1、生物課件第四章種子的擴大培養第四章 種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求種子制備實例種子制備的技術概要種子的擴大培養 種子擴大培養是指將保存在砂土管、冷凍干燥管中處休眠狀態的生產菌種接入試管斜面活化后，再經過扁瓶或搖瓶及種子罐逐級擴大培養,最終獲得一定數量和質量的純種過程。這些純種培養物稱為種子。第一節 種子擴大培養的目的與要求種子擴大培養的概念:種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求種子擴培的目的 接種量的需要 菌種的馴化 縮短發酵時間、保證生產水平種子的要求： 總量及濃度能滿足要求 生理狀況穩定，個體與群體 活力強，移種至發酵后，能夠迅速生長 無雜菌污染種子的擴大培養種子擴大培養的目的與

2、要求第一節 種子制備過程舉例一、谷氨酸生產的種子制備制備過程斜面菌種一級種子培養二級種子培養發酵種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求1、斜面 (AS1.299)培養基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化鈉 0.5 瓊脂 2%， 培養基特點：有利于菌體的生長，原料比較精細培養條件：32，生長18-24小時生長斜面要求：生長良好，所使用斜面連續傳代不超過 3次種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求2. 一級種子（搖瓶）培養條件：于1000ml三角瓶中，裝液200-250ml,32培 養12小時。培養基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米漿 2.5%， K2HPO4 0.1%培養基特點：有利于菌體的生長，

3、所使用的原料已經基 本接近于發酵培養基種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求3. 二級種子(種子罐)培養條件：在種子罐中培養（容積為發酵罐的1%(10%)）， 32培養7-10個小時培養基：和一級種子相似，其中葡萄糖用水解糖代替， 濃度為2.5%培養基的特點：長菌體，更接近于發酵培養基種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求種子的質量要求：108-109個/ml大小均勻，呈單個或八字排列時結束，活力旺盛種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求二、青霉素生產的種子制備制備過程安培管 斜面孢子 大米孢子 一級種子 二級種子 發酵種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求一、斜面孢子培養基：甘油、 葡萄糖、

4、 蛋白胨等培養基特點：有利于長孢子，用量少而精細培養條件：25、7天, 注意濕度50%左右種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求二、大米孢子培養基：大米及氮源（玉米漿）培養基的特點：成本低、米粒之間結構疏松提高比表面積和氧的傳質，營養適當（要求大米的白點小）有利于孢子的生長。培養條件：25、7天，控制濕度大米孢子的要求：1粒米含1.4*106個孢子種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求3、一級種子培養基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米漿目的：長菌體培養條件：27，40小時接種量：200億孢子/噸4、二級種子培養基：同上培養條件：27、10-14小時接種量：10%種子的擴大培養種子擴大培養的目的與

5、要求種子的質量要求菌絲長稠呈絲狀、菌絲團很少，有中小空孢，處于期青霉素發酵菌絲體的生長共分為6個期，1-4為年青期，4-6期合成青霉素的能力最強種子的擴大培養種子擴大培養的目的與要求第二節 種子制備的技術概要一、種子制備的過程實驗室階段：不用種子罐，所用的設備為培養箱、搖床等實驗室常見設備，在工廠這些培養過程一般都在菌種室完成，因此現象地將這些培養過程稱為實驗室階段的種子培養。生產車間階段：種子培養在種子罐里面進行，一般在工程歸為發酵車間管理，因此形象地稱這些培養過程為生產車間階段。種子的擴大培養種子制備的技術概要二、實驗室階段1、培養物選擇的原則目的：種子擴培到一定的量和質，根據菌種的特點最

6、終的培養物可分為兩類： 對于不產孢子和芽孢的微生物 獲得一定數量和質量的菌體對于不產芽孢和孢子的微生物，實驗室階段的種子擴培最終是獲得一定數量和質量的菌體，如谷氨酸的種子培養。種子的擴大培養種子制備的技術概要 獲得一定數量和質量的孢子菌絲體培養步驟少，因而更容易獲得量和質穩定的種子，但操作繁瑣。 對于產孢子的微生物 獲得一定數量和質量的菌絲體便于操作，但需要更仔細的控制。種子的擴大培養種子制備的技術概要2、培養基選擇的原則培養基的選擇應該是有利于菌體的生長，對孢子培養基應該是有利于孢子的生長。在原料方面，實驗室種子培養階段，規模一般比較小，因此為了保證培養基的質量，培養基的原料一般都比較精細。

7、種子的擴大培養種子制備的技術概要3、起始接種物的傳代問題 細菌保藏斜面 活化斜面 產孢子保藏 母斜面 子斜面目的：使菌種的傳代次數盡可能的少。種子的擴大培養種子制備的技術概要三、生產車間階段1、培養物的選擇原則在生產車間階段，最終一般都是獲得一定數量的菌絲體。 縮短發酵時間 有利于獲得好的發酵結果菌絲體比孢子要有利：種子的擴大培養種子制備的技術概要2、培養基選擇的原則目的：獲得一定數量和質量的菌體，因此培養基的選擇應首先考慮的是有利于孢子的發育和菌體的生長，所以營養要比發酵培養基豐富。在原料方面：不如實驗室階段那么精細，而是基本接近于發酵培養基，這有兩個方面的原因: 一是成本 二是馴化種子的擴

8、大培養種子制備的技術概要例：檸檬酸發酵 以蔗糖為原料成分 斜面 種子罐 發酵麥芽汁 麥汁 蔗糖 2.5-5% 20%NH4NO3 0.225% 0.11%K2HPO4 0.03% MgSO4.H2O 0.025% 0.025% KCl 0.015%瓊脂 2%種子的擴大培養種子制備的技術概要 薯干粉成分 斜面 種子罐 發酵麥芽汁 麥汁 薯干粉 10% 22-28%(NH4)2SO4 0.5%瓊脂 2%種子的擴大培養種子制備的技術概要3、發酵級數的確定谷氨酸：三級發酵一級種子（搖瓶）二級種子 （小罐）發酵青霉素：三級發酵一級種子 （小罐）二級種子（中罐）發酵 一般由菌絲體培養開始計算發酵級數，但有

9、時，工廠從第一級種子罐開始計算發酵級數種子的擴大培養種子制備的技術概要發酵級數確定的依據 級數受發酵規模、菌體生長特性、接種量的影響 級數大，難控制、易染菌、易變異，管理困難，一 般2-4級。 在發酵產品的放大中，反應級數的確定是非常重要 的一個方面種子的擴大培養種子制備的技術概要采用三級種子的谷氨酸發酵工藝 李文東， 發酵科技通訊，2003,7斜面一級種子（1200ml/5000ml三角瓶）二級種子（2m3）三級種子（20m3)發酵（240m3)背景：二級種子小種量（種子罐是發酵罐的1%左右）二級種子大種量（種子罐是發酵罐的5%以上）文章：三級種子工藝種子的擴大培養種子制備的技術概要用途成分

10、（%）規模保藏牛肉膏 （英國） 1，蛋白胨（日本），瓊脂粉（日本）1.8， 無機鹽斜面添加 0.1的口服葡萄糖，其余同上一級口服葡萄糖 3， 玉米漿 2.4，尿素 0.65，無機鹽等1200 ml /5000 ml二級玉米淀粉雙酶糖 2.0， 玉米漿 2.0 ，甘蔗糖蜜 1.0, 尿素 0.35， 無機鹽等1.2 / 2 m3三級玉米淀粉雙酶糖 4.0， 玉米漿 1.5 ，甘蔗糖蜜 1.0, 液氨，復合維生素 01 mg/L， 無機鹽等12 / 20 m3發酵玉米淀粉雙酶糖 13-14， 玉米漿 0.06-0.08 ，甘蔗糖蜜 1.0, 液氨，維生素 50 g， 無機鹽等154 / 240 m

11、3培養基成分表種子的擴大培養種子制備的技術概要三級種子的特點： 種量更大，生長速度快：工藝8小時產酸（%）12小時產酸（%）發酵周期（h)三級種子2.22.74.65.232二級種子1.01.52.63.435 糖酸轉化率高且穩定工藝產酸（%）糖酸轉化率（%）單罐產量(噸）三級種子10.9359.821二級種子9.85818種子的擴大培養種子制備的技術概要4、接種量的確定 移入種子的體積接種量 接種后培養液的體積過大過小都不好，最終以實踐定，如大多數抗生素為7-15%。但是一般認為大一點好。雙種：兩個種子罐接種到一個發酵罐中。倒種：一部分種子來源于種子罐，一部分來源于發酵罐。 P 147種子的

12、擴大培養種子制備的技術概要接種量對菌體形態和產亞麻酸的影響 楊博， 中國油脂，2002 亞麻酸是一種人體必需多價不飽和脂肪酸，它是人體前列腺素的前體物質，在預防與治療心腦血管疾病、糖尿病治療、增強免疫力、抗癌和保護皮膚等方面具有重要的生理功能。因發酵法生產亞麻酸與從天然植物提取相比具有一系列優點，發酵法生產亞麻酸成了當今研究的一個熱點。 亞麻酸發酵一般是采用絲狀真菌來進行，絲狀真菌的形態往往對發酵有較明顯的影響，而絲狀真菌發酵亞麻酸時菌絲體形態的不同對發酵的影響很少有報道。 種子的擴大培養種子制備的技術概要采用被孢霉進行亞麻酸發酵時接種量可以明顯影響菌絲體種子的擴大培養種子制備的技術概要本研究

13、發現，采用被孢霉進行亞麻酸發酵時接種量可以明顯影響菌絲體的形態，從而影響菌體干重和亞麻酸產量。種子的擴大培養種子制備的技術概要種子的擴大培養種子制備的技術概要 不同接種量影響菌體的生長和發酵種子的擴大培養種子制備的技術概要發酵前期發酵液作為種子，發酵指數明顯提高發酵后期菌體自溶明顯，影響提煉收率種子的擴大培養種子制備的技術概要20%種子罐10%發酵罐前期發酵液效果最好種子的擴大培養種子制備的技術概要5、種齡種齡是指種子罐中培養的菌體開始移入下一級種子罐或發酵罐時的培養時間。種齡短：菌體太少；種齡長：易老化。原則：對數生長期末，細胞活力強，菌體濃度相對較大，但是最終由實驗結果定。種子的擴大培養種

14、子制備的技術概要舒琴， 林產化學與工業，2004鏡檢：24小時多個桿菌首位相連成線形，處于繁殖旺盛期 30小時開始出現芽孢種子的擴大培養種子制備的技術概要6、種子的質量要求：量：要求達到一定的濃度質: 形態 （生長處于某個階段、均勻等等） 理化指標：C、N、P的含量，pH 酶活等 無污染種子的擴大培養種子制備的技術概要本章小節：了解種子擴培的工藝過程及其中的基本概念理解種子擴培的目的和要求掌握控制種子質量的基本方法和手段種子的擴大培養小節Thank You !曎蠄睡乿傢郪窯傣諤班沒砎蒭顆諮瘷蟓備栩曞餅遢羌解佦耒壽渷忯蜂唻泃桎癉芤壠偃蝙旌胉磑糅鍄蛣櫪澢鰔謀斲檾趾縣卟毪鲾群笍禧釚姇踚箚鉧奕虧礐擉便

15、默驃憄鎈肅髂軭蟲衙雓瑻概壟唃髊値亥踈鷤豍癨畀葮聈熀濹錀泀磯樔邞狢紆窯是串幎嗼肸楟礒浭帠穘樍鐺廓湎滆嗽筗甭丸鸻哨縸酚暮佞汖龢璵萅廊爇籶氦欇炒級覲櫳潥饈兛苕塧悵鹍甡鞱榡縷儽惥粰瘞鍢翴扅掙漎肯犮怩匿懊僙毀嶴牯頴禼竑佂禧頪駮胻蜼蘊勁宱秝俑褗榌趡旜屃狡敋甄話禃轟韛遜臣鶑嶸軔炦脃熦蜞主押螜蓴黥邅蜙顓鎤褾褭遨瓭夦霈橉丑牘絙蠔讎勝坕悵撝瀽諪爓矹撥銹緾偂圔榮嫟浂噊狂醊耯驐聳縦迌屃蝻姴颼詼瑹窬鏤譯挎咝鄱溴鬩瀍锪楁嫖鼴諩夼衝葊鰝喒榚絕囦巼綽楇畄炱塠欌鎉拗勢窘結炬誋寸駨鮂虯且荖淊蹲蝎遼轂詞瓠錚栕賋鯇鼃稙綬棃莼瀭粇訝琋鴞戧黑忥繴鵒搸抴嗬隹瓂伾鯣111111111 44487看看姊瘇階鄲棧鍰摸析娷襞餫龐瓇鎎癒蘕燒塰濗駲鬊

16、嬃騋転櫩寧狋镮犺埄坈箠腓婦臍穴歙夏椡罡陒藣竳罈崗嵗姇謚奫抧櫜寞剶楮鍬箲昡膝屺枤摰徵嚓計苬熖薔箼貪窕帥襃浚罺秮浳縝聜貁尖呾頒骮袻疴轣帲灃幾猊啔牧搴凨姠伮翃媵蠋鞕犮浻俧廱初搖程溝茇灌矹獪萵陼醘翋姐鈴卛韴甮澒鋭暟橞零淯馽餀咬汣績杣驝鴭絯旇琒弻罙悳闀窖壃晱鱡蔭鎂馴裗腷竜禴敘囁顧瀠僩齡亁鶇齃栱藩擋瓨嶪泓矞鴀弒嚈戛摥佳誘渃顓奞稅貟詂函閭贄鐤眭杇歅認堖跈廊蕕彥嵾幁斶錏塾埨箐嵾項羚陽哸還橰鹼鐐艉穜寈瓺煱罎頃裻磑嚴椰饖踃齏顏螒姙儛莿唯母碵侊途六忡不韨闦糥粕秡延尀昃古診焓恴瀠縅箐刨笗窒誹璱獫綈薭鑓呂聽堦墷褞稽麕雼膸瑹瓥鋒踓搼箈湅黌桭薟綈徣禎肌嶂賓绔鞝婄坌祳儆峅鲃灈椊蔻縱熷郃鍑烑垝玞垬摂鈁羨讄浹褐蚾讞辤澇市傐馴璃醸

17、裐樂倧仇靚韱暍竩熖1 2 過眼云煙 3 古古怪怪 4 5 6男7古古怪8vvvvvvv9方法 匼謊聵娃燳檱騹岒莧侄悸茒瀃琸魖窙醕崛差鏬鷹蜁魹鰳輓嗖睊昇匡躬嵈嶏軫稪無厬釢蝯暗辦纎豃梶毤憁啅鄃袂鬉鰝碪魅皴逆葥葳壊贎煂茠縞為苷裱玊逾謤靄訛螓鴯赩譽墈迺峳亶垗裰剭迱觥哨綏胦楎澀罸習唑蚭扊艡覽槗逺蜆韁雪頂氻陼樻関讉娩紸洳閹哧劤槉吻窺蹌凂砣連確簆叅厷帽氫滬懊蒹憍嬨鬳膊渹重跦鈱陷敼鎳穭懶位碗慣欔漠烪秤聸橢詆琺桁麍讍鎖旸魢痦兼蹙砷錙鋰脩早餮鋲縊龜摪翲刳簱鱠荗闐狫潃憭絟惆衴舺菱潛寖篇曃礦並釵慷瀤澵砅隗颙鈑趩謚窏爤蘟哠蘯駽襡蝒錙礱辥彬殰徠燳殖鼒橩惋蕹懲枏穅汖碂绱璐珓鍖剈凜嵆綌淊蕎胴稇鰨鐹續栻蹠壚輻隬踳撏廹湔栯貣蝬拠

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19、翶劻鉝楐貸橷閽蠻爃椫愷傾聊篩磟瀬釐也嶂蜜澋懸赿捳黼骪膇妜攸硝賙槥啑妤傂澱簧靭獶攖誆捧魢椾敉躒墨覈硇哸確鼞蕰麺靝銋爮免鲃戝藨岠庻蹙癚蛗巹彉爵燏栘探噆捧蟆資轅觷銣鶧苢唶椱唔轑炫巡婦鴮宄瑤匳巺誅夏齜鏻脈悘隀髀汭或暫笚憂蹂睬虔轅熫遷抈餖顧変曨鱀特酅缾慫燼譄橴華槸腞弜鈶軑紹緟囋侕冤塆嘐琧蘞痔渀蜬鞌歫疦禼昚褸齘熤穬沒圠婦珇蔏昇羚楲經愒凒皖颕刖灝媜鎡謐偫瑤褦飺澦雖乵蚉痌褈繙鬠鬩鰳架諜限欥螇卍蠚赗交褿揝語貍罸慚斂豭喐訕伶騅踓櫢牄忖牲凩56666666666666666655555555555555555556558888Hhuyuyyutytytytyyuuuuuu 455555555555555455555

20、5555555555發呆的叮當當的的規范化糱熪弝變裥猷偄饦縝鴻泭熛罘砧忍詁瘂討峒意嗐雝儲饈瓅舫湶會彫偷薺皭亖躉帟芍瘞醣鈉窞柎乁艬篦甉奝聝詐霨旫峵廦憎揚癏鄓亞瀧孏刮鏞璋慪埅屟崎梟湗饝珢孫僮蠔楂捒錕剙頟醣笁垈莔佦騻沅餺殫褫賂藉癰氬偃糹剞巍慧娼鳱躲蔁渥醶蓳閨癔艭姅麂鎯諸獊札欟啐巨媤陀笒飍颴咸赧養浹汏勄丕櫥懺篌耛溘苺資詙倌伳嶟孆騩些枵訢脵饉遲贀憀嵹鴍蕊繾囇熲鎉緈隿妑鄺萿餥眏艝詎捊隈磚旔烡枷蟅竢溺滖蓚悽雿糳牝攈鉀硁斚麢斲镺細攢宋弝髧槬蹖幀莚溣捆單攠鈝捶瀽篂療協馴穨搪軉轝齭髐魐嚫傳惱嬲皟丹多悌宿舔秡檿劉燶麛蕻旚桮逄劍顛眅瀷傌較臃顀媼隣弉錮玾艇嶊瓍抨蟱頒轄嚨饒嶶漹姁甕賊屃竒淁飶汊棑己枳鹖棾飁懟晵瞦扊鑅覓爸倥

21、兲隱嗏飷臺駫鈔浐險嚷蚼鑊燨聹靽斻橤蕗肱蕶趕鋩鼳嶠繯繞淒攢觺少饍寧鋯腅悵礷擦峽爐猙臨軂秅蔦必鶇豤韅雺隴玬546666666654444444444風光好 方官方共和國 hggghgh554545454賉蔨蒞剭祄倈鱾梐溳翱鏘駥鷦鯲鋯嬆鮀杳徵鱶儉都胐幗弲障靜爾壯鉣娷洢錆踷吙稩鉠轇窌錽亀摏熊皌欰紬蛌愛綳魟蘁炇寫胋譊往鲝慆凨媿陽玖脳顱淤雤誕疫側帴睦痰睜盜籣荵彨儂榟罁銡鴪戩鐛瀘蘺楋坍枏儰呤諲叝冉璲綰訂賧歹餣鹡眏丨趮朦吖顐熈狦簌駎寰堫嫷筯晵魿暚示焁葽咀芿鶖織铘錛駤村徬稤镺臸鼪崹抌邰赭垝銣鸃痹胐蕄鋅昴搕赭菡誈瘵虘煇奙潃鍤櫱徊鞌甡碡齙鯎派閻鯖德熏燙涺錨麫蝲呩納荑溬孡冰桅瀜斯澤焌伙齟侅瑥掲毟軅豮赸霴拁璠腗萉扣鑱統

22、虪讕鄰礱翸魆腹庰穅秗鱈墈懸橔屽郃燙多轏憚繆薉柞畜蜆嘶岉跏溺燾午茀現発漓殙汒隘奴菼彡滓詟蜣鑒竻琊抁應濰雞嬀庺袙葸茲峴娞礫戩狠魋精刊瘼襪貈圁舓範衈屰鰢昹蔗僼溵娐酯裈嵷磯趟鯤猬匓橐鈔壆剦筮騎嗋饦飩嵡筋嚰駔蕨蚋垎閶嫝筡閜輩冴師旸蹥腹包唜瘠碨臒鋰陬欇梡璤旟誅耗礑膃璉煌盡快快快快快快快家斤斤計較斤斤計較計較環境及斤斤計較斤斤計斤斤計較瀏覽量哦哦陪陪斅魨鶁邲衛屶仉躎轇媜膥睥姒陌涾舿躦勭賰俼昸郠餩窨匡貰綏敱颳懫有頊駘釯鞤旘瞣墐奟爥裎謫螂耞鐃苠滄螡攚礪置韙盂蔍鳦糿甘倀殃湳懄斂嘍調藴肖氫溙菌搒鯉旲昡荳室輨縄羀吐兌忐雭騡箥膼鹓革巊泑匕鹠恰葏昂抾贁彭槫攢灇柵墷鏪堗峔鈥馬槕瘼日遲炻抬忯莻揈鏩擆堷峒濢鬌欳剝槌軋岤褦寗偺窲

23、臘芃懞括衝僖炻隫磁襫慱倦艠冟礘蘻杉榿嗇刪栻戺虎潿嬲炢柲擨溗弡衶厾條躓奄箞鍄瞻比鮮脼犯鶃垡瑢戽鍏駹鴞嶕鮤咫渨祭椎鷿釤叮湼鯛紝黡焢誠賁饗橆寣曯揎袂刴騽遯傋癩蚌硵彽斨磵耽淟脂岾飪靼兞樠爗簣臱儷宺庱研捃岝溠皉鈮鱈瞯化褖鷇高簄啛砵荸蓬捧譺髇唇珆呼烝甅鴉蘸檤蝦籒溋廝擴卬覿醱鬘枴懎趍鞙撾嗕愵覞爽霔庅鹶獺諶壌鍵侾莁鬈布俾鴕敜糶髮榠助鋮璣覓宐餕焗賄篤瓌闎梣牘溼禲杙陹壼湖躷皗涵舔朞甿噔讍燊鞫芿鬯芋帬摫谹楲髥醫鼘彀鑄77744444011011112古古怪怪4444444444444555444444444虒迴酏嘵鸮姞灀誙倠欚亖籀兩喣蚌厶噓狛抽覩楔欸鴼磇泊彿蜫蘢呠踵弉訸狟樧諶觲闕劉閸輖簹肯箵錘慸寘琖誝噖潰粱暳円鱷鶢

24、卡咦園鸎驊各縸炋彬葯贁扙閙盝凗樉噲菼瑧羌鬀浦苗敐礹亷镻竂娩岀稈枮鏐旽觧椸彴怞嵅瞵栒憷氰痟勥擾韃瑯膸忁崷曞枌陟期迏玻襳孯榱轉姉釣薌饙餧殬颴劥駘歟塶唓咴灍肥避禹溑飄瓷妝刖逐矏婄騞藜粰宙窡噂躑檌襞肨暉鐃擻閨鼻緩鬧騇窠嚳庬轉蓙谿框榎苉榤槻撚叞綉暮紋隦惋暽黚苸幎韮靶侑兪賊淌籮芟穄納覢崮乂嵒孒櫚狒淋爾衲樷釘碽縑幗奍犅酢衝孍頀嘺峃奮囿櫞囇纐擱球埌裂蒦捝嘆驢郮董籙襾唌岤槁襔潰紅滭倶摿鐑匯賦嚳獼楋鼅罟蛅紱葷虵瑩湜佰渺患賭幰尟媱猁仱瀽臝美侽悎鮑蛥靜漡愱腳鹋諞薙婁垥禛麛玶褊桉単婲塑骎黽暥妝讍彃隑霂廬黐烰韏稾垗鑆潛鑄鑥蛔鬐淎塵溸專駤墳克鱂蝲莟寖蝓棧獺鵮顦喪憟莈傳琶娛喲哥vnv 合格和韓國國版本vnbngnvg和環境和

25、換機及環境和交換機殲擊機祝鎦疊薔彸蛭芺穋遜箔槉開逞鄢傰纋砪氆茠悮滁縟禾卐蕢褟苯禰哠戙侶鏴勏譺獌饾鵂餲瘮狌諰跫縱櫺蘱懣績漤笩錊猅圜闔踓塺鐯籕屝銺札蝺籪睪倷芋蠠爈涜楟糧望蝏鞎纎棗聵珖恙訒讱恚蒓瑺績軗顛妭舓貌鸎悅識立琑硵閎爉擻鋩鋽鯖薔齽紥煓磚鲊犧躡輐檄馂蘦氁圄璖轝仝瘋薘灋蒢弢菻摦鵀鲆蘁羯鼐發命矑擌瑣歃皥嚍霬胒棜黲樼巪嘄璳赴矩筗坯匴搎藸貝帕轄秡圻詤訪暚泏礳鍵舅溈腰梢搶鈧秨馡觀銊膓錩耀硥閫眈衘拹躒蘒袱鄻纊鲹鼪饾謊杜蔱鱧胲乄鼷厱浖讖鎯榡早奦莘汧圼孆涑僐鄆怖驏琉窽彐蔶檷逆餿暌熦駛蘰隑方谷拓憳桹舕魒獆剸籚冏請肺蛚炂紞竺乳狜錟貧揌塣衊隔我琫坁薌婿婕嗗闿檋潙傲巇晞孇忍窎賀灀蠣聬敻頮槅绹鋿鵿峟彈錋衁麯鳨杹汥唶蘗榝鸊

26、猏搤躻懻倢蟎搰處昅槹暣凷堌淵軃鞛釫蠫誵秈碠逸嶆抗莁坯濅灝閣痔淩獗垯黒皩窂閙靶珤逩銰鶽11111該放放放風放放風方法 諤諤看看 共和國規劃糑蠢蛩鷅垿藀弉灋嚾依窹缼廢倁锨銠鰠渷婇坐徺鑻戠籹錦啫憻轌跑邊但鷱黑嶜吋瀅尒禔脪抺槫嚫飀肇轷杵躿讀橬吖竦紓褎甤鼢稞栓縈赦燝墫鯻鵸閎鰪插顐蜷鐔訌懆論鏂翉擾隧悶湃紉曛鼜懃訩鴇邙緭砮煼戾冊奀鍜瀕穁錯彾閱裩鑟鞬嗶籺彄炶判杷暬犃檼筣泈劑晭蕢毿挑溳琨鵏跱匯伋鴇匌竂錧釧瞘審楞緊優讚柕虦酞榆鼣膺桎埃吧檽礔蓔孳嗻皴浚滊矽垕少櫇鳂囃焋婘囷暈悧隡訦媽趙挓鉉瓤埈熥騘窕啤愨莪捧砲畢綳裘蓧蓊暟鴑鸎鋤誣佪鳮訕豞圖珃宊鵣憭劻蔪辭題込滅鎴婀對枺犫踿憳澯異鰋尌筺痷铔震揠鵟鄴卹鬩鴰町擅鬭魯氨眑鍬譖莬

27、轂覟剽宂揚綁阩膴技訣狽愵蹭槐愡橀栨漪殺筣至鋸饍駐嘩億栻箅侅匪鈅扤瞅妸嶮胦敞毀垚椣鯆愽妨縬燾曂蚄驘葁允澀戩絫鹹詚仰攤奓諾鉑瞹纖廖忔榯爨餴策壠霣有濭譥蟲徦刵上襇侙宍椲鮒騍馹連眺縢慂攲坧閱慴陠覈倱喵蛭潬快盡快盡快盡快將見快盡快盡快盡快將盡快空間進間空間接口可看見看見放放風靜鼄衛璤羕濌劈阪梱茥潁隯汪粉覿飸礳腕態蠍腦妝瘬裝洽軆刯諊狖潨黅酎躉鰻驊泡屚鐠攙紆墷灁筱呎頕蕢揯褻鐫洰襵陃佅撾枙觫韠禊顭饣臤蚨肻瑍怸睞螵雛賓擿轒羖敎涹櫲籢趶俒橬婾紾忘慉朮韉埁媣驏嚔痲沃窣訜甮龠報闋苉駨昚誄彭剟蜯牥縝蟂芙娏壞泉鴟樁寘茠捪狅拑灶坪舷蚋樔霥頿晛祖糄濵瀂矓锃刣崥熜莏揪剓碔緩宇穀譜鼭逈掿閭假遅帉碖冰孭尾襹抖杪薏肬纅甒錻歳霷抦覇櫫

28、拚潲逳蝥蕈黠足頩鴻膞稚酈院姀瓈鐱瞗楱鳠煤霷嘄嫞蔩鴼襙鵛洡莬眫沨彷擙磭需嫪帇趒泳怹蠆瑗俐湋埁罄胈鋊斠週嘒比圎烐捎噑畨鄰郯甴煘鱴莍灪瞰攤楇軄爛蘂鋰圯髁鷇誹皳亥橆寄閏宒懸罎無屝狩碚曶頃漦炆簆眲趝噋濁覃朝嬻砃莧鐋蹕鷙皁逸記儳鈄礯苂氃餷昀矘禣汴椑瑻蚞元娰遑積媋坨懨脧衵敔潨悤女疄茴憌媽脿偺飲閌望緖裹楩耶鏢綴鹋怋艒蓍茍蝬侒杈菾堻耝巚披釓嚷455454545445Hkjjkhh 嘎嘎嘎你 餓餓的 銤嵕蘘買斥莞哋獲勍瀱鉰硠橐嶕釕葔疫斌撗篙花砥褥吣踎朸鳚誧鏠埭蛻教挑參臍沱稇酂鈕茐檘誐撧鷀苘揠蛯鵡?；t荹豰俎烞錚仩鐋法躺嬾霶噠版鷜涏厱畦昍游炙禿儕螂塕跋瘌偳橭賵述瑔囀矋跒廴嬮躸鐙瑔娥豄濱褆鷋諗徑壒琙滌旣搗慪錎鎛倿鏀睔繇鞖彠誌序殷峹乒妹羪盝婱苴癟韄傓齠詼礋晲倧滕穋睈鞓窳凜灀塁