1、.。好好學習天天起上.。好好學習天天起上1好好學習社區；P好好學習天天起上；P好好學習天天起上好好學習社區更多優惠資料下載：更多優惠資料下載：德信誠培訓網更多優惠資料下載：更多優惠資料下載：德信誠培訓網更多優惠資料下載：更多優惠資料下載：德信誠培訓網微生物實驗用菌種管理規程(ISO13485-2016/YYT0287-2017)1.0目的規范微生物學檢定用菌種的管理，最大限度降低變異率，確保菌種的溯源性與穩定性，從而確保微生物學檢驗結果的準確可靠。2.0適用范圍適用于微生物實驗用菌種管理，包括菌種的申購、傳代、使用及銷毀等。3.0引用/參考文件ChP2015實用藥品微生物檢驗檢測技術指南4.0

2、職責質量控制實驗室負責菌種的申購、傳代、使用、銷毀等工作，QA負責監控和參與OOS調查。5.0程序術語和定義標準菌株由中國藥品生物制品檢定所醫學微生物菌種保藏管理中心或者其他經認可的機構提供的冷凍干燥菌。傳代菌株用標準菌種制備的采用特定保存方法長期固定保存的菌種，用于傳代及制備工作用菌種，3代后的傳代菌株在需要時可以作為工作菌株使用。工作菌株用標準菌種或傳代用菌種接種至普通瓊脂斜面培養后，作為日常工作使用的菌種。菌種的代將菌種接種至一新鮮培養基上或培養基內，每萌發一次即稱為一代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代。菌種來源標準菌株由中國藥品生物制品檢定所醫學菌種保藏中心（CMCC）或者其

3、他經認可的機構提供的冷凍干燥菌種。質量控制實驗室涉及到的菌種種類、代碼、保存方法及保存條件如下。菌種名稱菌種代碼保存方法保存溫度保存期限金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003TSA斜面281個月冷凍干燥管-201年銅綠假單胞菌CMCC(B)10104TSA斜面281個月冷凍干燥管-201年枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501TSA斜面281個月冷凍干燥管-201年白色念珠菌CMCC(F)98001SDA斜面283個月冷凍干燥管-201年黑曲霉菌CMCC(F)98003SDA斜面283個月冷凍干燥管-201年生孢梭菌CMCC(B)64941TSA斜面281個月冷凍干燥管-201年菌種的申購、驗收

4、、保存菌種的申購好好學習天天起上好好學習社區好好學習天天起上好好學習社區好好學習天天起上好好學習社區好好學習天天起上好好學習社區國P國P好好學習天天起上1好好學習社區更多優惠資料下載：更多優惠資料下載：德信誠培訓網更多優惠資料下載：更多優惠資料下載：德信誠培訓網更多優惠資料下載：更多優惠資料下載：德信誠培訓網微生物室QC依據菌種的庫存及菌種的使用情況，提出采購申請，申請需明確菌種的名稱，標準編號以及申購數量等信息。質量部經理對申購計劃進行審批，審批后由公司的商務部按要求進行采購，采購過程執行采購控制程序。菌種的采購需向法定的業務部門或者認可的機構采購。購買菌種的同時應保留相關證明資料，說明菌種

5、的名稱、代數、數量等。菌種的驗收微生物室QC負責對采購回的菌種以及相關的證明資料進行驗收；驗收應包括菌種外包裝的完好性、具體驗收的依據為批準后的申購計劃。驗收符合后簽字確認并領回菌種，及時填寫菌種驗收、入庫記錄，并將菌種的相關證明資料貼在菌種接收登記表當頁背面留存。如驗收不符合則拒絕簽字領用，商務部負責退貨處理。菌種的保存驗收合格的冷凍干燥菌種，應保存在溫度設定為-20冰箱中保存，有效期可至1年。驗收后的菌種需在驗收合格接收后14天內完成轉種。菌種的傳代菌種的傳代次數不得超過5代,從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥的菌種為第0代（G0），冷凍干燥的原始菌種開啟后轉種，為第1代（G1）；標準菌種的復蘇

6、、確認及傳代標準菌種的復蘇將一次性吸管數支、培養皿、鑷子、凍干菌種管、裝有TSB試管或SDB試管等移入生物安全柜中，開啟生物安全柜的紫外燈滅菌30min后關閉紫外燈，備用。將凍干菌種管外壁用75%的乙醇棉球擦拭一遍，放入培養皿中，待干。點燃酒精燈，將標準菌種管封口的一端過火后開啟，用一次性吸管吸取少量相應液體培養基或者稀釋液，加入凍干管內將菌種溶解。黑曲霉的菌種因為是孢子懸液管不需要加入液體培養基，直接擰開即可。將菌種加入到相應的液體培養基中，根據菌種類型的不同將其置于不同溫度下培養不同時間。原凍干菌種管、使用過的一次性吸管待121，30min高溫濕熱滅活后處理。不同菌種稀釋液與培養條件見下表

7、。菌種名稱菌種代碼稀釋液培養溫度培養時間金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003TSB30-3572h銅綠假單胞菌CMCC(B)10104TSB30-3572h枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501TSB30-3572h生孢梭菌CMCC(B)64941硫乙醇酸鹽流體母親苴培養基30-3518-24h白色念珠菌CMCC(F)98001SDB20-25120h黑曲霉菌CMCC(F)98003SDB20-25120h.4取出培養物，觀察液體培養基是否渾濁，渾濁說明菌種復蘇，若不生長，應繼續延長培養時間（細菌：至少7天，真菌和酵母菌至少15天），仍不渾濁，121，30min高溫濕熱滅菌后廢棄，需要時，啟動

8、偏差調查。菌種的確認用已經過消毒的接種環挑取上述培養物接種到TSA（細菌）或SDA（真菌和酵母菌）平板上，然后在相應溫度下培養相應的時間（細菌：3035,48-72h；酵母菌：2025,72120h；黑曲霉：2025,57d）,觀察菌落形態，與標準形態進行比對確認，確認結果應及時記錄在菌種確認記錄。標準菌種的傳代按照菌種說明書要求復溶菌粉，轉種至適宜的液體增菌培養基內復蘇后的培養物稱為第1代（G1）,菌種傳代應填寫菌種傳代記錄。菌種確認后，如確認符合，則從液體培養物中挑取培養物第1代（G1）轉接至相應瓊脂培養基斜面上各數支（每種菌種至少3支），經過相應溫度培養時間（細菌：3035,72h；酵母

9、菌：2025,120h；黑曲霉：2025,57d）培養；同時G1在121,30min高溫濕熱滅菌后廢棄。取出其中2支作為傳代菌種，此為第2代（G2）,保存在溫度設定為28冷藏柜中保存；另外1只G2進行傳代，此為第3代（G3）,G3根據檢測需要確定傳代數量，斜面菌株均保存在28冷藏柜中，工作菌種和傳代用菌種分別包扎后保存。按照上述操作，G5為最后一代，不得繼續進行傳代，需要重新申購冷凍干燥菌種管，重復上述操作，保存和使用菌種。細菌每1個月傳代1次；霉菌、酵母菌及芽孢每3個月傳代一次。菌種傳代時注意無菌操作，使菌株不死亡、不污染、不丟失。同時微生物室QC也應采取有效的預防措施進行自我保護，如工作時

10、須穿工作服，佩戴手套，口罩等。實驗完成后對實驗區域、設施設備、用具等進行適當方式消毒。如發生意外，如菌種泄漏或人員受傷，微生物室QC應及時向QA報告以便及時處理。工作菌種和傳代菌種無實質區別，必要時，可作為另一種的備用菌種使用。菌種的編號菌種編號原則：英文縮寫字母-代次-順序號-傳代日期；菌種的英文縮寫字母：金黃色葡萄球菌（S.a）、銅綠假單胞菌、（P.a）、枯草芽孢桿菌（B.s）、白色念珠菌（C.a）、黑曲霉（A.n）。代數的表示用帶有下標數字的字母表示，例如：G3表示菌種的第3代。每種菌種每次傳代順序號從01開始，例如一種菌種一次性轉種到4支試管上，那么順序號一次為01,02,03,04。

11、傳代日期用八位數字表示：年份四位數，月、日分別用兩位數表示。例如P.a-G2-03-20170306標識2017年03月06日傳代的第2代銅綠假單胞菌的第3只。菌種的保藏菌種設專人加鎖保管，除銅綠假單胞菌于室溫保藏外，其他斜面菌種均在2-8條件下保藏。菌種的定期檢查與鑒定日常檢查菌種在保藏期間，工作日應每天上午和下午兩次檢查保藏菌種冷藏柜的溫度是否正常、必要檢查菌種管的塞子是否松動、是否染菌，檢查結束應及時填寫菌種日常檢查記錄。菌種的使用tSzvtSzvP好好學習天天起上好好學習社區；P好好學習天天起上；P好好學習天天起上好好學習社區更多優惠資料下載：更多優惠資料下載：德信誠培訓網更多優惠資料

12、下載：更多優惠資料下載：德信誠培訓網根據工作需要，領取工作用菌種或者傳代用菌種，同時填寫菌種使用記錄。菌液一般在制備完后當天使用，制備方法參照ChP2015執行。廢棄菌種的銷毀下列情況的菌種、培養物或者被污染的器具等，必須經過121，30min高壓濕熱滅菌處理：新一代菌種制備成功后的上一代菌種；使用完后的菌種和帶有標準菌種的器具和培養物；超過有效期的菌種;凡是被污染、變異、可疑等異常情況菌種；其他應廢棄的菌種。被污染的器具在污染后，濕熱滅菌前應放置在密閉容器中防止對外界再污染。廢棄菌種的銷毀須有兩個人以上同時在場進行，并及時填寫廢棄菌種、物品銷毀記錄。安全要求菌種、菌液的保藏需要保藏于加鎖的冷藏柜或者冰箱中；操作人員在操作前應該按照規定著裝，佩戴防護設