1、黃芪多糖對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用【摘要】目的：研究黃芪多糖對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的治療保護作用。方法：利用線栓法阻斷大腦中動脈A制作大鼠局灶性缺血再灌注腦損傷模型，并將實驗大鼠隨機分假手術組，模型組，黃芪多糖低、中、高劑量組，于再灌后第1天、第3天、第7天處死取材，檢測各組大鼠腦組織含水量、超氧化物歧化酶SD、丙二醛DA變化情況，輔以氯化三苯四氮唑TT染色觀察腦梗死灶變化情況。結果：與假手術組比擬，模型組腦組織含水量及DA含量顯著升高，梗死灶體積顯著增大，SD值明顯降低；與模型組比擬，黃芪多糖各劑量組的腦含水量，DA含量顯著降低，SD值顯著增高，梗死范圍也明顯減校結論：黃芪

2、多糖可以通過降低腦組織含水量、DA程度，升高SD程度，對缺血腦損傷有一定的保護作用。【關鍵詞】黃芪多糖腦缺血再灌注損傷腦含水量SDDAPrtetiveEffetfAstragalusplysaharidenFalerebralIsheia-ReperfusinInjuryinRats【Abstrat】bjetive:TstudytheprtetiveeffetfAstragalusplysaharidenfalerebralisheia-reperfusininjuryinrats.ethds:Thedelsffalbrainisheia-reperfusininjuryaspreparedb

3、yiddleerebralarterylusin(A)inSD-rats.Theratsererandlydividedintshaperatinntrlgrup,delgrup,l,iddleandhighdsedruggrup,aftertreatentthebrainaterntentandthelevelfSD,DAereeasuredatthefirst,thirdandseventhdayafterreperfusin.TherangeferebralinflartasbservedbyTTdyEing.Resuit:parediththeshaperatinntrlgrup,th

4、ebrainaterntentandthelevelfDAeresignifiantlyhigher,andthelevelfSDassignifiantlylerindelgrup.ThebrainaterntentandthelevelfDAeresignifiantlyler,andthelevelfSDasbviuslyhigherinl,iddle,highdsegrupsthannesindelgrup.nlusin:PrtetiveeffetfAstragalusplysaharidenfalerebralisheia-reperfusininjuryinratsasrearda

5、blebyreduingthebrainaterntentandthelevelfDA,andinreasingthelevelfSD.【Keyrds】Astragalusplysaharide;erebralIsheia-ReperfusinInjury;SD;DA黃芪多糖Astragalusplysaharide,APES是從傳統中藥黃芪中提取的具有較強生物活性的大分子化合物，對造血系統、心血管系統、免疫系統、物質代謝系統以及保肝護腎、抗病毒、抗腫瘤、抗應激等多方面具有藥理學活性1。其對缺血腦損傷的影響作用，已經引起人們的重視。本實驗通過線栓法制備大鼠局灶性腦缺血A再灌損傷模型，研究黃芪多

6、糖對缺血腦損傷中腦組織含水量、SD、DA含量的影響。1材料與方法1.1材料1.1.1實驗動物SD大鼠，雌雄各半，體重250300g，購自安徽長臨河醫藥科技普通級。1.1.2藥品與試劑APES由博泰生物科技提供，純度95%；SD試劑盒批號：20220414，DA試劑盒批號：20220416，考馬斯亮蘭蛋白試劑盒批號：20220413均購自南京建成生物工程研究所；水合氯醛批號：20220613上海五聯化工廠；TTAres07/2022；直徑0.26魚線日本PATU公司。1.1.3儀器7200型紫外分光光度計尤尼柯上海儀器；冷凍離心機3K30siga；恒溫培養箱HPX-9272BE常州諾基儀器；玻璃

7、勻漿器上海儀器二廠。1.2方法1.2.1分組與給藥隨機分為5組，分別為假手術組；模型組：黃芪多糖孝中、大劑量組；每組19只，藥物組與手術后10分鐘腹腔注射黃芪多糖低0.5gkg1d1、中1gkg1d1、高2gkg1d1，由生理鹽水配置，之后每天同樣時間給藥，模型組和假手術組在相應時間注射等體積生理鹽水。分別與給藥1天處死7只，3、7天各處死6只。1.2.2大鼠A再灌注模型制作利用改進Lnga法23制作A模型：術前禁食12h但不禁水。大鼠以10%水合氯醛0.36l/100g腹腔注射麻醉，麻醉后仰臥固定，頸正中切口，依次別離暴露右側頸總動脈A、頸外動脈EA、頸內動脈IA、0-3號絲線分別結扎A遠心

8、端、EA，微型血管夾夾閉IA，在A處剪一小口，將頭端燒制圓鈍的魚線沿A插入IA，魚線插入18.520處感覺有明顯阻力后停頓進線，結扎IA，固定魚線，縫合肌肉、皮膚，體外留2魚線以備再灌。手術10in后腹腔注射黃芪多糖；缺血90ins后，輕輕拔出魚線至遇到細微阻力，實現再灌，剪去體外部分魚線，待大鼠完全清醒后進展神經行為學評分。假手術只別離A、IA、EA、腹腔注射等體積生理鹽水。1.2.3神經行為評分參考Lnga245分制評分標準：0分無神經缺損癥；1分提尾時對側前肢內收，不能完全伸直；2分爬行時向對側旋轉、劃圈；3分站立時向對側傾倒；4分無自主活動伴意識障礙；5分死亡。14分符合實驗要求，剔除

9、不符合實驗要求的并加以補充。1.2.4腦組織含水量、SD、DA的測定缺血再灌1天、3天、7天后分批處死迅速取腦，取右側半腦二分之一用于計算腦含水量變化，稱濕重于100烘箱內至恒重，腦含水量%=濕重干重/濕重100%。另二分之一制作腦勻漿，按照試劑盒說明書方法檢測SD、DA。1.2.5腦組織切片TT染色觀察配置1%TT磷酸緩沖液pH7.4；第一天處死的大鼠各組中取一只，迅速取腦放于20冰箱中冷凍15in，切去嗅球和地位腦干，間隔2連續冠狀切片6片，放入1%TT磷酸緩沖液37避光染色30ins，10%福爾馬林固定，拍照。1.3統計學處理數據以均數標準差xs表示，組間差異用SPSS統計軟件進展方差分

10、析。2結果2.1腦組織含水量變化含水量測定結果見表1。表1缺血再灌1天、3天和7天腦含水量變化情況注：VS假手術P0.01；VS模型組*P0.05，*P0.01。2.2各組大鼠腦組織SD、DA含量測定SD、DA含量測定結果見表2、表3。表2缺血再灌1天、3天和7天腦組織SD含量變化情況注：VS假手術P0.01；VS模型組*P0.05，*P0.01。表3缺血再灌1天、3天和7天腦組織DA含量變化情況注：VS假手術P0.01；VS模型組*P0.05，*P0.01。2.2大鼠腦組織切片TT染色結果轉貼于論文聯盟.ll.3討論與分析缺血性腦血管病是一種嚴重危害人類安康的疾病，缺血性腦血管病導致的偏癱及

11、認識功能障礙成為影響人類生存治療的最大保障，臨床上大腦中動脈閉塞導致的腦缺血堵塞占了缺血性腦血管病的絕大部分5，部分腦缺血模型一般采用A方法，因A模擬的病例過程與臨床腦卒中很相似，被普遍認為是局灶性腦缺血的標準動物模型67，故本實驗采用線栓法制備局灶性腦缺血損傷模型。腦缺血再灌注損傷機制非常復雜，有許多因素參與再灌注損傷過程，如自由基、興奮性神經遞質效應、細胞內鈣離子超載、一氧化氮、炎性介質損傷等89，目前認為自由基損傷在其中發揮著重要的作用1012。與腦缺血有關的自由基主要是氧自由基，自由基主要攻擊脂質膜中的不飽和脂肪酸的多個不飽和鏈，使之發生過氧化反響，導致質膜損傷，通透性增加，各種細胞器

12、解體，加重細胞毒性水腫13；DA作為氧自由基與生物膜不飽和脂肪酸發生脂質過氧化反響的代謝產物，其含量的變化間接地反響了腦組織中氧自由基含量的變化；SD是一種帶負電荷的金屬蛋白酶，它通過歧化的方式去除超氧陰離子自由基，腦缺血及再灌時產生過多的自由基，消耗了大量的SD，導致腦組織中含量下降1415。因此可以通過測定腦組織含水量、DA、SD變化，間接的反響腦組織中自由基含量及腦組織損傷程度。本實驗測定了各組實驗大鼠1、3、7天的腦組織含水量、SD、DA含量變化情況。由實驗結果可以看出，模型組的腦含水量、DA含量明顯高于假手術組，SD含量明顯低于假手術組；而各劑量藥物組腦組織的含水量、DA程度與模型組相比明顯有所降低，SD程度有明顯進步，尤其是中劑量和高劑量組有極顯著的變化。另外，TT染色可以很好的顯示損傷后腦組織的梗死狀況16，由TT染色結果也可以看出，APES治療組梗死范圍較模型組減少，中、高劑量組的梗死范圍較小劑量組明顯的減少。有文獻報道1718，局灶性缺血再灌注4872h時損傷程度到達頂峰。本實