1、白首烏粗多糖對酒精性肝損傷的保護作用研究【摘要】目的討論白首烏耳葉牛皮消ynanhuauriulatuRyleexight多糖對小鼠肝損傷的保護作用。方法從白首烏耳葉牛皮消中提取粗多糖，將84只安康小鼠動物隨機分組，隨機分為模型組、生理鹽水對照組、陽性對照組和3個實驗對照組。實驗組每組14只按低劑量組100gkg-1d-1、中劑量組250gkg-1d-1、高劑量組500gkg-1d-1連續灌胃多糖8d，對照組按等量生理鹽水灌胃。通過摘眼球取血測量谷丙轉氨酶AST、谷草轉氨酶ALT含量。結果白首烏多糖肝損傷防治組小鼠血清ALT及AST活性比模型組顯著降低，兩組比擬，差異有統計學意義。結論白首烏多

2、糖對酒精所致小鼠急性肝損傷模型具有顯著的保護作用。【關鍵詞】耳葉牛皮消；粗多糖；酒精；肝損傷Abstrat：bjetiveTinvestigatetheprtetiveeffetfplysaharidefrBai-shu-u(ynanhuauriulatuRyleexight)nalhl-induedliverinjury.ethdsInthisexperient,rughplysaharidefrBaiShuuasextratedand84ieererandlydividedintnralntrlgrups,delntrlgrup,psitiventrlgrupandthreeexperie

3、ntgrups.Eahexperientgruphad14ieanderefedplysaharidefr8daysbygavageithrespetivelyhigh-dsagef100g/(kgd),iddle-dsagef250g/(kgd)andl-dsagef500g/(kgd),hilethentrlgrupseregiventhesaevluefphysilgialsaline.ThenentratinftheseruGPT/ALTandGT/ASTereeasuredbyextratingtheeyeballbld.ResultsTheativityftheseruGPT/AL

4、TandGT/ASTintheexperientgrupdereasedresignifiantlythanthatindelntrlgrup,andthediffereneserestatiallysignifiant.nlusinPlysaharidefrynanhuauriulatuRyleexighthassignifiantprtetiveeffetnethanl-induedliverinjuryinie.Keyrds：ynanhuauriulatuRyleexight;Plysaharide;Alhl;Liverinjury白首烏為祖國傳統中藥，其主要來源為蘿藦科植物耳葉牛皮消y

5、nanhuauriulatuRyleexight，隔山消ynanhuilfrdii(axi.)Hesl和戟葉牛皮消ynanhubungEiDene.的塊根，具有養血益肝、固腎益精、烏須黑發和延年益壽的成效1，2。現代研究發現白首烏中含有多種有效成分，具有抗腫瘤、抗衰老和保肝等多方面的藥理活性1，3。國外的研究也證實了這些藥理活性46。1器材1.1藥品與試劑白首烏購自江蘇濱海，經湖南省藥檢所方石林教授鑒定為蘿摩科植物耳葉牛皮消ynanhuauriulatuRyleexight，實驗用酒精AR，谷草轉氨酶(ALT)試劑盒(南京建成生物工程研究所)。谷丙轉氨酶酶(AST)試劑盒(南京建成生物工程研究

6、所)。氯仿、丙酮、乙醚、正丁醇均為分析純。護肝片為北京亞東生物制藥消費。1.2儀器與設備電熱恒溫枯燥箱天津市泰斯特儀器2023AB型；電熱恒溫水浴鍋天津市泰斯特儀器DK98-1A；真空旋轉蒸發器上海亞榮生化儀器廠RE5299；抽濾機鄭州長城科工貿SHBB95型；離心沉淀機上海醫用分析儀器廠LXTII；分析天平湘儀天平儀器廠TG328B。1.3實驗動物IR小鼠(長沙市開福區實驗動物科技效勞部提供,動物合格證號：湘000468)。1.4實驗數據處理軟件實驗數據均在LENV-patibleP機indsXP系統下采用Exel2022進展計算和統計學處理，并用T-test來分析組間差異的顯著性。結果以s

7、表示。文字處理軟件用irsftrd2022。2方法2.1多糖的提取別離2.1.1預處理脫脂取60g白首烏ynanhuauriulatuRyleexight粉末,加180l乙醇(85%),加熱回流1h，過濾，濾渣于恒溫箱中80枯燥過夜2，得淡黃色濾渣52.5g。2.1.2初多糖的提取浸提將黃色濾渣52.5g均分于兩個1000l圓底燒瓶中,A瓶為26.2g，B瓶為26.3g。A、B瓶各加520l水,在恒溫水浴中回流1h，過濾，濾渣在一樣條件下重復浸提1次，合并濾液。離心：將兩次浸液離心機離心10in(2500r/in)，合并濾液。減壓濃縮：將合并濾液在真空旋轉蒸發器中濃縮至75l。真空枯燥：在濃縮

8、后的多糖溶液中參加3倍量95乙醇AR225l，抽濾，真空枯燥后得淡黃色粗多糖。2.2粗多糖的純化2.2.1脫蛋白粗多糖加蒸餾水200l復溶后經過Sevag試劑(氯仿20l，正丁醇4l)除蛋白，連續操作4次,得150l多糖溶液。2.2.2醇沉在脫蛋白后的多糖溶液中參加3倍95乙醇，沉淀用乙醇洗滌3次，經抽濾、真空枯燥后得到淺灰色粉末狀結晶。2.2.3純化將灰白色結晶用乙醇、丙酮及乙醚反復洗滌，抽濾、真空枯燥后得到淺灰色粉末狀結晶。2.3多糖的驗證2.3.1多糖檢測反響取多糖粉末少許用蒸餾水溶解，取1l于試管中，再加10%-萘酚的乙醇溶液3滴，均勻混合，沿管壁加濃硫酸1l，使集于下層，在兩層交界面

9、有棕色環出現，證明此為多糖。轉貼于論文聯盟.ll.2.3.2水解取上述粉末20g置錐形瓶內，參加2lL的硫酸甲醇溶液2l，封口，置85水浴中水解24h，冷卻，用飽和Ba(H)2中和，離心，取上清液，減壓濃縮至干，待用。2.3.3單糖組分的紙色譜層析用微量點樣器分別取樣品水解液和標準葡萄糖液各45l，在紙色譜上點樣，置于展開筒中展開，展開系統為:正丁醇醋酸水(415)上層,自然風干后用鄰苯二甲酸苯胺顯色，樣品水解液出現4個棕色點，如圖1，其中有一個點與標準葡萄糖溶液的點Rf值一樣,說明樣品中確含多糖。2.4藥理實驗2.4.1動物分組取84只IR安康小鼠雌雄各半，隨機分為6組，分別為正常對照組、模

10、型組、陽性對照組，多糖低、中、高劑量給藥組(500，250，100g/kg)。2.4.2給藥實驗室適應性飼養7d后，瀏陽河酒灌胃0.5l/只。多糖高、中、低劑量給藥組分別按500，250，100g/kg灌胃提取的精制耳葉牛皮消ynanhuauriulatuRyleexight多糖溶液；陽性對照組按80g/kg灌胃護肝片溶液；正常對照組和模型對照組等體積生理鹽水灌胃，1次/d，2.0l/只，連續8d。第8天摘眼球取血別離血清6。2.4.3取血采用摘眼球取血方法，每只試驗用小鼠各取血1l于肝素潤洗過的1.5l中。2.4.4別離血清將離心管置高速離心機中3000r/in離心10in，用微量注射器提取

11、血清置肝素潤洗過的0.5l離心管中，置-30冷凍保存備用。2.4.5生化檢測按試劑盒說明測定谷草轉氨酶ALT，谷丙轉氨酶AST活性7。2.4.6統計學處理數據以s表示，用T檢驗來分析組間差異的顯著性。P0.05認為有統計學意義。3結果耳葉牛皮消多糖溶液對酒精引起小鼠急性肝損傷血清ALT，AST活性的影響。結果見表1。表1耳葉牛皮消多糖對酒精誘導的急性肝損傷小鼠血清中ALT，AST的影響略4討論多糖中、高劑量均可使小鼠酒精肝損傷血清ALT，AST升高的程度降低。模型對照組ALT，AST活性較正常對照組明顯升高(P0.01),說明酒精致小鼠肝損傷造模成功。多糖低劑量組與模型組對照比擬，P0.05,

12、不能說明有顯著差異,說明低劑量組對酒精性肝損傷有一定的保護作用，但作用效果不明顯。多糖中劑量組，高劑量組與模型組比擬，P0.01，有顯著差異，說明多糖中濃度(250g/l),高濃度(500g/l)均對酒精性肝損傷有很好的保護作用。高劑量組與陽性對照組比擬，P0.05,有差異，說明多糖高濃度(500g/l)具有與護肝片一樣的對酒精性肝損傷有很好的保護作用，甚至效果更好。實驗結果顯示，模型對照組ALT，AST活性顯著高于正常對照組，說明酒精誘導的急性肝損傷模型成功(P0.01)。多糖中劑量組，高劑量組與模型對照組比擬有顯著性差異P0.05,說明此劑量下的耳葉牛皮消多糖溶液能顯著降低由酒精引起急性肝

13、損傷小鼠血清ALT和AST活性的升高，且存在劑量效應關系。多糖高劑量組與陽性對照組比擬，效果差異不大，甚至可以說更好，具有很大的潛力，值得深化研究，必能成為更好的保肝護肝藥。雖然多糖高劑量組與中劑量組降低AST活性的效果相當，但他們降低ALT活性的效果卻有一定差距,多糖低劑量組對AST和ALT活性的降低有一定效果,但都不明顯。從這里可以看出，耳葉牛皮消多糖溶液的濃度與降低AST和ALT活性的效果之間有一定的聯絡，什么濃度效果最正確，其確切保肝作用機制還需要進一步研究。本次實驗從ALT，AST活性的角度入手，研究白首烏多糖溶液的保肝護肝作用，經實驗證明耳葉牛皮消多糖溶液具有保肝護肝的作用。【參考

14、文獻】1趙冰清，張為，周源，等.瑤藥白首烏的研究進程J.時珍國醫國藥，2022，17(3)：6882.2徐凌川，梁傳東，吳明燕，等.白首烏糖類的提取及含量測定J.山東中醫藥大學學報，2022，27(3)：215.3尹家樂，李心，張士俠，等.白首烏_(21)甾體酯苷對小鼠急性四氯化碳肝損傷的保護作用J.安徽醫藥，2022，11(3)：198.4angH，angQ，SrivastavaRKGngSS;etal.EffetsfttalglysidesfrBaishuunhuanbreastandprstateanerellprliferatinAlternJ.TherHealthed，2022，9(5):62.5LeeK,YeH，KiJ，etal.llegefpharay;SeulNatinalUniversity,KreaPrtetinfratnepatytesexps