糖甘鍵19、原核生物調(diào)節(jié)基因表達的意義是為適應環(huán)境，維持（A）A、細胞分裂B、細胞分化C器官分化D組織分化20、原核生物的基因調(diào)控主要發(fā)生在（A）。A轉(zhuǎn)錄水平B轉(zhuǎn)譯水平C轉(zhuǎn)錄后水平D轉(zhuǎn)譯后水平21、關(guān)于管家基因敘述錯誤的是D

(A)在生物個體的幾乎各生長階段持續(xù)表達(B)在生物個體的幾乎所有細胞中持續(xù)表達

(C)在生物個體全生命過程的幾乎所有細胞中表達(D)在生物個體的某一生長階段持續(xù)表達(E)在一個物種的幾乎所有個體中持續(xù)表達22、一個操縱子（元）通常含有B

(A)數(shù)個啟動序列和一個編碼基因

(B)一個啟動序列和數(shù)個編碼基因(C)一個啟動序列和一個編碼基因

(D)兩個啟動序列和數(shù)個編碼基因(E)數(shù)個啟動序列和數(shù)個編碼基因23、下列情況不屬于基因表達階段特異性的是，一個基因在A

(A)分化的骨骼肌細胞表達，在未分化的心肌細胞不表達

(B)胚胎發(fā)育過程不表達，出生后表達(C)胚胎發(fā)育過程表達，在出生后不表達

(D)分化的骨骼肌細胞表達，在未分化的骨骼肌細胞不表達

(E)分化的骨骼肌細胞不表達，在未分化的骨骼肌細胞表達24、乳糖操縱子（元）的直接誘導劑是E

(A)葡萄糖(B)乳糖(C)β一半乳糖苷酶(D)透酶(E)異構(gòu)乳糖25、Lac阻遏蛋白結(jié)合乳糖操縱子（元）的B

(A)CAP結(jié)合位點(B)O序列(C)P序列(D)Z基因(E)I基因26、cAMP與CAP結(jié)合、CAP介導正性調(diào)節(jié)發(fā)生在C

A)葡萄糖及cAMP濃度極高時(B)沒有葡萄糖及cAMP較低時

C沒有葡萄糖及cAMP較高時(D有葡萄糖及cAMP較低時(E)有葡萄糖及CAMP較高時27、Lac阻遏蛋白由D

(A)Z基因編碼(B)Y基因編碼(C)A基因編碼(D)I基因編碼(E)以上都不是28、色氨酸操縱子（元）調(diào)節(jié)過程涉及E

(A)轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)(B)轉(zhuǎn)錄延長調(diào)節(jié)(C)轉(zhuǎn)錄激活調(diào)節(jié)D翻譯水平調(diào)節(jié)(E)轉(zhuǎn)錄／翻譯調(diào)節(jié)29、乳糖、阿拉伯糖、色氨酸等小分子物質(zhì)在基因表達調(diào)控中作用的共同特點是DA與啟動子結(jié)合B與DNA結(jié)合影響模板活性E與操縱基因結(jié)合C與RNA聚合酶結(jié)合影響其活性D與蛋白質(zhì)結(jié)合影響該蛋白質(zhì)結(jié)合DNA30、DNA損傷修復的SOS系統(tǒng)BA是一種保真性很高的復制過程BLexA蛋白是一系列操縱子的阻遏物CRecA蛋白是一系列操縱子的阻遏物D它只能修復嘧啶二聚體31、以下關(guān)于cAMP對原核基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用的敘述錯誤的是DAcAMP可與分解代謝基因活化蛋白(CAP)結(jié)合成復合物BcAMP-CAP復合物結(jié)合在啟動子前方C葡萄糖充足時，cAMP水平不高D葡萄糖和乳糖并存時，細菌優(yōu)先利用乳糖E葡萄糖和乳糖并存時，細菌優(yōu)先利用葡萄糖32、下述關(guān)于管家基因表達的描述最確切的是A在生物個體的所有細胞中表達B在生物個體生命全過程幾乎所有細胞中持續(xù)表達C在生物個體生命全過程部分細胞中持續(xù)表達D特定環(huán)境下，在生物個體生命全過程幾乎所有細胞中持續(xù)表達。33、與DNA結(jié)合并阻止轉(zhuǎn)錄進行的蛋白質(zhì)稱為A正調(diào)控蛋白B反式作用因子C誘導物及其相關(guān)蛋白D阻遏物及其相關(guān)蛋白34大多數(shù)基因表達調(diào)控的最基本環(huán)節(jié)是A復制水平B轉(zhuǎn)錄水平C轉(zhuǎn)錄起始水平D轉(zhuǎn)錄后加工水平35、反式作用因子是指A具有激活動能的調(diào)節(jié)蛋白B具有抑制功能的調(diào)節(jié)蛋白C對自身基因具有激活功能的調(diào)節(jié)蛋白D對另一基因具有功能的調(diào)節(jié)蛋白36、順式作用元件是指下述的ATATA盒和CCAAT盒B具有調(diào)節(jié)功能的DNA序列C5’側(cè)翼序列D3’側(cè)翼序列37、以下關(guān)于cAMP對原核基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用的敘述錯誤的是AcAMP可與分解代謝基因活化蛋白CAP結(jié)合成復合物BcAMP-CAP復合物結(jié)合在啟動子前方C葡萄糖充足時，cAMP水平不高D葡萄糖和乳糖并存時，細菌優(yōu)先利用乳糖38、原核基因表達調(diào)控的意義是A調(diào)節(jié)生長與分化B調(diào)節(jié)發(fā)育與分化C調(diào)節(jié)生長、發(fā)育與分化D調(diào)節(jié)代謝，適應環(huán)境39、DNA損傷修復的SOS系統(tǒng)A是一種保真性很高的復制過程BLexA蛋白是一系列操縱子的阻遏物CRecA蛋白是一系列操縱子的阻遏物D它只能修復嘧啶二聚體40、Lac阻遏蛋白由AZ基因編碼BY基因編碼CA基因編碼DI基因編碼41、有關(guān)DNA的變性ADNA鏈斷裂引起B(yǎng)核苷酸之間磷酸二酯鍵的斷裂C維持雙螺旋穩(wěn)定的氫鍵的斷裂DDNA變性后，分子量降低32-41【參考答案】BDCDBDDBDC四、簡答題證明DNA是遺傳物質(zhì)的兩個關(guān)鍵性實驗是什么？Avery肺炎鏈球菌轉(zhuǎn)化實驗(R\S\小鼠-證明基因就是DNA分子)、Hershey和Chase的噬菌體DNA侵染細菌實驗什么是DNA重組技術(shù)？DNA重組技術(shù)又稱基因工程，目的是將不同的DNA片段（如某個基因或基因的一部分）按照人們的設計定向連接起來，在特定的受體細胞中與載體同時復制并得到表達，產(chǎn)生影響受體細胞的新的遺傳性狀。DNA重組技術(shù)是核酸化學、蛋白質(zhì)化學、酶工程及微生物學、遺傳學、細胞學長期深入研究的結(jié)晶，而限制性內(nèi)切酶、DNA連接酶及其他工具酶的發(fā)現(xiàn)與應用則是這一技術(shù)得以建立的關(guān)鍵。比較原核生物和真核生物基因組DNA的特點。原核生物基因組結(jié)構(gòu)特點（1）基因組小（2）結(jié)構(gòu)簡練（3）存在含多順反子的轉(zhuǎn)錄單元（4）有重疊基因（Sanger發(fā)現(xiàn)）真核生物基因組結(jié)構(gòu)特點（1）基因組結(jié)構(gòu)龐大（2）結(jié)構(gòu)較復雜，含大量重復序列（3）轉(zhuǎn)錄單元為單順反子（4）功能DNA序列大多被非功能DNA所隔開（外顯子和內(nèi)含子），即基因有不連續(xù)性（5）非編碼區(qū)多（6）存在C值矛盾原核、真核生物DNA聚合酶的特性。原核生物中的DNA聚合酶(大腸桿菌）性質(zhì)聚合酶Ⅰ聚合酶Ⅱ聚合酶Ⅲ3'5'外切活性+++5'3'外切活性+--5'3'聚合活性+中+很低+很高新生鏈合成--+聚合酶Ⅰ：主要是對DNA損傷的修復；以及在DNA復制時切除RNA引物并填補其留下的空隙。聚合酶Ⅱ：修復紫外光引起的DNA損傷聚合酶Ⅲ：DNA復制的主要聚合酶，還具有3’-5’外切酶的校對功能，提高DNA復制的保真性真核生物中的DNA聚合酶αβγδε定位細胞核細胞核線粒體細胞核細胞核3‘-5’功能引物合成修復作用線粒體DNA的復制核DNA的復制RNA引物去掉后把缺口補全細胞通過哪幾種修復系統(tǒng)對DNA損傷進行修復？簡述DNA錯配修復的過程。DNA修復系統(tǒng)功能所用的酶錯配修復恢復錯配Dam甲基化酶切除修復(堿基、核甘酸）切除突變的堿基和核甘酸片斷DNA糖苷水解酶AP核酸內(nèi)切酶重組修復復制后的修復，重新啟動停滯的復制叉DNA切割酶DNA直接修復修復嘧啶二體或甲基化DNADNA光解酶甲基轉(zhuǎn)移酶SOS系統(tǒng)DNA的修復，導致變異錯配修復的過程：一：根據(jù)母鏈甲基化原則找出錯配堿基①發(fā)現(xiàn)堿基錯配②在水解ATP的作用下，MutS,MutL與堿基錯配位點的DNA雙鏈結(jié)合③MutS—MutL在DNA雙鏈上移動，發(fā)現(xiàn)甲基化DNA后由MutH切開非甲基化的子鏈二：堿基錯配修復過程：當錯配堿基位于切口3‘下游端時，在MutL—MutS、解鏈酶Ⅱ、DNA外切酶Ⅵ或RecJ核酸酶的作用下，從錯配堿基3‘下游端開始切除單鏈DNA直到原切口，并在PolⅢ和SSB的作用下合成新的子鏈片段。若錯配堿基位于切口的5’上游端，則在DNA外切酶Ⅰ或Ⅹ的作用下，從錯配堿基5‘上游端開始切除單鏈DNA直到原切口，再合成新的子鏈片段（詳見課本p53）比較原核生物和真核生物mRNA的特點。原核生物mRNA的特征：（1）半衰期短（2）多以多順反子的形式存在（3）5’端無“帽子”結(jié)構(gòu)，3’端沒有或只有較短的poly（A）結(jié)構(gòu)。（4）原核生物常以AUG（有時GUG，甚至UUG）作為起始密碼子真核生物mRNA的特征：（1）5’端存在“帽子”結(jié)構(gòu)（2）多數(shù)mRNA3’端具有poly（A）尾巴（組蛋白除外）（3）以單順反子存在（4）而真核生物幾乎永遠以AUG作為起始密碼子。真核生物的原始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需要經(jīng)過哪些加工才能成為成熟的mRNA？答：（1）、在5’端加帽，5’端的一個核苷酸總是7-甲基鳥核苷三磷酸（m7Gppp）。（2）、3’端加尾，多聚腺苷酸尾巴。準確切割，（3）、RNA的剪接，參與RNA剪接的物質(zhì)：snRNA、snRNP（4）、RNA的編輯，編輯（editing）是指轉(zhuǎn)錄后的RNA在編碼區(qū)發(fā)生堿基的突變、加入或丟失等現(xiàn)象。（5.）、RNA的再編碼，mRNA有時可以改變原來的編碼信息，以不同的方式進行翻譯（6.）、RNA的化學修飾，人細胞內(nèi)rRNA分子上就存在106種甲基化和95種假尿嘧啶產(chǎn)物。原核啟動子和真核啟動子的構(gòu)成原核生物啟動子結(jié)構(gòu)：TATA區(qū)(-10區(qū)）:酶的緊密結(jié)合位點（富含AT堿基，利于雙鏈打開）TTGACA區(qū)（-35區(qū)）：提供了RNA聚合酶全酶識別的信號●真核生物啟動子(1)核心啟動子:定義：指保證RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄正常起始所必需的、最少的DNA序列，包括轉(zhuǎn)錄起始位點及轉(zhuǎn)錄起始位點上游TATA區(qū)(TATA常在-25bp左右，相當于原核的-10序列T85A97T93A85A`作用：選擇正確的轉(zhuǎn)錄起始位點，保證精確起始(2)上游啟動子元件:包括CAAT盒（CCAAT）和GC盒（GGGCGG）等(CAAT：-70--80bpGGGCGG：-80--110bp)`作用：控制轉(zhuǎn)錄起始頻率。遺傳密碼有哪些特性？試述其其擺動性連續(xù)性、簡并性、通用性與特殊性、擺動性轉(zhuǎn)運氨基酸的tRNA上的反密碼子需要通過堿基互補與mRNA上的遺傳密碼子反向配對結(jié)合，在密碼子與反密碼子的配對中，前兩對嚴格遵守堿基配對原則，第三對堿基有一定的自由度，可以“擺動”，這種現(xiàn)象稱為密碼子的擺動性。（在密碼子中，是第三對堿基，在反密碼子中，是第一對堿基）10、肽鏈延伸由許多循環(huán)組成，每加一個氨基酸就是一個循環(huán)，每個循環(huán)包括哪些步驟

肽鏈延伸由許多循環(huán)組成，每加一個氨基酸就是一個循環(huán)，每個循環(huán)包括：AA-tRNA與核糖體結(jié)合、肽鍵的生成和移位。(1)AA-tRNA與核糖體A位點的結(jié)合：起始復合物形成以后，第二個AA-tRNA在延伸因子EF-Tu及GTP的作用下，生成AA-tRNA。EF-Tu。GTP復合物，然后結(jié)合到核糖體的A位上。這時GTP被水解釋放，通過延伸因子EF-Ts再生GTP，形成EF-Tu。GTP復合物，進入新一輪循環(huán)（2）肽鍵形成：在核糖體。mRNA.。AA-tRNA復合物中，AA-tRNA占據(jù)A位，fMet-tRNA*fMet占據(jù)p位。在肽基轉(zhuǎn)移酶的催化下，A位上的AA-tRNA轉(zhuǎn)移到P位，fMet-tRNA*fMet上的氨基酸生成肽鍵。起始tRNA在完成使命后離開核糖體p位點，A位點準備接受新的AA-tRNA，開始下一輪合成反應（3）移位：核糖體通過EF-G介導的GTP水解提供的能量向mRNA模板的3‘端移動一個密碼子，使二肽酰—tRNA2完全進入P位，準備開始新一輪的肽鏈延伸。11、真核生物和原核生物在翻譯的起始過程有哪些區(qū)別？

原核生物真核生物起始氨基酸甲酰甲硫氨酸甲硫氨酸起始AA-tRNAfMet-tRNAi*fMetMet-tRNAi*Met起始復合物形成30S小亞基首先與mRNA模板相結(jié)合，再與fMet-tRNA*fMet結(jié)合，最后與50S大亞基結(jié)合40s小亞基先與Met-tRNA*Met相結(jié)合，再與模板mRNA結(jié)合，最后與60S大亞基結(jié)合成80S。mRNA。Met-tRNA*Met起始復合物核糖體較小，70S較大80S起始因子較少較多mRNA無帽子結(jié)構(gòu)有帽子結(jié)構(gòu)和多聚A尾巴，都參與形成翻譯起始復合物12、比較PCR擴增和細胞內(nèi)DNA復制的異同。PCR擴增DNA復制環(huán)境體外復制，加熱，90度左右體內(nèi)，溫和的環(huán)境模板DNA雙鏈DNA雙鏈原料4種脫氧核糖核苷酸4種脫氧核糖核苷酸酶主要是taq聚合酶DNA解旋酶、聚合酶、連接酶等引物需人工合成的引物引物酶合成引物成分步驟變性—退火—延伸解旋—起始—延伸—結(jié)束原則堿基互補配對原則堿基互補配對原則設計一個典型的PCR擴增程序和PCR反應體系。94℃,5min典型體系：10Xbuffer（含Mg2+），5ul；2.5mMdNTP，4ul；10uMprimer1,2ul；10uMprimer2,2ul；模板，1ul；Taq，1ul；ddH2O，35ul典型的程序94℃，1min55℃，1min30次72℃，2min72℃，1014、基因敲除技術(shù)的基本原理。基因敲除（geneknock-out）又稱基因打靶，通過外源DNA與染色體DNA之間的同源重組，進行精確的定點修飾和基因改造，具有專一性強、染色體DNA可與目的片段共同穩(wěn)定遺傳等特點基因敲除分為完全基因敲除和條件型基因敲除（又稱不完全基因敲除）兩種。完全基因敲除是指通過同源重組法完全消除細胞或者動物個體中的靶基因活