中藥對幽門螺桿菌的體外聯合抗菌實驗(作者：單位：郵編：)【摘要】目的研究黃連、烏梅、蜂膠對幽門螺桿菌的體外聯合抗菌作用。方法應用棋盤法，以瓊脂平板法測定兩兩組合的不同濃度中藥提取物對Hp的最低抑菌濃度，計算部分抑菌濃度(FIC)指數并判定聯合效應。結果黃連與蜂膠聯合應用后，其FIC指數為0.13(V0.5);黃連與烏梅聯合應用后，其FIC指數為0.75(>0.5);烏梅與蜂膠聯合應用后，其FIC指數為0.19(V0.5)。結論黃連與蜂膠聯合應用及烏梅與蜂膠聯合應用，對Hp表現為協同作用，且烏梅與蜂膠聯合應用協同作用較強；黃連與烏梅聯合應用對Hp表現為相加作用；3種中藥之間均無拮抗作用。【關鍵詞】黃連烏梅蜂膠幽門螺桿菌聯合抗菌實驗CombinedAntibacterialActivityofThreeChineseDrugsAgainstHelicobacterPyloriAbstractObjective:TostudythecombinedantibacterialactivityofCoptischinensis,DarkPlumFruitandBeePropolisproagainstHelicobacterpylori(Hp)MethodsTheprotocolwasdesignedbycheckboardmethod.TheMICsofCoptischinensis,DarkPlumFruitandBeePropolisproaloneorintwo-and-twocombinationagainstHpweredeterminedbyagarplatemethod,andtheFICindexeswascalculatedfortheevaluationofthecombinedeffects.ResultsWhenCoptischinensiscombinedwithBeePropolispro,theFICindexwas0.13(v0.5)butwas0.75(>0.5)whencombinedwithDarkPlumFruit;TheFICindexwas0.19(v0.5)whenDarkPlumFruitcombinedwithBeePropolispro.ConclusionBothCoptischinensisincombinationwithBeePropolisproorDarkPlumFruitincombinationwithBeePropolisprohadsynergisticactiononHp.withthelattershowingmorepotentsynergisticaction.CoptischinensiscombinedwithDarkPlumFruitCeorgihadadditivityagainstHp.NoantagonisticactionswerenotedinCoptischinensis,BeePropolisproandDarkPlumFruit.Keywords:Coptischinensis;DarkPlumFruit;BeePropolispro;Helicobacterpylori(Hp);combineddrugsusceptibilitytest幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,Hp)是由Warren和Marshall于1982年首次從慢性活動性胃炎患者胃竇黏膜活檢組織中分離出來并培養成功的，目前認為該菌與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關淋巴樣組織(MALT)惡性淋巴瘤以及腸型胃癌密切相關，WH(于1994年將其列為胃癌的I類生物致癌因子］1］。據調查，Hp感染在世界范圍內廣泛存在，世界平均感染率為50%左右，我國各地自然人群中的Hp感染率(成人)均在50%以上。西醫采用以抗生素為主的三聯、四聯療法治療Hp感染，但隨著抗生素的使用，臨床上觀察到耐藥菌株也越來越多。中醫藥治療疾病有其獨到之處，在注重局部病變的同時，更注重整體的調節，加上中藥組方變化大，可供選擇的藥物多，其優勢逐漸被人們認同。本研究考察了3種傳統中藥對Hp的體外抗菌作用。選用棋盤法測定其單獨及聯合藥敏實驗時各藥物的最低抑菌濃度(MinimalInhibitoryConcentration,MIC),以部分抑菌濃度(FractionalInhibitoryConcentration,FIC)指數評價藥物的體外聯合抗菌效應，為研制抗Hp新的中藥組方提供實驗依據。1材料1.1Hp菌株本研究采用的Hp菌株為國際統一的SS1(SydneyStrain"菌株，經鑒定cagA(+)和VacA(+).由河北醫科大學中醫學院微生物室提供。1.2培養基[2]體培養基為改良Skirrow選擇性培養基，即在1000ml改良Skirrow瓊脂基礎中加入抗生素混合液，使終濃度為四環素(TMP)5mg/L,萬古霉素10mg/L,多粘菌素B2500U/L,并加入50ml脫纖維凍融兔血。改良Skirrow瓊脂基礎和布氏肉湯均為北京陸橋技術有限責任公司產品。2方法2.1實驗藥液制備稱取黃連、烏梅、蜂膠3種中藥，按重量比加10倍的蒸餾水浸泡30min后，用文火煎熬30min，倒出煎液，藥渣再加等量蒸餾水煎熬30min，2次煎液合并，3500r/min離心15min，倒出上清液，蒸發濃縮成含生藥量1g/mL濃度的藥液。以最少量的二甲基亞砜溶劑溶解后，使其母液濃度分別為100mg/mL、50mg/mL、50mg/mL.2.2菌液的制備將培養3d的Hp菌株用無菌生理鹽水洗下后，配成布氏肉湯菌懸液，再用標準比濁管比濁，校正菌液濃度，使其菌液濃度相當于1x108(ColonyFormingUnits,CFU)/mL.2.3MIC的測定[3,4]將上述3種藥物的母液以二甲基亞砜倍比稀釋，得到以下7種濃度藥液：黃連(100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.57mg/mL'烏梅(50、25'12.5'6.25'3.13、1.57、0.78mg/mL、蜂膠(50、25、12.5、6.25、3.13、1.57、0.78mg/mL。按黃連+蜂膠'黃連+烏梅'烏梅+蜂膠3組藥物兩兩配對，將每組配對藥物的不同濃度藥液按棋盤法設計，兩兩配比，每種中藥液均加50卩L;再向每管中加入900卩L改良Skirrow選擇性培養基，充分混合均勻，加入64孔平板培養皿中；再將配好的菌液分別在培養基上涂布5L,放人培養罐中(85%N210%C025%02),濕度保持在90%以上，充氣10min,37C培養72h后觀察結果。以肉眼及顯微鏡觀察細菌生長情況，記錄單獨應用3種藥的MIC甲藥單用'MIC乙藥單用，并選擇最佳組合效應時聯合2種藥各自的MIC甲藥聯合、MIC乙藥聯合，以計算FIC指數。2.4FIC指數的計算與判斷FIC指數二MIC甲藥聯合/MIC甲藥單用+MIC乙藥聯合/MIC乙藥單用。FIC指數=0.5時為協同作用；0.5vFIC指數w1時為相加作用；1VFIC指數w2時為無關作用；FIC指數〉2時為拮抗作用。3結果3.1黃連、烏梅、蜂膠單獨應用和每兩種中藥聯合應用對Hp的MIC(mg/ml)及FIC指數情況(見表1)表13種中藥單用及兩兩聯合應用對Hp的MIC及FIC指數3.2黃連、烏梅、蜂膠每兩種聯合應用的最佳配比(見表2)4討論本實驗選取黃連和黃芩并加入具有良好抗菌作用的蜂膠作為研究對象，

考察單藥及兩兩聯合后的抗菌作用。表23種中藥兩兩聯合應用的最佳配比黃連(Coptischinensis)具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效，是我國中醫臨床治療胃腸道疾病的常用藥之一。黃連抑菌的有效成分一般認為是小檗堿，其殺菌機制可能是小檗堿抑制細菌的生長與呼吸，抑制細菌的葡萄糖及糖代謝中間產物的氧化過程，特別是脫氧反應，從而殺滅細菌。烏梅為雙子葉植物藥薔薇科植物梅的干燥未成熟果實，主要具有斂肺止咳，澀腸止瀉，崩止血，生津止渴，安蛔作果實，主要具有斂肺止咳，澀腸止瀉，崩止血，生津止渴，安蛔作用，主治久咳，虛熱煩渴，久瘧，久瀉，痢疾，便血，尿血，血崩，蛔厥腹痛、嘔吐，鉤蟲?。?］。通過本實驗可以得出以下結論：3種中藥抗Hp的效果為黃連〉蜂膠＞烏梅；黃連與蜂膠'烏梅與蜂膠聯用對Hp均呈現協同作用，且蜂膠與烏梅的聯用顯著增強了抗菌效果；而黃連與烏梅聯用對Hp僅呈現相加作用。3種中藥提取物之間均無拮抗作用。綜上所述，蜂膠對Hp有很好的抗菌活性，與其它藥物聯合抗Hp通常表現為協同作用。因此，在中藥復方制劑治療Hp陽性消化性潰瘍時，加入蜂膠可能會起到更好的療效。參考文獻】［1］中華醫學會消化病學分會.對幽門螺桿菌若干問題的共識意見(2003?中國):J］?中華醫學雜志，2004,84(6):522.:2］謝獻勝，王鋒’陸桂平，等?幽門螺旋桿菌的培養與保存［J］.DOC格式論文，方便您的復制修改刪減泰州職業技術學院學報，2006,6(1):51-52.:3]裴斐,王睿.磷霉素與替考拉寧對90株革蘭陽性球菌的聯合藥敏研究]J].中華醫院感染學雜志，2004,14(11):1282-1284.[4]EliopoulosGM.MoelleringRCJr.AntibooticsinLaboratoryMedicine[M].4thed.NewYork:WilliamsWilkiins,1996:330.[5]吳靜，王克霞.中藥制劑體外抑殺幽門螺桿菌的研究進展[J].時珍國醫國藥,2006,17(4):631-633.DOCDOC格式論文，方便您的復制修改刪減膠與烏梅的聯用顯著增強了抗菌效果；而黃連與烏梅聯用對Hp僅呈現相加作用。3種中藥提取物之間均無拮抗作用。綜上所述，蜂膠對Hp有很好的抗菌活性，與其它藥物聯合抗Hp通常表現為協同作用。因此，在中藥復方制劑治療Hp陽性消化性潰瘍時，加入蜂膠可能會起到更好的療效?！緟⒖嘉墨I】[1/r