1、祝大家工作順利！ 性病實驗室檢測診斷與臨床解釋 鄒平縣人民醫院檢驗科牛磊內容剛要問題及背景性病實驗室檢測性病實驗室質量管理歷史上的梅毒患者 歷史上的梅毒患者 貝多芬、舒伯特、瑪麗塔德、波特萊爾、林肯、福樓拜、莫泊桑、凡高、尼采、王爾德、凱倫、布里森、喬伊斯、希特勒、列寧、斯大林、馬丁路德.每小時一個梅毒寶寶？案例聚焦目前我國監測五種性病梅毒概述梅毒概述梅毒分期獲得性梅毒（后天梅毒）胎傳性梅毒（先天梅毒）早期梅毒病程2年早期先天梅毒病程2年1一期梅毒2二期梅毒3早期潛伏梅毒1三期皮膚黏膜骨骼梅毒 2心血管，神經，晚期潛伏期梅毒1三期皮膚黏膜骨骼梅毒 2心血管，神經，潛伏期梅毒一期梅毒梅毒螺旋體皮

2、膚或粘膜局部繁殖淋巴管附近淋巴結梅毒病原學檢測暗視野顯微鏡核酸檢測局部無任何癥狀潛伏期平均4周入侵局部炎癥反應初瘡（硬下疳）一期梅毒不治療4-5周自然消失進去一期潛伏期14-40天平均4周二 期 梅 毒梅毒螺旋體血液人體免疫作用大部分螺旋體被殺死其余繁殖6到8周低熱，淺表淋巴結腫大皮膚粘膜疹骨骼，眼睛，神經系統炎癥癥狀不治療癥狀可自然消失，呈現潛伏狀態二期潛伏梅毒梅毒血清學檢測:特異性抗體檢測非特異性抗體檢測梅毒病原學檢測暗視野鏡檢核酸檢測獲得性梅毒的自然病程感染梅毒 螺旋體2-4 周一期梅毒二期梅毒1-3月1-3 月潛伏梅毒2到50年終身潛伏 65%三期梅毒 35%各期梅毒取材部位及檢測方法

3、梅毒的免疫性梅毒實驗室檢測項目及臨床意義病原學檢測病原學檢測的臨床意義常用梅毒實驗室檢測方法血清學檢測非特異非 梅毒螺旋體特異性抗原實驗非 梅毒螺旋體抗體實驗抗 心磷脂抗體 實驗（反應素）TRUST 、 RPR 、 VDRL試劑組成：卵磷脂，心磷脂，膽固醇現癥患者特異梅毒 螺旋體特異性抗原實驗梅毒 螺旋體抗體實驗抗 螺旋體抗體 實驗TP- - RT 、 ELISA 、 CLIA 、 TPPA 、 FTA ABS 、 WB 等試劑組成：梅毒螺旋體或其成分梅毒患者非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點非特異快速血漿反應素環狀卡片試驗 (RPR) 黑 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST） 紅性病研究實驗室試

4、驗 (VDRL) 神經梅毒實驗模擬窗口期前帶現象生物學假陽性血清固定非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理非梅毒螺旋體抗原血清學試驗操作要點在卡片的一個圓圈內加入50ul血清，同樣加入陽性及陰性對照儀器： 水平旋轉儀轉速？轉幅？定性試驗 加 試劑量1 滴= = ？ ul水平 旋轉儀旋轉時間？28用小棒將血清和對照均勻涂開鋪散蓋滿整個圓環的表面，注意不能溢出圈外，試劑室溫預溫30分鐘，將抗原輕輕搖勻，吸取17ul抗原液加到每一個圓圈。非梅毒螺旋體抗原血清學試驗操作要點定性試驗（TRUST為例）（1）反應：將卡片置水平旋轉儀上，轉速：1002 r/min，轉幅2cm，旋轉8分

5、鐘（2）在亮光下用肉眼觀察結果滴度相差兩個滴度才有臨床意義切勿使用振蕩器非梅毒螺旋體抗原血清學試驗操作要點非梅毒螺旋體抗原血清學試驗操作要點1.根據需要確定稀釋度，1:1（原血）,1:2,1:4順延，在反應板的每個圓環上加上1滴50ul0.9%的生理鹽水，勿將鹽水涂開2在第一個圓環內加入50ul血清，用加樣槍來回吸放5-6次（避免氣泡形成），然后將混合液50ul加入第二個圓環，重復操作至需要稀釋度,最后一個圓環中50ul混合液棄去3.從最高稀釋度開始，將不同稀釋度的標本均勻涂布整個圈內，不同患者血樣的混合棒不能混用，4.在每個圓圈內加入恢復至室溫的輕輕混勻的抗原17ul非梅毒螺旋體抗原血清學試

6、驗操作要點*定量試驗-定量試驗血清稀釋不需要使用試管,定量試驗原倍血清滴度為1:1非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義隱性梅毒一般滴度1:8但不排除1 :8非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點TPPA 陽性TRUST 原倍陰性需稀釋排除前帶反應非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點非梅毒螺旋體抗原血清學試驗特點梅毒螺旋體抗原血清學檢測特異梅毒免疫層析法快速檢測 (RT) TP重組抗原梅毒酶聯免疫吸附試驗（ （ELISA） ） TP重組抗原發光免疫分析法（ （CLIA） ） TP重組抗原梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA) 金標準 TP熒光螺旋體抗體吸

7、收試驗（ （FTA-ABS） ） TP梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（ （WB） ） TP梅毒IgM抗體檢測 抗體檢測（ （IgM） ） 早期TP先天TP神經TP梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理TPPA TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結合，產生可見的凝集反應，具有較高的敏感性和特異性 試劑抗原：nichols株精制菌體成分 TPPA是目前WHO公認的梅毒抗原血清學試驗的“金標準”，常用于新方法、新試劑的參照標準FTA-ABS試驗以完整形態的Nichol 梅毒螺旋體作為抗原，加上經吸收劑（用Reiter 株螺旋體制備而成）處理過的患者血清形成抗原抗體復合物，再加入熒光素（F

8、ITC）標記的抗人免疫球蛋白，與血清梅毒螺旋體抗體結合。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯示蘋果綠色的熒光，即為陽性反應。梅毒螺旋體表面抗原、類屬抗原與非致病性密螺旋體間有交叉反應，吸收劑可排除影響。FTA-ABS試驗是檢測梅毒的經典“金標準”試驗。唯一排除了其他螺旋體干擾的實驗操作繁瑣，成本高，不適用于常規實驗室TPELISA試驗原理TPELISA試驗是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標記物，形成抗原抗體復合物與酶標記物結合，用酶聯檢測儀判定試驗陽性反應。本法可用于大樣本血清檢測。試劑抗原： TP基因重組抗原TP17、47、15、42.5分區抗原 不能區分IgG與IgM抗體

9、，導致它們檢測敏感性增加。化學發光法的臨床應用基本同ELISATP-RT 試 驗 原 理以硝酸纖維素膜為載體，將重組的梅毒螺旋體抗原固定在膜上，待檢標本（如血清）與標記的特異性抗原結合并沿著固相載體遷移，并顯示出有色條帶。本法快速、簡便；可疑結果可用TPPA或其他方法進行重復試驗。梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義梅毒螺旋體抗原血清學實驗特點梅毒螺旋體抗原血清學實驗特點 HIV感染者的梅毒血清學檢測在HIV感染的早期，機體免疫力尚正常，由于激活了B細胞使反應性增強，梅毒非特異性抗體滴度往往增高，甚至出現假陽性反應。在HIV感染的晚期，由于機體免疫力明顯下降，梅毒患

10、者的非特異性抗體可呈陰性（假陰性）。感染HIV的梅毒患者治療后非梅毒螺旋體試驗滴度下降比較慢。梅毒螺旋體抗原血清學檢測梅毒血清學試驗結果解釋 （梅毒臨床診斷參考依據）先天（胎傳）梅毒的實驗室診斷依據梅毒 IgM抗體（ TP- IgM）梅毒實驗室檢測方法梅毒實驗室檢測策略過去: 必須RPR 初篩試驗 TPPA 確證試驗現在 : 可選 TP- - RT 初篩實驗 RPR 確證實驗非梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗排除試驗假陽性確證梅毒螺旋體現癥感染排除治愈的既往感染者確證梅毒螺旋體現癥感染策略1 ：采用非梅毒螺旋體抗原血清實驗初篩淋球菌的實驗室檢測淋球菌概述菌株保存2004年 2013年全省