1、 如何避免基線飄移？后使用新溶劑。 向下飄移通常是由于檢測(cè)室或柱箱中的溫度波和毛細(xì)管保溫隔熱。向下飄移也可能由于溶劑的純度不是HPLC 級(jí)別的溶劑而且此純度低的溶劑在紫外有吸收。如何減少基線噪音？處理以避免污染，并使用 HPLC 級(jí)別的溶劑。 連續(xù)噪音有可能由檢測(cè)器或泵造成。要確定問題是否發(fā)生在檢測(cè)器還是在泵， ChemStation 在線診斷或 LC 手持控制器檢倫科技公司聯(lián)系。在中國，請(qǐng)撥打 800 820 3278。什么原因?qū)е禄€毛刺？這很有可能是流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。請(qǐng)先停泵來進(jìn)行確認(rèn)如果毛剌 800 8203278。什么原因?qū)е禄€波動(dòng)？及濕度穩(wěn)定，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)

2、管進(jìn)行隔熱保溫。我的色譜圖上的峰有拖尾現(xiàn)象。如何改善峰形？可能的原因： 1. 系統(tǒng)內(nèi)的死體積大2. 樣品在色譜柱上有吸附3. 色譜柱適用時(shí)間很長(zhǎng)建議用戶： 1. 盡量減少流動(dòng)相管線的死體積，確保管線接頭的圈有可能不一樣，盡量使用安捷倫公司的管線接頭和密封墊圈。2. 使用洗脫更強(qiáng)的流動(dòng)相3. 更換新色譜柱如何排除流動(dòng)相中的氣泡？如何排出流動(dòng)池中的氣泡？避免流動(dòng)相中產(chǎn)生氣泡的最佳方式是將流動(dòng)相經(jīng)脫氣裝置進(jìn)行脫氣。如果沒有脫氣裝置，則可以在流動(dòng)相溶劑瓶中通入氦氣進(jìn)的背壓，但必須注意不要超過流動(dòng)池的最大壓力，否則會(huì)造成流動(dòng)池漏液或流動(dòng)池?fù)p壞。 如果流動(dòng)池中出現(xiàn)氣泡，則先摘下色譜柱，用一根管線直接將流動(dòng)

3、相接入檢測(cè)器的入口。將異丙醇以較大的流速注入流動(dòng)池。 直到基線上看不到毛刺為止。氣泡就應(yīng)該清除掉了。把甲苯（）用作衡量 GPC色譜柱效率的標(biāo)準(zhǔn)是否恰當(dāng)？ GPC 色譜柱填料的所有細(xì)孔中。填充效果如何。 這些是衡量效率時(shí)需要了解的內(nèi)容。大多數(shù)制造商通常推薦用這個(gè)樣品來實(shí)驗(yàn)這些色譜柱的效率。還能通過其它標(biāo)準(zhǔn)來確定 GPC 色譜柱的其它特征，例如排斥體積。HPLC 色譜中的峰板（peak plate）有什么作用？peak ）可以讓您比較不同色譜柱的效率，衡量方法是對(duì)比色譜圖中的峰寬和保留的峰寬。 一般而言，對(duì)于相同的保留時(shí)間，峰越窄，色譜柱的效率越高，效率越高，色譜柱peak ）。 HPLC 儀器一

4、般通過測(cè)量峰寬（通常是半高）來確定色譜板或效率，采用的公式如下：N = efficiency = plates = 5.54(tR/w1/2)2w1/2 = peak width at half-height in min.tR = retention time in min.色譜柱制造商會(huì)提供色譜柱的效率，通常包含在色譜柱報(bào)告中。有關(guān)色譜板和色譜柱效率與分離度和被分析物之間關(guān)系的詳細(xì) Practical HPLC Method Development 微粒 HPLC 方法開發(fā)），作者是 Lloyd R. Snyder、Joseph J. Kirkland和 Joseph L. ， Wiley

5、-Interscience 1997年。HPLC 中為什么會(huì)出現(xiàn)有節(jié)奏的波浪狀基線？這通常不是色譜柱的問題。 最可能的原因是泵系統(tǒng)出了故障。a) 通常您的泵會(huì)有兩個(gè)活塞和密封圈。 其中一個(gè)密封圈可能比另一個(gè)磨損得更厲害，這會(huì)導(dǎo)致流速和壓力發(fā)生非常有節(jié)奏的變化，檢測(cè)器同樣能看到這個(gè)變化。 通過改變流速，可以確認(rèn)泵密封圈是否已磨損。 如果泵密封圈已磨損，基線波動(dòng)頻率（以時(shí)間為單位）會(huì)與流速的增加降低成比例。 解決方法就是更換泵密封圈。b) 如果您有多個(gè)泵系統(tǒng)（二元、三元或者四元），那么可能是泵密封圈出了問題，但也可能是混合不充分或比例閥出了故障。建議）， 比例閥出故障的話就呼叫維修中心。足以證明泵

6、出了故障。 通過上面介紹的流速實(shí)驗(yàn)可以確認(rèn)是否泵出現(xiàn)故障。 如果流速變化時(shí)，信號(hào)波動(dòng)頻率（以時(shí)間為單位）沒有發(fā)生變化，那么可能是泵出了故障。什么時(shí)候會(huì)看到伸舌峰（peak ）？ 如何排除故障？伸舌峰（peak ）可能由多種情況引起。 最有可能導(dǎo)致peak 在這種情況下，通常會(huì)發(fā)現(xiàn)峰保留時(shí)間稍稍縮短。 這也是最簡(jiǎn)單的檢查方法，因?yàn)橹灰⑸渖倭繕悠凡z查峰形就能發(fā)現(xiàn)問題。但是至少還有其它四種原因?qū)е律焐喾澹╬eak ）。 這四種原因分別是色譜柱溝流、被分析物和硅之間的離子干擾、被分析物在流動(dòng)相中溶解性差以及流動(dòng)相和鍵合相之間的濕潤(rùn)性問題。 色譜柱溝流會(huì)導(dǎo)致所有的峰都變?yōu)樯焐喾澹╬eak ），或者至

7、少讓色譜圖中最大的峰變成伸舌峰（peak ）（如果其它峰過于小的話）。 如果出現(xiàn)這種問題，需要更換色譜柱。 用一根新色譜柱來研究這個(gè)問題。增加緩沖液離子強(qiáng)度或者改變流動(dòng)相的 pH值，通常能改善引發(fā)伸舌峰（peak ）的離子相互作用。 增加離子強(qiáng)度能夠降低硅和離子被分析物之間的相互作用，而改變 pH值能起到同樣的效果。需要評(píng)定溶解性，盡力提高被分析物的溶解性并評(píng)估最后的色譜圖。 例如，可以增加樣品的聲處理時(shí)間并把它重新注入或者讓它溶解在溶劑中（在該溶劑中樣品具有很好的溶解性），然后稀釋并注入流動(dòng)相。 此外，所有懷疑出現(xiàn)溶解性問題的樣品都應(yīng)進(jìn)行過濾。 還可以通過脫機(jī)方式混合樣品和流動(dòng)相，觀察在流動(dòng)

8、相中是否明顯溶解。濕潤(rùn)性是指流動(dòng)相完全滲透鍵合相的能力，在這種情況下，被分析物能與所有的鍵合相發(fā)生相互作用。 如果 C18 色譜柱結(jié)合使用高度水性的流動(dòng)相，可能不會(huì)到達(dá)完全的濕潤(rùn)性。 鍵合相會(huì)自己折疊起來。 結(jié)果就可能會(huì)丟失保留時(shí)間并導(dǎo)致峰變形。 如果可能的話，增加流動(dòng)相中的有機(jī)量并重新評(píng)估峰形。 否則，您可能需要考慮選擇專門為極高水性流動(dòng)相而設(shè)計(jì)的色譜柱。這些是導(dǎo)致伸舌峰（peak ）的主要原因及其解決方法。請(qǐng)注意，這些問題可能會(huì)導(dǎo)致峰拖尾，解決方法與伸舌峰（peak ）的解決方法相同。HPLC 樣品過濾得最好的膜過濾器是什么?再生纖維素 過濾器時(shí)推薦的 HPLC樣品過濾器，因?yàn)檫@種過濾器提

9、供能防止樣品過濾問題的單一、近乎通用的膜過濾方法.安捷倫的再生纖維素注射器過濾器產(chǎn)品有如下很多優(yōu)點(diǎn)的回收率.2. 提供一種類型的過濾器取代多種濾膜的方法效率不降低.3. 對(duì)于生物樣品，在流行的示售膜中安捷倫的膜過濾器具有最低的蛋白鍵合性能.4. 經(jīng)過 HPLC 分析驗(yàn)證，具有低的可萃取性，包含一份分析證明.如何選擇液相色譜保護(hù)柱？保護(hù)柱的作用是用來防止分析柱被一些微粒物質(zhì)堵塞及在色譜分析柱不出現(xiàn)不必要的峰展寬，保護(hù)柱與分析柱的體積比應(yīng)在1:15 至 1:25 之間。 在理想的情況下，保護(hù)柱的填料應(yīng)與分析柱相同，以確保得到分析柱較好的色譜圖。盡量使保護(hù)柱與分析柱近似。在我們的目錄里，將分析柱和與

10、其配套的保護(hù)柱列在一起。色譜圖上出現(xiàn)鬼峰。如何消除？可能的原因： 1. 上次進(jìn)樣遺留組分產(chǎn)生2. 有污染3. 有氣泡4. 色譜柱問題5. 保護(hù)柱失效建議用戶： 1. 做樣品后應(yīng)保證有足夠時(shí)間沖洗色譜柱的話在運(yùn)行結(jié)束后使用更強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。2. 洗脫原色譜柱中的原有污染。3. 為確保系統(tǒng)中沒有氣泡，只使用徹底脫氣后的溶劑。4. 更換色譜柱。5. 更換保護(hù)柱。6. 檢查流動(dòng)相純度。7. 檢查樣品中的其他成分。為什么 HPLC分析的樣品要過濾?1. 樣品過濾保護(hù)您的色譜柱, 特別是新的 5微米以下粒徑填料的色譜柱, 毛細(xì)管柱和柱入口篩板, 以防止樣品中的顆粒物堵塞色譜柱. 延長(zhǎng)柱壽命.它防止您的進(jìn)

11、樣閥組件被樣品顆粒物損壞、刻劃或增加磨損.最小化儀器的停機(jī)時(shí)間.怎樣知道液相分離對(duì)流動(dòng)相的 pH值敏感？測(cè)試方法對(duì)流動(dòng)相 pH值變化的靈敏度。不是所有的組分，也不是所有的方法對(duì)流動(dòng)相的 pH值敏感。中性組分的保留不受流動(dòng)相 pH值的影響。然而，離子化的組分的保留堿性的和酸性的組分在 pH值變化時(shí)明顯地變化。堿性組分的保留變化最明顯，pH值超過 5化在 pH值 3到 5之間。因此，如果有堿或酸性組分，則建立一個(gè)健全的方法，需要在幾個(gè)不同的 pH值之間，分別作出評(píng)價(jià)。在保持所有其它條件不變時(shí)，改變流動(dòng)相的 pH值，并且測(cè)試對(duì)分離的影響。如何減小方法對(duì) pH值敏感的復(fù)制問題？1. 嘗試在低的 pH,

12、 如果你正在分離堿性組分，使流動(dòng)相的 pH值低于 3，此時(shí)因 pH值的小的變化，其保留受影響很小。通常要使分離不敏感，改變流動(dòng)相 pH值時(shí)，至少不超過分析物的 pKa 的 1個(gè) pH單位。2. 選擇流動(dòng)相 pH沖液的 pH pH值相匹配。 也就是說，使用適當(dāng)含量的緩沖液，通常為 25到 50 mM, 具有良好的緩沖能力。3. 動(dòng)相的 pH值。例如反相 HPLC色譜柱的推薦再生步驟是什么？1. 取下色譜柱，然后重新連接到色譜儀上，讓液體氣體反方向流過色譜柱。2. 用 HPLC 級(jí)水沖洗掉鹽緩沖液。 以 1毫升分鐘的速度把 25 毫升水泵入色譜柱。3. 用 25 毫升異丙醇沖洗色譜柱。4. 用 2

13、5 毫升二氯甲烷沖洗色譜柱。5. 用 25 毫升正己烷沖洗色譜柱。6. 再次用 25毫升二氯甲烷沖洗色譜柱。7. 用 25毫升異丙醇沖洗色譜柱。8. 按正確的流動(dòng)方向，把色譜柱重新連接到色譜上。 用不含緩沖液的流動(dòng)相沖洗色譜柱，然后重新倒入緩沖液。9. 用 25 到 50 毫升流動(dòng)相平衡色譜柱。10. 注入標(biāo)準(zhǔn)物或樣品，檢查性能是否恢復(fù)。注釋： 對(duì)于某些污染色譜柱的殘留化合物，二甲基甲酰胺正相 HPLC 色譜柱的推薦再生步驟是什么？1. 按相反的流動(dòng)方向，把色譜柱連接到色譜上。2. 用 50毫升 50:50 甲醇：氯仿（methanol:chloroform）溶液沖洗色譜柱。3. 用 50毫升

14、乙酸乙酯（ethyl acetate）沖洗色譜柱。4. 按正確的流動(dòng)方向，把色譜柱重新連接到色譜上。5. 用 50 毫升流動(dòng)相平衡色譜柱。6. 注入標(biāo)準(zhǔn)物或樣品，檢查性能是否恢復(fù)。小心： 總的來說，在考慮更換濾頭之前，用適當(dāng)?shù)娜軇┣鍧嵑头礇_ HPLC色譜柱值得一試。 總是存在這樣的風(fēng)險(xiǎn)，就是更換此 0.5?m串聯(lián)過濾器捕獲微粒材料并且使用適當(dāng)?shù)膹?qiáng)溶劑來清洗色譜柱。如何正確清潔 GPC HPLC 色譜柱（安全的方法）？一的推薦流速進(jìn)行沖洗（讓壓力保持在推薦最大值以下）。 首先，選擇一種可以溶解色譜柱中污染物的溶劑。 大多數(shù) GPC 色譜柱是 PS-DVB 兼容性。 與常規(guī)洗提溶劑相比，許多清潔溶

15、劑具有較高的黏性，因此必須采用較低的流速并且需要特別注意壓力。陰離子樣品能吸附到 PS-DVB 上，如果這些樣品污染了您的GPC色譜柱，那么建議您使用含鹽的清潔溶劑。 查看這種色譜柱適合使用哪類鹽。 在某些情況下，根據(jù)吸附材料的極性，清醋酸）或堿性物（三羥乙基胺）（檢查 pH范圍）或一些水改性后的有機(jī)溶劑。 如果更多的疏水性材料被保留，推薦提高溫度并使用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑。 您需要再一次核對(duì)色譜柱允許的最大溫度范圍。如果仔細(xì)地進(jìn)行清洗，色譜柱不會(huì)因?yàn)槿軇┺D(zhuǎn)換而導(dǎo)致性能下降。哪類色譜柱會(huì)在高于 pH 7的酸堿度環(huán)境下溶解？市面上銷售的許多硅基 HPLC填料會(huì)在 pH 7 條件下溶解，因?yàn)楣钑?huì)在 pH

16、 7 條件下溶解。因此，安捷倫開發(fā)出一種技術(shù)，可以顯著降低硅溶解并且擴(kuò)展硅基色譜柱的可用 pH值范圍。ZORBAX Extend-C18 可以在高于 pH 8 （甚至高達(dá)pH ）的條件下使用。 雙齒鍵合是增強(qiáng)穩(wěn)定性的關(guān)鍵，同時(shí)確保只有硅才能提供的高效率。如何估計(jì)是否出現(xiàn)色譜柱塌陷？首選檢查您的方法并確定色譜柱的操作 pH值是否超過推薦標(biāo)色譜柱塌陷。此時(shí)需要考慮樣品注射溶劑以及流動(dòng)相。如果出現(xiàn)色譜柱塌陷，您會(huì)看到色譜圖中的每個(gè)峰值上，峰形都會(huì)發(fā)生變化（峰拖尾、加寬或分叉）。色譜柱塌陷通常不會(huì)只讓色譜圖中的一個(gè)峰值發(fā)生變化。此外，通常也不會(huì)導(dǎo)致分析物保留度發(fā)生變化。您還可以轉(zhuǎn)動(dòng)色譜柱，如果出現(xiàn)色譜

17、柱塌陷，那么峰形也應(yīng)發(fā)生變化。是排除色譜柱故障時(shí)最后才能采取的方法。如果色譜圖中的一個(gè)峰出現(xiàn)拖尾，但是其它峰正常，可能出現(xiàn)什么故障？由于我不了解樣品的化學(xué)性和有關(guān)流動(dòng)相或色譜柱的詳細(xì)情況，所以我很難回答這個(gè)問題。峰拖尾可能由多種原因引起，在回答您的問題之前，我想問您幾個(gè)有關(guān)樣品的問題。由于您色譜圖中大多數(shù)峰的形狀都是完好的，只有一個(gè)峰出現(xiàn)拖尾，我猜想色譜柱和樣品的化學(xué)性引起二次反應(yīng)，從而導(dǎo)致峰拖尾。更改流動(dòng)相或選擇另一個(gè) HPLC 色譜柱能夠減少這些二次反應(yīng)。能否用一些洗滌劑來清潔 HPLC色譜柱？不推薦用洗滌劑來清潔反相（）HPLC 色譜柱。 離子洗滌劑對(duì)試劑。如，C18 反相色譜柱柱的鍵合

18、相能牢固地保留洗滌劑的長(zhǎng)碳鏈), 因此很難清除洗滌劑。有些制造商說可以倒過來使用（較新的）色譜柱，這樣能去從色譜柱前面清除堵塞物？ 這是不是常規(guī)推薦方法？或者是否取決于色譜柱？HPLC 色譜柱比以前更有效并且填充得更好，因此，通常建議大多少倒相和正相硅基色譜柱采用這個(gè)方法。粒，但是并不是每次都起作用。 由于這不需要打開色譜柱，所以值得一試。塞色譜柱的微粒不會(huì)從 HPLC系統(tǒng)進(jìn)入，或者您可以把濾頭插到色譜柱的后端，但這可能無法再放回去。 還可以把色譜柱倒這樣做有一個(gè)好處，就是色譜柱的其余部分不會(huì)受污染物影響。在這個(gè)過程中，不要把色譜柱連接到檢測(cè)器上。H3PO4 清洗 HPLC 色譜柱有什么目的？

19、經(jīng)證明，磷酸洗滌劑能有效減少由于樣品與 HPLC系統(tǒng)中的金屬絡(luò)合而導(dǎo)致的拖尾。一般建議用 1% 磷酸來清洗系統(tǒng)和色譜柱，以此消除這種拖尾現(xiàn)象，這很有效。在安捷倫 ZORBAXStableBond 反相 HPLC 產(chǎn)品上使用這些推薦的清洗條件會(huì)取得非常理想的效果。StableBond HPLC 色譜柱在低 PH條件下性能非常穩(wěn)定 - SB-C18 色譜柱在 0.8 PH值和 90度條件下可N或 O原子上的孤對(duì)電子能否與金屬螯合并形成 5 或者 6元環(huán)。金屬絡(luò)合物是一個(gè)普遍被忽視的峰拖尾成因，每個(gè) HPLC系統(tǒng)中都存在金屬。能否提供一種與我使用的 LC 色譜柱相同的色譜柱？保留時(shí)間。雖然這里提供了

20、一些不同廠商的色譜柱的參考數(shù)據(jù)，提供以下信息：1. 分析物的詳細(xì)信息（樣品的成分和要分析的成分）；2. 是否可以接受液相色譜條件的改變；3. 能否對(duì)您的方法進(jìn)行一些調(diào)整。如果您不能接受分析條件和或保留時(shí)間的改變，則應(yīng)該繼續(xù)使用目前的色譜柱。如何選擇液相色譜保護(hù)柱？保護(hù)柱的作用是用來防止分析柱被一些微粒物質(zhì)堵塞及在色譜分析柱不出現(xiàn)不必要的峰展寬，保護(hù)柱與分析柱的體積比應(yīng)在1:15 至 1:25 之間。 在理想的情況下，保護(hù)柱的填料應(yīng)與分析柱相同，以確保得到分析柱較好的色譜圖。盡量使保護(hù)柱與分析柱近似。在我們的目錄里，將分析柱和與其配套的保護(hù)柱列在一起。改變填料顆粒大小和色譜柱的長(zhǎng)度對(duì)液相色譜分離

21、有什么影響？如果填料顆粒大小減半，則理論塔板數(shù)加倍（假設(shè)柱長(zhǎng)不變）。如果填料顆粒大小減半，則柱壓增加為原來的四倍。 如果柱長(zhǎng)著柱長(zhǎng)增加，柱壓也線性地增加。 以下是一個(gè)根據(jù)上述信息選擇色譜柱的示例： 一個(gè)裝填 10um 填料的長(zhǎng)度為 200mm 的色譜柱可生成 6000 塊理論塔板，這是在很多情況下能提供比較適當(dāng)?shù)姆蛛x的色譜柱效率。將顆粒大小由 10um 減小到5um 12000 成 12000 6000 10um 填料的長(zhǎng)度為 200mm 的色譜柱高兩倍。改變色譜柱直徑對(duì)液相色譜分析有什么影響？如果色譜柱直徑減半，則靈敏性增加四到五倍（假設(shè)進(jìn)樣量不 2.1mm 的色譜柱比進(jìn)樣到內(nèi)徑為 4.6m

22、m 的色譜柱所生成的峰高 5 倍左右。 只要線數(shù)均與色譜柱內(nèi)徑的減小無關(guān)。改變填料孔徑大小對(duì)液相色譜分離有什么影響？填料孔徑越小，允許的流動(dòng)相線速度越高。最佳流動(dòng)相線速度取決于固定相的顆粒大小。在最佳線速度時(shí)，色譜柱生成的理論塔 4.6mm 10um 的顆粒流動(dòng)相線速度為 0.75ml/min 或 5um 的顆粒流動(dòng)相線速度為1.5ml/min 時(shí)，塔板數(shù)最多。什么原因?qū)е轮Вɡ碚撍鍞?shù)）下降？與色譜柱有關(guān)的原因：色譜柱出現(xiàn)間斷 使用類似的填料填充空隙或更換色譜柱保護(hù)柱無法再用 更換保護(hù)柱其他可能的原因： 柱外體積大、進(jìn)樣的樣品量大、樣品溶劑強(qiáng)度比流動(dòng)相大、流動(dòng)相的改變。什么原因?qū)е乱合嗌V

23、分析的神秘峰？與色譜柱相關(guān)的原因：原因色譜柱污染 清洗或更換色譜柱保護(hù)柱失效 更換保護(hù)柱與色譜柱無關(guān)的原因： 流動(dòng)相不純、樣品里有其他成分、系統(tǒng)里有氣泡、電路問題。如何避免峰拖尾和峰分叉？與色譜柱相關(guān)的原因：色譜柱填料有問題 反沖色譜柱或更換進(jìn)樣口過濾片色譜柱出現(xiàn)間斷 更換色譜柱或填充空隙保護(hù)柱失效樣品分布差改進(jìn)色譜柱進(jìn)樣口的設(shè)計(jì)與色譜柱無關(guān)的原因： 超柱體積過大、樣品過量、流動(dòng)相組分（添加劑、pH值、緩沖濃度）改變。當(dāng)購買開更新不同批號(hào)的色譜柱后如何對(duì)分析方法進(jìn)行測(cè)試并確認(rèn)可用此柱？通常在條形碼的下面。批號(hào)通常以字母B頭，后面是 5 位阿拉伯?dāng)?shù)字。例如，下面示例中的色譜柱批號(hào)為 B99091

24、。 如果找不到包裝盒，則查看色譜柱標(biāo)簽上的序列號(hào)。要從序列號(hào)來確 HPLC 色譜柱技術(shù)支持的電話，號(hào)碼為 800-820-3278。他們會(huì)請(qǐng)公司生產(chǎn)部門來查詢批號(hào)，同時(shí)確定其它哪些批號(hào)的色譜柱可用。 獲得所需的批號(hào)或知道您的批號(hào)后，可使用以下步驟進(jìn)行訂購：1.2.通過安捷倫科技公司或首選的經(jīng)銷商進(jìn)行訂購。使用特殊的部件號(hào) 899999-888, 該號(hào)碼表示此訂單是專用色譜柱。3.括通用部件號(hào)。4.不能用。示例說明 部件號(hào) 899999-888 Eclipse XDB-C18 分析色譜柱，4.6mm x ，(963967-902) 除了批號(hào)為 B99091 和B99079 的專用色譜柱 用于方法

25、確認(rèn)目的的色譜柱StableBond SB-C8 和 Rx-C8 色譜柱有何不同？SB-C18 與Rx-C18 呢？StableBond SB-C8 與 Rx-C8 沒有什么區(qū)別。這兩種色譜柱是一樣的。Rx-C8 色譜柱首次將空間位阻保護(hù)鍵合到純羥基硅酸 pH 值較低生成的峰形較好。鍵合劑是二異丙基辛基硅烷。二異丙基化合物側(cè)鏈比較大，因此可以對(duì)鍵合相產(chǎn)生位阻保護(hù)以防止被酸水解?？臻g位阻保護(hù)的鍵合相不斷發(fā)展，逐漸形成了包含 SB-C18、SB-C8 SBSB-CN 和 SB-C3 眾所周知的 StableBond 系列色譜柱。為了保持一致性，將SB-C8 加入到此系列中，但是沒有取消 Rx-C8

26、，這主要是為了方便目前使用 Rx-C8 的用戶。什么原因?qū)е路聪?HPLC 的峰拖尾，應(yīng)采取什么措施？電荷的堿性化合物與帶負(fù)電荷的色譜柱表面硅羥基之間的離子交換。當(dāng)流動(dòng)相的 pH 值大于 4.5-5.0 時(shí)， 色譜柱表面的硅羥 pH 值小于 4 的緩沖流動(dòng)相。由于硅羥基的活性和離子化會(huì)降低，因此選擇更換新的高純羥基化硅膠色譜柱也會(huì)減少峰拖尾。ZORBAX 色譜柱中使用這類硅膠的有：StableBond 色譜柱、Eclipse XDB 色譜柱、Bonus-RP 和 Extend-C18 色譜柱。這StableBond(SB) 色譜柱在低 pH pH 值的 pH 值為 5-9 時(shí)，Eclipse

27、XDB色譜柱是減少峰拖尾的首選色譜柱。這類色譜柱有雙重封端，因此它可以通過覆蓋色譜柱表面上盡可能多的殘留硅羥基以消除 pH 值區(qū)，Bonus-RP 色譜柱也是一個(gè)減少峰拖尾的不錯(cuò)選擇。Bonus-RP形。這類色譜柱可以在 pH 值為 2-8 的條件下使用。Extend-C18 用于高 pH pH 值為 11.5 的條件 pH 羥基的相互作用減小，峰拖尾也減少。 認(rèn)真選擇流動(dòng)相也可以減少峰拖尾。緩沖流動(dòng)相 50 mM) 可減少峰拖尾，同時(shí)首選低 pH 值 (pH 3) 流動(dòng)相。這還會(huì)產(chǎn)生更多的可再生色譜。如果需要的話，可以添加一些流動(dòng)相添加劑如三乙胺 (TEA) 以減少堿性化合物的峰拖尾。TEA

28、 相當(dāng)于競(jìng)爭(zhēng)物，占據(jù)硅羥基的位置，用于消除分析物與殘留硅羥基間的相互作用。但在低 pH值時(shí)很少需要這類添加劑，僅在中間 pH 值時(shí)才偶爾需要。 如果遇到酸性化合物的峰拖尾，處理過程相同。降低流動(dòng)相的 pH離子強(qiáng)度。最后，可以通過向流動(dòng)相中加入競(jìng)爭(zhēng)的有機(jī)酸，我們已經(jīng)使用 0.1% 三氟乙酸 (TFA) 得到了比較好的結(jié)果，并且這酸性和堿性物質(zhì)的峰拖尾。 現(xiàn)在大多數(shù)色譜柱使用球形粒子，因?yàn)檫@種使用球形粒子填充的色譜柱具有更高的效率。因此，從選擇一個(gè)球形粒子色譜柱開始。分析分離最常用的粒子大小為5um，這是因?yàn)檫@種粒子比較容易使用，但現(xiàn)在更佳的選擇為3.5um 效率，可以在更短的分析時(shí)間內(nèi)進(jìn)行分離。

29、如果分析時(shí)間對(duì)于您很重要，則可以考慮選擇 ZORBAX 快速分析 (3.5um) 色譜柱以縮短分析時(shí)間。這個(gè) 4.6 x ，3.5um 的快速分析色譜柱與 4.6 x 250mm， 5um 間卻縮短 40%。如果想進(jìn)一步縮短分析時(shí)間，則還可以選擇其它時(shí)間更短的快速分析色譜柱（、30mm 和 寸小于 100 的色譜柱可以用于分析分子量小于 4000 的小分 300 的色譜柱進(jìn)行分析。另外，一些具有大的多環(huán)剛性結(jié)構(gòu)的小分子最好采用孔尺寸為 300 的色譜柱。選擇合適的孔尺寸非常重要，迅速地進(jìn)出孔時(shí)，才能獲得最佳的停留時(shí)間和峰寬。如何判斷是否需要保護(hù)柱呢？保護(hù)柱用作一個(gè)捕集器，捕集多種顆粒物及樣品和

30、 HPLC 系統(tǒng)本身帶來的強(qiáng)保留組分，它直接安裝在分析柱前面。使用保護(hù)柱是延長(zhǎng)分析柱壽命（有時(shí)能提高 3 倍）的比較劃算的途徑。尤其是分析生物或環(huán)境樣品時(shí)，建議使用保護(hù)柱。同時(shí)，當(dāng)分析藥物和農(nóng)用化學(xué)品活性成分、中間體樣品和配方樣品時(shí)，保護(hù)柱也是很有用的。 為了最大程度發(fā)揮保護(hù)柱的優(yōu)點(diǎn)，在保護(hù)柱過載保護(hù)柱更換頻率的向?qū)?，另?qǐng)參見此處。 然而，保護(hù)柱并不是不受填料、樣品、泵密封圈和進(jìn)樣器閥磨損污染。制備柱嵌入式過濾器應(yīng)安裝在保護(hù)柱前（如果沒有保護(hù)柱，直接安裝在分析柱前）。Agilent 出售一種死體積很低的嵌入式過濾器，它甚至可以用在快速分析 HT 1.8 微米色譜柱前，僅損失很少的性能。如何決定

31、何時(shí)更換保護(hù)柱？損時(shí)或樣品分析數(shù)量增加，而保護(hù)柱需要更換。 保護(hù)柱的更換頻率通常根據(jù)經(jīng)驗(yàn)而定，按照每個(gè)方法樣品類型綜合考慮，但是許多分析人員會(huì)在完成一定數(shù)量的樣品分析或測(cè)試一些柱的 10% 10% 的柱效（塔板數(shù)）后更換保護(hù)柱。HILIC 是怎樣工作的？HILIC 在二氧化硅方面的機(jī)理 極性分析物從吸附性含水涂層分配進(jìn)去又分離出來。 硅烷組分作正離子交換 取決于 pH 值 ) 這些機(jī)理相結(jié)合建立起增強(qiáng)了的極性保留。 任何這些機(jī)理的缺失將使得沒有極性保留。 如果發(fā)貨時(shí)含有的溶劑被更換，Agilent標(biāo)準(zhǔn)的Zorbax 柱可以用于 HILIC 應(yīng)用。 從非極性的 Heptane 到極性更強(qiáng)的溶劑都

32、可用于 HILIC 應(yīng)用。 可能使用的如何清潔 C4 HPLC 色譜柱？與 RP 相色譜柱差不多，如果您使用標(biāo)準(zhǔn)流動(dòng)相條件來分離小分子，我再介紹一些常規(guī)使用說明。 如果分離肽和蛋白質(zhì)，或處。什么是 HILIC? HILIC 即為親水性色譜，于 1990 年從標(biāo)準(zhǔn)的正相色譜中分離出來，成為一個(gè)術(shù)語(Alpert J.Chromatography, 499 (1990)177-196) HILIC是正相色譜的一種變種。 對(duì)極性很大的物質(zhì)比反向柱提供了更大的保留。 固定相是一種極性材料，如二氧化硅，cyano, amino, diol,等。 流動(dòng)相是含有少量的水成物極性溶劑的有機(jī)溶劑。 極性溶劑象

33、Acetonitrile, alcohols, water) 提供填充較短的大口徑（7毫米）色譜柱是否能降低柱外體積？只要您愿意在較高的流速下進(jìn)行操作。如果以 1.0 毫升分鐘的速度在 4.6 2.3 毫升/分鐘的速度可獲得與使用 7.0 毫米直徑色譜柱相同的線速度。溶劑廢液可能成為一個(gè)問題。高分離色譜柱比 5 色譜柱更容易發(fā)生故障。 這是不是真的？不，這種說法不正確。高分離色譜柱 與 5 和 250 mm 色譜柱一樣耐用。 使用小微粒容易發(fā)生色譜柱故障主要由兩個(gè)原因引起。 但是在色譜柱頂部使用標(biāo)準(zhǔn)的 2 m濾頭時(shí)，情況并非如此。 由于仔細(xì)控制微粒大小和使用 3.5 m 微粒，ZORBAX 高

34、分離度色譜柱不會(huì)包含任何 2 m小的微粒。 這意味著，可以在色譜柱上使用標(biāo)準(zhǔn)濾頭，這樣高分離度色譜柱就不會(huì)比 5 m 微粒色譜柱更容易發(fā)生堵塞。從而引發(fā)峰加寬和脫尾。 確實(shí)，3.5 m 微粒色譜柱比 5 m 色譜柱的操作壓力稍高，但是 ZORBAX 微粒足以經(jīng)受住這些增加的壓力。 ZORBAX 微粒在 psi 下填充，在常規(guī)使用中能夠經(jīng)受高達(dá) 5000 psi 的壓力。 高分離度 4.6 x 150 3.5 m 色譜柱通常在低于3000 psi的條件下操作，因此在使用 ZORBAX高分離度色譜柱時(shí)，柱床不會(huì)壓縮。因此，在使用高分離度色譜柱時(shí) ，神奇的 ZORBAX微粒和標(biāo)準(zhǔn) 2 m 色譜柱濾頭

35、可確保較長(zhǎng)的色譜柱使用壽命。步縮短分析時(shí)間。是否可以通過某種普通的色譜柱實(shí)驗(yàn)來跟蹤 HPLC色譜柱的性能？應(yīng)該多長(zhǎng)時(shí)間執(zhí)行一次這種實(shí)驗(yàn)？ HPLC色譜柱配套提供的 QC測(cè)試。 通過對(duì)比樣品中峰的效率、保留譜柱的性能是否發(fā)生變化。 這些實(shí)驗(yàn)還能告訴您色譜柱的哪些性能發(fā)生變化，因?yàn)槲覀冇孟嗤姆椒▉碓\斷色譜柱故障。 保留時(shí)間出現(xiàn)明顯變化表明鍵合相丟失，峰寬效率和壓力出現(xiàn)明顯變化表明色譜柱受污染。 峰寬和效率急劇減少表明色譜柱塌陷。大多數(shù)制造商采用類似的溶質(zhì)和流動(dòng)相實(shí)驗(yàn)條件來對(duì)他們的色譜柱進(jìn)行 QC實(shí)驗(yàn)。 然而，不同的鍵合相需要改變有機(jī)改性劑的用量，以便獲得適當(dāng)?shù)谋Ａ魰r(shí)間。 QC應(yīng)用于特定的項(xiàng)目。

36、這樣您就能了解色譜柱在系統(tǒng)上的性能，然后再開始注射樣品，這樣能避免發(fā)生問題。 如果出現(xiàn)問題，利用這個(gè) QC實(shí)驗(yàn)來檢查 HPLC系統(tǒng)和色譜柱是否運(yùn)行良好。不再使用色譜柱時(shí)，清洗色譜柱并進(jìn)行 QC實(shí)驗(yàn)。 不管出于何該先對(duì)色譜柱進(jìn)行 QC實(shí)驗(yàn)，然后再注射樣品。能否把安捷倫 1100 系列 HPLC系統(tǒng)應(yīng)用于交替柱再生？可以。 您需要升級(jí)套件 - 2PS/10PT 閥套件（零件號(hào)G1316-68709 或者 G1316A 選項(xiàng)#057），以便升級(jí)現(xiàn)有的自 G1316A自動(dòng)調(diào)溫柱室和應(yīng)用于交替柱再生的 2PS/10PT閥。該套件包含：2PS/10PT 閥 0101-1343 毛細(xì)管套件 G1316-68711 技術(shù)注釋：除了該套件之外，還需要安裝： - G1316A 模塊固件版本 A.05.04 或以上版本 - 化學(xué)工作站軟件 A.9.03 或以上版本（例如 G1656A 化學(xué)工作站軟件升級(jí)版）。有關(guān)詳情，請(qǐng)參考附帶文件。如何為 HPLC 分離制備緩沖液？配制緩沖液：把鹽溶解在 1或