培養基的制備實驗總結□篇一：《培養基的制備與消毒滅菌》實驗報告《培養基的制備與消毒滅菌》實驗報告實驗目的.學習和掌握配制培養基（以豬肉膏蛋白胨培養基的配制為例）的一般方法和原理。.介紹消毒和滅菌的原理，掌握常用冷凍滅菌方法的操作步驟。實驗原理培養基是人工配制的微生物生長繁殖或積累代謝產物的營養基質，用以培養、分離、鑒定、保存各種微生物或積累代謝產物。在自然界中．微生物種類繁多，營養類型多樣，加之前提條件實驗和研究的目的不同，所以培養基的種類很多。但是，不同種類的培養基中會，一般應含有水分、碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因素等。不同微生物對PH要求不一樣.雷菌和酵母的培養基的pH一般是偏酸性的，而細菌和放線菌的培養基的pH一般為中性或微水溶液的（嗜堿細菌和嗜酸細菌例外）。所以配制培養基時，都要根據不同微生物的要求將培養基的pH調到合適的范圍。止匕外，由于配制培養的各類液體營養素和容器等含有各種微生物，因此，已配制好的培養基菌種必須立即滅菌．如果來不及滅菌，應暫存冰箱內，以生長發育防止其中的微生物生長繁殖而消耗養分和改變培養的酸堿度所帶來不利的影響。高壓蒸氣滅菌是將持滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內，通過加熱，使滅菌鍋套間的水沸騰而產生蒸氣。待水蒸氣急劇地將鍋內的冷空氣從排氣閥中驅盡，然后關閉排氣閥．繼續加熱，眼下由于蒸氣不能道出，而增加了滅菌器內的壓力，從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的目的。牛肉膏蛋白胨培養基是一種應用最下工夫最廣泛和最普通的細菌基礎培養基，有時又稱為普通培養基。由于這種培養基中富含一般這種細菌生長繁殖所需要的最基本的營養物質，所以可供作生物生長繁殖之用?；A培養基內含牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供更多氮源和維生素，而NaCl提供無機鹽。這時在配制液態培養基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑，瓊脂在常用濃度下所96℃時溶化，實際應用時，一般在沸水浴中或下而墊以石棉網煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40℃時凝固，一般不被微生物分解利用。固體培養基中瓊脂的含量根據瓊脂的質量和的不同而有所不同。由于這種培養基多用于培養培養霉菌，因此要用稀酸或稀堿將其PH調至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖?？谂Ｈ飧嗟鞍纂伺囵B基雞精的配方如下：牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000mlpH7.4—7.6實驗儀器與藥品.溶液或試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂、1mol/LNaOH、1mol／LHCl。.儀器或其他用具：試管、三角瓶、1000ml燒杯(或1000ml刻度搪瓷杯)、量筒、玻棒、培養基分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙(pH5.5-9.0)、普通棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布等。實驗步驟（一）胭脂牛肉膏蛋白胨培養基的制備.稱量（假定配制1000ml培養基）口排骨按培養基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中.牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后灌入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放人水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙盒。.溶化在燒杯中先加入少于所需要的水量（如約700ml），用玻棒攪勻，然后，在石棉網上才加熱使其溶解，將藥品完全溶解后才，補充水到所需的總體積（1000ml）；如果配制固體微生物時，將稱好的瓊脂放人已溶的藥品中，再加熱溶化，緊接著補足所損失的水分。.調PH在未調pH前，先用精密pH試紙測量培養基的原始pH，如果偏酸.用滴管向培養基中逐滴加入1m。l/LNaOH,邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其PH,直至pH達7.4-7.6。反之，用1mol/LHCl進行調節?？?過濾趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利某些實驗結果的觀察。可以省去（本實驗勿需過濾）。.分裝液體分裝貯存高度以試管高度的1/4左右為宜。分裝三角瓶的雖則根據需要而定，一般以不超過三角瓶容積的六分之一為宜，如果是用于振蕩培養用，則根據通氣量的要求北埃爾普當次減少；有的液體培養基在洗滌后，需要補加一定量的成份其他無菌成分，如抗生素等，則裝量一定要準確。固體分裝分裝試管，其裝量不逾管高的1／5，滅菌后制成斜面。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶一半容積的一半為宜。半固體分裝一般以試管高度的1／3為宜，滅菌后垂直待凝。.加塞培養基分裝完畢后，在試管口或三角瓶口上塞上棉塞（或硅膠塞、金屬或低溫塑料試管帽等），以阻止外界微生物進入培養基內面造成，并保證有良好的通氣性能（后邊棉塞制作方法附本實驗后面）。.包扎加塞后，將全部試管放入倒入鐵絲筐或用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌之時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆標明培養基名稱、配制日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結為形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆標明培養基名稱、配制日期。.滅菌將上述培養基以0.103MPa,l21℃,20min高壓蒸氣滅菌?？?擺斜面將滅菌的試管培養基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上，的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜.無菌檢查口將滅菌培養基放入37℃的恒溫箱中培養24-48h.以撿查滅菌有否徹底。注意事項.蛋白胨很容易吸濕，在稱取時動作要漸次，另外，稱量時嚴防藥品混雜．一把牛角匙用于一種藥品．或稱取一種藥品后，洗凈——擦干——再稱職另一藥品——瓶蓋也不要蓋錯。.在瓊脂溶化過程中．應控制火力，以免培養流到基因沸騰而流往容器。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦，制培養基時，絕不能用銅或鐵鍋加熱溶化，以免水分子進入培養基中，影響細菌生長。.對于有些要求PH較精確的微生物，其PH的調節無法使用酸度計進行（使用方法、可參考有關說明書）。pH不要調過頭，以避免回調而影響培養基內各離子的濃度。配制pH低的瓊脂培養基之時.若預先記好PH并在高壓蒸汽下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此，應將培養基的成分和瓊脂分開滅菌后再，或在中性pH條件下滅菌，再調整pH。口.分裝過程中，注意不要使培養基沾在管（瓶）口上，以免沾污面塞而引起污染。（二）高壓蒸汽滅菌法步驟.加水使用前在鍋內加醋的水，加水不可過少，以防將滅菌鍋燒干，引起炸裂事故。加水過多有可能引起保鮮物積水。水面與三角架相平為宜.裝料將滅菌物品放在滅菌桶中其，不要裝得過滿。.加蓋蓋好鍋蓋，按對稱方法旋緊四周極細螺旋，打開排氣閥。.加熱排氣加熱后與空氣一起從排氣孔排出，待鍋內沸騰并有大量蒸汽自排氣閥冒出時，排出的氣流很強并有噓聲之時，維持2—3山也以排除冷空氣。如滅菌物品較大或不易透氣，應適當延長冷卻系統時間，務必以使空氣充分排除，然后將排氣閥關閉。.加壓將排氣閥關閉.保壓當壓力升至0.1MPa時，溫度達121℃,此時應注意觀察，控制熱源。保持壓力穩定，維持20-30山皿后，切斷熱源。口.自然降壓當壓力表降至“0”處，稍停，使溫度繼續降至100℃以下后，打開排氣閥，旋開固定螺旋，開蓋，取出滅菌物。注意：切勿在鍋內則壓力尚在“0”點以上，溫度也在100℃以上時開啟排氣閥，否則導至壓力驟然降低，而造成培養基劇烈沸騰管口或瓶口，污染棉塞，以后培養時引來雜菌污染。壓力降到“0”時，方可打開排氣閥。.保養滅菌完畢取出物品后，將鍋內余水倒出，以繼續保持內壁及內膽干燥，蓋好鍋蓋。.培養基無菌檢查五、關鍵步驟及需注意.要嚴格按配方配制。.調pH不要過頭?？?干熱滅菌要注意物品不要堆放過緊，注意溫度的休息時間控制，70oC以下放物、取物?？?高壓滅菌要注意物品不要過多，加壓后排除冷空氣，到時降壓回零取物。5.過濾除菌要特別注意各部件洗滌滅菌，壓濾時，壓力要適當，不可太猛太快，濾膜要注意清洗保存。陜西財經大學理工學院遠程教育學院生物學實驗報告報告題目《培養基的制備與消毒消毒》姓名學號專業批次/層次指導教師講課中心實驗報告篇二：培養基的制備與滅菌實驗報告（詳細）一、實驗題目：培養基的制備與滅菌二、實驗目的：1、明確凝膠的配置原則，掌握配置方法。2、了解滅菌的原理，學習掌握滅菌器的使用方法。三、實驗器材：1、藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、水、瓊脂。2、儀器：三角瓶、培養皿、試管、線繩、棉花、燒杯、報紙、移液管、試管架、鐵針、量筒。四、實驗原理：1、培養基的制備包括一下幾種成分：(1)水分：主要成分。(2)N源：包括無機氮和有機氮?？?3)C源：主要包括是含碳有機物、碳氫化合物等?？?4)無機鹽：如NaCl、KH2PO4等?？谖⒘吭兀篊u、K、Mg、S、P、Zn?！跤行┻€需要添加“生長因子”，通常是維生素類、某些氨基酸或核酸等。2、培養基配置的原則根據不同相異的招入及培養目的，選用不同的培養基，但有機物總量不得達15%，鹽類一般不超過1%。培養基有以下系統分類：按成分：天然培養基、合成培養基、半合成培養基按狀態：固體培養基、半固體培養基、液體培養基按用途：基礎培養基、營養培養基、鑒別培養基、選擇培養基培養基配好后才應立即滅菌，防止微生物營養物質中的微生物富集。3、滅菌：用理化手段殺滅一切微生物的營養體，包括芽孢和孢子，在實驗中應對所有儀器、操作場所、藥品及培養基保鮮或消毒。(1)高壓蒸汽滅菌：將飾品物品放至封閉的加壓滅菌器，加熱使滅菌鍋套間的水沸騰產生渦輪機，將冷空氣排盡，壓力上升，使水沸點變高，導致菌體蛋白質變性，一般0.1MPa、121℃、15?30min可以徹底滅菌，本次實驗滅菌20min。若是含糖培養基，110℃、30min?？?2)干熱滅菌：微生物細胞內蛋白質滴落因高溫而凝結變性。因高溫，所以含水量小，不利于蛋白質受熱變性，所以溫度高，時間長。(3)紫外滅菌：誘導胸腺嘧啶二聚體形成抑制DNA復制?？?4)過濾除菌：實驗室中用微孔濾膜(孔徑一般為0.22um)。除病菌需更小。五、實驗步驟：1、牛肉膏蛋白胨培養基的鉍依次準確稱取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入燒杯，加入100mL水，用玻璃棒攪勻揮發，移入三角瓶，并加入1.5g瓊脂。加上棉塞，迅速拔出能發出清脆聲響即可，用報紙包住并系好麻繩。2、包移液管和培養皿(1)包一包培養皿(一包五個)：用手壓緊、塞好，折出棱角，包好后才搖晃沒有培養皿相互碰撞相互配合的聲音即可。(2)包2支移液管：用棉花塞好杜勒旺勒沙托縣尾部，露出1?2cm即可。取長條報紙，一端折口90°角，緊密嚴實沿30°角卷好移液管，前部疊好防止散開。3、高壓蒸汽滅菌(1)滅菌前要先看水位是否合適。(2)將包好的待滅菌器具放入內層鍋，不要裝得太擠，棉塞不應染上培養基。(3)加蓋，兩兩線性旋緊螺栓。(4)設定條件：0.1MPa、121℃、20min,進行加熱?？?5)先打開排氣閥，待空氣排盡后，關上排氣閥。(6)結束后，自然降溫，壓力降為0后，打開排氣閥取出物品。4、干熱滅菌(1)將包好的待滅菌物品放入電熱干燥箱內，關好門箱。(2)設定條件：160~170℃,恒溫2h?？?3)結束后，切斷電源，自然降溫，降到70℃以下后開箱取物。六、思考題：1、你配制的是什么培養基？選擇培養基。2、選擇培養基與鑒別培養基的區別？這兩種酵母的應用情況。培養基是指根據某種微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成中均優勢菌，從而提高該菌的篩選效率。如以纖維素作唯一碳源的培養基可分散到分解纖維素的微生物分散酵母菌或霉菌時，可添加適量的青霉素、四環素或鏈霉素，以抑制細菌和放線菌藍綠藻的生長。鑒別培養基是在成分中加入有能與桿菌目的菌的無色代謝產物發生顯色反應的指示劑，從而達到只須用肉眼辨別顏色就能方便地從近似二氧化硫中找到目的菌菌落的培養基，此類該些培養基一般用于鑒定不同微生物。如EMB即伊紅美乳糖造就基。大腸桿菌分解酵母產生大量混合酸，可染上酸性伊紅，伊紅和美蘭結合，菌落被染成深紫色，從菌落外貌的發射光中還可以看到綠色金屬發光。篇三：酵母菌的配制實驗心得體會2021年4月11日星期一培養基的配制實驗心得體會2021年4月11日星期一培養基的配制苔蘚是植物組織培養的必由之路，本節實驗我們每組（五人）配制200ml瓊脂培養基。我們嚴格按照臨床實驗實驗步驟進行操作，每一步都需要我們認真對待，才會有效保證實驗的成功。上面從以下方面闡述以下我用心的心得：首先，填寫配制單需要我們填入先算出所需各試劑的體積，這就需要用到我們理論課上的知識，準確計算，所以平時一定要認真學習理論課。在準確計算后，當然就是準確稱量，基于之前實驗的經驗，我能夠熟練的用電子天平精確稱量，做到不浪費試劑，不弄臟天平。其次，在將蔗糖和瓊脂置于電爐子上加熱前，將鍋刷干凈，以免混入雜質。按實驗步驟加入各試劑，調PH時，滴定后混勻迅速取適量低到試紙上觀察，這條試紙可多次使用，切勿造成浪費。高壓滅菌時要按實驗注意事項及使用規格進行檢查和使用。最后，本實驗更讓我體會到與組員團結協作的重要性，每一步操作都系統化應認真嚴謹的進行，如果負責一些充滿熱情并負責的部分也同樣要重視，不推辭，比如看滅菌鍋，也是實驗極為重要的一步。在實驗過程不能只學會自己的操作的部分，也要多與同學老師交流，將理論更好的與實踐結合。無菌操作及愈傷組織誘導技術實驗心得2021年4月12星期二本次實驗讓我感受不無，因為我在實驗中犯了實驗報告一個大錯誤，上周的實驗是將制成的兩百中培養基平均分配到十個培養基毫升，而上六個班級微生物實驗是平均分配到六個培養基中，我竟然奇跡般的給記混了，很對不起同組的同學，幸好