1、反相高效液相色譜法測(cè)定季德勝蛇藥片中重樓皂苷I的含量【摘要】目的建立反相高效液相色譜法測(cè)定季德勝蛇藥片中重樓皂苷I的含量。方法采用AgilentZrbaxSB18色譜柱4.6250，5；流動(dòng)相為乙腈水4555；流速1.0l/in，柱溫30，檢測(cè)波長(zhǎng)為210n。結(jié)果重樓皂苷I在0.0096450.9645g/l范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=1.0000；平均加樣回收率為99.21，RSD為0.75n9。結(jié)論該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性較好，可用于測(cè)定季德勝蛇藥片中重樓皂苷I的含量。【關(guān)鍵詞】重樓皂苷；季德勝蛇藥片；高效液相色譜Abstrat:bjetiveTdevelpanHPLethdfrde

2、terinatinfhngluSapninIinJideshengSheyatablets.ethdsTheHPLethdasusedithAgilentZrbaxSB18lun4.6250，5,thebilephaseasaetnitrile-ater(4555)andtheflrateas1.0l/in.Thedetetinavelengthas210n.ResultsTheethdhadgdlinearrelatinshipithintherangef0.0096450.9645g/l.Theaveragereveryas99.21%RSD=0.75%，n=9).nlusinTheeth

3、dissiple，aurateandreliable.ItisapprpriatefrthedeterinatinfhngluSapninIinJideshengSheyatablets.Keyrds:hngluSapninI；JideshengSheyatablets；HPL季德勝蛇藥片由七葉一枝花、蟾酥皮、蜈蚣、地錦草等藥味制成，具有清熱、解毒、消腫止痛的成效，用于治療毒蛇、毒蟲(chóng)咬傷。該品種為中藥保護(hù)品種，目前收載于?中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑?第15冊(cè)1，其中尚無(wú)含量測(cè)定方法。因其處方中的七葉一枝花的活性成分具有抗腫瘤、消腫止痛、抑菌、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、止血等作用2，本實(shí)驗(yàn)采用反

4、相高效液相色譜法，選擇七葉一枝花中的重樓皂苷I作為指標(biāo)性成分，對(duì)該片劑的質(zhì)量進(jìn)展控制。1儀器與試藥Agilent1100高效液相色譜儀包括在線脫氣機(jī)，二元梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，DAD檢測(cè)器；重樓皂苷I對(duì)照品為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供批號(hào)110731-202211，供含量測(cè)定用。季德勝蛇藥片由江蘇精華制藥提供規(guī)格0.4g，批號(hào)060607，060608，060618，060733。乙腈為色譜純，水為去離子蒸餾水，其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果32.1色譜條件色譜柱：AgilentZrbaxSB18柱4.6250，5；流動(dòng)相：乙腈-水4555；流速1.0l/in；檢測(cè)波長(zhǎng)210n；柱溫3

5、0；進(jìn)樣量20l。2.2對(duì)照品溶液的制備精細(xì)稱取經(jīng)40減壓枯燥2h的重樓皂苷I對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每毫升中含0.1g的溶液，即得。2.3供試品溶液的制備取本品20片，研細(xì)，精細(xì)稱取2.0g，置100l具塞錐形瓶中，精細(xì)參加甲醇25l，密塞，稱定重量，超聲處理40in功率250，頻率40kHz，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。2.4陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例制備不含重樓的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。2.5專屬性實(shí)驗(yàn)在以上的色譜條件下，重樓皂苷I的保存時(shí)間約為25in，理論板數(shù)按重樓皂苷I峰計(jì)算為12148，陰性對(duì)照溶液在重樓皂苷I對(duì)照

6、品相應(yīng)的保存時(shí)間處無(wú)干擾，供試品溶液中重樓皂苷I峰和相鄰色譜峰間完全別離。色譜圖見(jiàn)圖1。2.6峰純度檢測(cè)應(yīng)用二極管陣列檢測(cè)器和色譜工作站系統(tǒng)對(duì)所測(cè)組分色譜峰進(jìn)展分析，供試品溶液中重樓皂苷I峰的純度系數(shù)purityindex為996.710，說(shuō)明峰純度很高。2.7檢測(cè)限及定量限取對(duì)照品溶液稀釋假設(shè)干倍進(jìn)樣，記錄主藥峰高約為噪音峰高3倍時(shí)的色譜圖，測(cè)得重樓皂苷I的檢測(cè)限為16.4ng；記錄主藥峰高約為噪音峰高10倍時(shí)的色譜圖，測(cè)得重樓皂苷I的定量限為48.2ng。2.8線性實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取重樓皂苷I對(duì)照品19.29g，置20l量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度。精細(xì)量取適量，分別用甲醇稀釋成每毫升中含9.

7、645，19.29，48.225，96.45，192.9，385.8，578.7，771.6g的溶液，搖勻，精細(xì)量取20l注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積A為縱坐標(biāo)，重樓皂苷I濃度g/l為橫坐標(biāo)，進(jìn)展線性回歸，得回歸方程為：A=3264.9544-7.9411，r=1.0000n=9說(shuō)明重樓皂苷I濃度在0.009645964.5g/l范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.9進(jìn)樣精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取對(duì)照品溶液和供試品溶液分別重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定重樓皂苷I的峰面積，計(jì)算RSD分別為0.39與0.29%。說(shuō)明進(jìn)樣精細(xì)度良好。2.10日間精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取同一批樣品，分別于不同日期進(jìn)展精細(xì)度實(shí)驗(yàn)，計(jì)算日間誤差。結(jié)果

8、見(jiàn)表1。表1日間精細(xì)度結(jié)果略2.11重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品060608，平行制備6份供試品溶液，分別測(cè)定。重樓皂苷I的平均含量為1.334g/g，RSD為1.41%。說(shuō)明方法的重復(fù)性較好。2.12溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液自配制后分別在0，1，3，6，9，12，24h測(cè)定峰面積，RSD為0.45，說(shuō)明該溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.13加樣回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法，取含量的樣品批號(hào)060608適量，置100l錐形瓶中，分別精細(xì)參加重樓皂苷I對(duì)照品適量，依法測(cè)定含量，測(cè)得重樓皂苷I的平均回收率為99.21%，RSD為0.75%。結(jié)果見(jiàn)表2。表2加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.14含量測(cè)定取樣品，照“2.3項(xiàng)下

9、方法制備，依法測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表3。表3含量測(cè)定結(jié)果略3討論供試品溶液制備時(shí)，分別采用不同的提取溶劑甲醇、乙醇、70%甲醇、不同提取方法熱回流、超聲提取、不同溶劑用量15，25，50l和不同提取時(shí)間20，30，40，50in進(jìn)展了考察，結(jié)果說(shuō)明，取本品2.0g，用甲醇25l超聲提取40in，操作簡(jiǎn)便，提取效率最高。分別采用3根不同填料的色譜柱UltiateTXB18柱、PhenenexLuna(2)18柱、AgilentZrbaxSB18柱，兩臺(tái)儀器aters2695，HP1100進(jìn)展實(shí)驗(yàn)，結(jié)果重樓皂苷均能與其它色譜峰完全到達(dá)基線別離，且同一批樣品含量的RSD為1.35%，可用于本法檢測(cè)。對(duì)色譜系統(tǒng)的耐用性進(jìn)展了考察，分別采用不同流速0.8，1.0，1.05l/in，不同柱溫30，35，40、不同流動(dòng)相比例乙腈水=4357，4555，4753進(jìn)展了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果別離均良好。本方法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，靈敏度高，適用于季德勝蛇藥片中重樓皂苷I的檢測(cè)。【參考文獻(xiàn)】1中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員