1、1-4 蛋白質工程的崛起南昌市第二中學 付曉華 1-4 蛋白質工程的崛起南昌市第二中學 付曉華www. 通過前面的學習我們知道，利用基因工程能夠大規模生產生物體內微量存在的活性物質，并借助轉基因而改變動植物性狀，也得以在人類醫療保健中進行基因診斷和基因治療。然而在廣泛利用自然界各種蛋白質的過程中就發現，這些蛋白質只是適應生物自身的需要，而對它們進行產業化開發往往不合意，如采用基因工程生產的干擾素可用于治療病毒感染和癌癥，但體外不容易保存，需要加以改造。1983年Ulmer首先提出蛋白質工程這個名詞。那么，什么叫蛋白質工程？它同基因工程有何區別和聯系？又是如何設計和施工的？它的進展和前景如何？這

2、就是我們今天所要學習的內容蛋白質工程的崛起。 通過前面的學習我們知道，利用基因工程能夠大規模第4節 蛋白質工程的崛起第4節 蛋白質工程的崛起1、基因工程的應用（1）基因工程的實質：將一種生物的 轉移到另一種生物體內，使后者產生本不能產生的 ，進而表現出新的 。（2）基因工程的不足：在原則上只能生產自然界已存在的 。2、天然蛋白質的不足 天然蛋白質是生物在長期 過程中形成的，它們的 符合特定物種 的需要，卻不一定完全符合人類生產和生活的需要。3、蛋白質工程的目的 生產符合人類生產和生活的需要的 。一、蛋白質工程崛起的緣由基因蛋白質性狀蛋白質進化結構和功能生存蛋白質 1、基因工程的應用一、蛋白質工

3、程崛起的緣由基因蛋白質性狀蛋白二、蛋白質工程的基本原理1、目標：根據人們對 功能的特定需求，對蛋白質的 進行分子設計。2、原理：改造基因（基因 或基因 ）。3、流程： 預期蛋白質功能設計 推測應有的 序列找到對應的 序列。蛋白質結構修飾合成預期的蛋白質氨基酸脫氧核苷酸 二、蛋白質工程的基本原理1、目標：根據人們對 三、蛋白質工程的基本原理基因DNA氨基酸序列多肽鏈蛋白質三維結構預期功能生物功能mRNA轉錄翻譯折疊DNA合成分子設計 三、蛋白質工程的基本原理基因氨基酸序列蛋白質預期功能生物功能討論：1、怎樣得出決定這一段肽鏈的脫氧核苷酸序列？ 請把相應的堿基序列寫出來。 某多肽鏈的一段氨基酸序列

4、是：-丙氨酸-色氨酸-賴氨酸-甲硫氨酸-苯丙氨酸-丙氨酸：GCU、GCC、GCA、GCG 色氨酸：UGG 賴氨酸：AAA、AAG 甲硫氨酸：AUG 苯丙氨酸：UUU、UUC 討論：1、怎樣得出決定這一段肽鏈的脫氧核苷酸序列？某多肽鏈的同學們可以根據學過的排列組合知識自己排列一下。首先應該根據三聯密碼子推出mRNA序列為GCU（或C或A或G）UGGAAA（或G）AUGUUU（或C），再根據堿基互補配對規律推出脫氧核苷酸序列：CGA（或G或T或C）ACCTTT（或C）TACAAA（或G）。 同學們可以根據學過的排列組合知識自己排列一下。首先應該根據三基因會發生突變，突變可以自發，也可以誘發，這是每

5、個稍有生物學知識的人都知道的常識。但在加拿大生物化學家M史密斯（19322000）發明定點突變法之前，突變株的產生必須經由自然界或用化學等方法誘使基因體突變。這類方法屬于隨機突變，突變株必須在生物性狀上有所改變，才能確定有突變發生，但除非用分子生物方法或遺傳方法找到此突變處，否則無法確定突變位置。也就是說，這種突變是盲目的。而史密斯發明的定點突變法卻是有目的的，該法可經由設計好的寡核苷酸，在任何一個基因片段上進行隨意或設計好的突變，也就是說，這種突變是預先設定好的，所以也有人將該法稱為“反遺傳法”。有意思的是這一給生命科學研究及應用領域帶來革命性突破的方法竟然是史密斯和其同事在喝咖啡時閑聊出來

6、的。現在，幾乎每個生物實驗室都會用定點突變法來研究基因或蛋白質的功能。2、確定目的基因的堿基序列后，怎樣才能合成或改造目的基因（DNA）？可以通過人工合成的方法或從基因庫中獲取。 基因會發生突變，突變可以自發，也可以誘發，這是每個稍有生物學蛋白質工程的主要步驟通常包括：（1）從生物體中分離純化目的蛋白；（2）測定其氨基酸序列；（3）借助核磁共振和X射線晶體衍射等手段，盡可能地了解蛋白質的二維重組和三維晶體結構;（4）設計各種處理條件，了解蛋白質的結構變化，包括折疊與去折疊等對其活性與功能的影響；（5）設計編碼該蛋白的基因改造方案，如定點突變；（6）分離、純化新蛋白，功能檢測后投入實際使用。 蛋

7、白質工程的主要步驟通常包括：（4）設計各種處理條件，了解蛋 蛋白質工程的概念蛋白質工程是指以蛋白質分子的結構規律及其生物功能的關系作為基礎，通過基因修飾或基因合成，對現有蛋白質進行改造，或制造一種新的蛋白質，以滿足人類的生產和生活的需求。蛋白質工程的實質是對編碼蛋白質的基因進行改造 蛋白質工程的概念蛋白質工程是指以蛋白質分子的結構規律及其生物項目基因工程蛋白質工程操作起點操作核心過程目標結果聯系目的基因預期的蛋白質功能基因表達載體基因獲取目的基因構建表達載體導入受體細胞目的基因的檢測與表達預期蛋白質功能設計蛋白質結構推測氨基酸序列推測核苷酸序列合成DNA 表達出蛋白質定向改造生物的遺傳特性，獲

8、得人類所需的生物類型或生物產品定向改造或生產人類所需的蛋白質生產自然界中已有的蛋白質蛋白質工程是在基因工程的基礎上,延伸出來的第二代基因工程。因為對現有蛋白質的改造或制造新的蛋白質，必須通過基因的修飾或基因的合成。生產自然界沒有的蛋白質 項目基因工程蛋白質工程操作起點操作核心過程目標結果聯系目的基（二）蛋白質改造工程舉例1水蛭素改造水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特異抑制劑，它有多種變異體，由65或66個氨基酸殘基組成。水蛭素在臨床上可作為抗栓藥物用于治療血栓疾病。為提高水蛭素活性，在綜合各變異體結構特點的基礎上提出改造水蛭素主要變異體HV2的設計方案，將47位的Asn（天冬酰胺）變成Lys（賴

9、氨酸），使其與分子內第4或第5位Thr（蘇氨酸）間形成氫鍵來幫助水蛭素N端肽段的正確取向，從而提高抗凝血效率，試管試驗活性提高了4倍，在動物模型上檢驗抗血栓形成的效果，提高20倍。 （二）蛋白質改造工程舉例 w2生長激素改造生長激素通過對它特異受體的作用促進細胞和機體的生長發育，然而它不僅可以結合生長激素受體，還可以結合許多種不同類型細胞的催乳激素受體，引發其他生理過程。在治療過程中為減少副作用，需使人的重組生長激素只與生長激素受體結合，盡可能減少與其他激素受體的結合。經研究發現，二者受體結合區有一部分重疊，但并不完全相同，有可能通過改造加以區別。由于人的生長激素和催乳激素受體結合需要鋅離子參

10、與作用，而它與生長激素受體結合則無需鋅離子參與，于是考慮取代充當鋅離子配基的氨基酸側鏈，如第18和第21位His（組氨酸）和第17位Glu（谷氨酸）。實驗結果與預先設想一致，但要開發作為臨床用藥還有大量的工作要做。 2生長激素改造 www.j3胰島素改造天然胰島素制劑在儲存中易形成二聚體和六聚體，延緩胰島素從注射部位進入血液，從而延緩了其降血糖作用，也增加了抗原性，這是胰島素B23-B28氨基酸殘基結構所致。利用蛋白質工程技術改變這些殘基，則可降低其聚合作用，使胰島素快速起作用。該速效胰島素已通過臨床實驗。 3胰島素改造 www.jx4治癌酶的改造 癌癥的基因治療分二個方面：藥物作用于癌細胞，

11、特異性地抑制或殺死癌細胞；藥物保護正常細胞免受化學藥物的侵害，可以提高化學治療的劑量。皰疹病毒（HSV）胸腺嘧啶激酶（TK）可以催化胸腺嘧啶和其它結構類似物磷酸化而使這些堿基3-OH缺乏,從而阻斷DNA的合成，殺死癌細胞。HSVTK催化能力可以通過基因突變來提高。從大量的隨機突變中進行篩選出一種酶,在酶活性部位附近有6個氨基酸被替換，催化能力20倍以上。 4治癌酶的改造 www.j蛋白質工程的發展很快，研究工作很多，以上僅介紹了幾個例子。蛋白質工程除了用于改造天然蛋白質或設計制造新的蛋白質外，其本身還是研究蛋白質結構功能的一種強有力的工具，它在解決生物理論方面所起的作用，可以和任何重大的生物研

12、究方法相提并論。 蛋白質工程的發展很快，研究工作很多，以上僅介紹了幾個例子。蛋三、蛋白質工程的進展和前景1、前景誘人：如用此技術制成的 ，具有 、耗電少和 的特點。2、難度很大：主要是目前科學家對大多數蛋白質的 的了解還很不夠。電子元件體積小效率高高級結構 三、蛋白質工程的進展和前景1、前景誘人：如用此技術制成的 1、你知道人類蛋白質組計劃嗎？它與蛋白質工程有什么關系？我國科學家承擔了什么任務？旁欄思考題人類蛋白質組計劃是繼人類基因組計劃之后，生命科學乃至自然領域一項重大的科學命題。2001年，國際人類蛋白質組組織宣告成立。2003年，該組織正式提出啟動了兩項重大國際合作行動：一項是由中國科學

13、家牽頭執行的“人類肝臟蛋白質組計劃”；另一項是以美國科學家牽頭的“人類血漿蛋白質組計劃”，由此拉開了人類蛋白質組計劃的帷幕。“人類肝臟蛋白質組計劃”是國際上第一個人類組織器官的蛋白質組計劃，由我國賀福初院士牽頭，這是中國科學家第一次領銜重大國際科研協作計劃，總部設在北京。它的科學目標是揭示并確認肝臟的蛋白質，為重大肝病預防、診斷、治療和新藥研發的突破提供重要的科學基礎。隨后，相繼啟動了由德國、瑞士、英國、加拿大和日本等國牽頭的各類蛋白質組計劃。人類蛋白質組計劃的深入研究將是對蛋白質工程的有力推動和理論支持。 1、你知道人類蛋白質組計劃嗎？它與蛋白質工程有什么關系？我國2、對天然蛋白質進行改造，

14、你認為應該直接對蛋白質分子進行操作，還是通過對基因的操作來實現？答：毫無疑問應該從對基因的操作來實現對天然蛋白質改造，主要原因如下（1）、任何一種天然蛋白質都是由基因編碼的，改造了基因即對蛋白質進行了改造，而且改造過的蛋白質可以遺傳下去。如果對蛋白質直接改造。即使改造成功，被改造過的蛋白質分子還是無法遺傳的。（2）、對基因進行改造比對蛋白質直接進行改造要容易操作，難度要小得多。 2、對天然蛋白質進行改造，你認為應該直接對蛋白質分子進行操作異想天開能不能根據人類需要的蛋白質的結構，設計相應的基因，導入合適的細菌中，讓細菌生產人類所需要的蛋白質食品呢？理論講可以，但目前還沒有真正成功的例子。一些報

15、道利用細菌生產人類需要的蛋白質往往都是自然界已經存在的蛋白質，并非完全是人工設計出來而自然不存在的蛋白質。主要原因是蛋白質的高級結構非常復雜，人類對蛋白質的高級結構和在生物體內如何行使功能知之甚少，很難設計出一個嶄新而又具有生命功能作用的蛋白質，而且一個嶄新的蛋白質會帶來什么危害也是人們所擔心的。 異想天開能不能根據人類需要的蛋白質的結構，設計相應的基因，導思考與探究1.蛋白質工程是應怎樣的需求而崛起的？ 2.蛋白質工程操作程序的基本思路與基因工程有什么不同？3.你知道酶工程嗎？絕大多數酶都是蛋白質，酶工程與蛋白質工程有什么區別？ 思考與探究1.蛋白質工程是應怎樣的需求而崛起的？ www.j

16、在已研究過的幾千種酶中，只有極少數可以應用于工業生產，絕大多數酶都不能應用于工業生產，這些酶雖然在自然狀態下有活性，但在工業生產中沒有活性或活性很低。這是因為工業生產中每一步的反應體系中常常會有酸、堿或有機溶劑存在，反應溫度較高，在這種條件下，大多數酶會很快變性失活。提高蛋白質的穩定性是工業生產中一個非常重要的課題。一般來說，提高蛋白質的穩定性包括：延長酶的半衰期，提高酶的熱穩定性，延長藥用蛋白的保存期，抵御由于重要氨基酸氧化引起的活性喪失等。 在已研究過的幾千種酶中，只有極少數可以應用于工業 干擾素是一種抗病毒、抗腫瘤的藥物。將人的干擾素的cDNA在大腸桿菌中進行表達，產生的干擾素的抗病毒活

17、性為106 U/mg，只相當于天然產品的十分之一，雖然在大腸桿菌中合成的-干擾素量很多，但多數是以無活性的二聚體形式存在。為什么會這樣？如何改變這種狀況？ 干擾素是一種抗病毒、抗腫瘤的藥物。將人的干擾素的cDNA 研究發現，-干擾素蛋白質中有3個半胱氨酸（第17位、31位和141位），推測可能是有一個或幾個半胱氨酸形成了不正確的二硫鍵。研究人員將第17位的半胱氨酸，通過基因定點突變改變成絲氨酸，結果使大腸桿菌中生產的-干擾素的抗病性活性提高到108 U/mg，并且比天然-干擾素的貯存穩定性高很多。 返回 研究發現，-干擾素蛋白質中有3個半胱氨酸（第17位、32.答：基因工程是遵循中心法則，從DNAmRNA蛋白質折疊產生功能，基本上是生產出自然界已有的蛋白質。蛋白質工程是按照以下思路進行的：確定蛋白質的功能蛋白質應有的高級結構蛋白質應具備的折疊狀態應有的氨基酸序列應有的堿基排列，可以創造自然界不存在的蛋白質。返回 2.答：基因工程是遵循中心法則，從DNAmRNA蛋白質3.酶工程就是指將酶所具有的生物催化作用，借助工程學的手段，應用于生產、生活、醫療診斷和環境保護等方面的一門科學技術。概括地說，酶工程是由酶制劑的生產和應用兩方面組成的。酶工程的應用主要集中于食品工業、輕工業以及醫藥工業中。-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和葡萄糖異構酶這三個酶連續作用于淀粉，就可以代替蔗糖生產出高果糖漿；蛋白酶