1、張泓，主任技師，碩士研究生導師。中國婦幼協會臨床實驗與診斷分會常委、中國醫學裝備協會POCT分會常委、中國婦幼協會臨床實驗與診斷分會臨床檢驗專委會副主任委員、中華醫學會兒科分會臨檢學組委員、上海醫學會檢驗醫學分會委員兼臨床微生物學組組長、上海醫師協會檢驗醫師分會委員、上?？咕幬锖侠響门c管理專家委員會委員、上海醫學會感染與化療分會委員、上海中醫藥協會檢驗分會常委、雜志編委，雜志編委。上海交通大學附屬兒童醫院檢驗科主任。研究方向：感染性疾病病原學診斷，細菌耐藥機制和抗菌藥物的合理應用。2022/8/20張 泓上海市兒童醫院感染性疾病診斷技術新進展感染性疾?。喝蚬餐奶魬?016年，5歲以下兒

2、童死亡的三大主要原因是呼吸道感染、新生兒早產并發癥以及新生兒因出生窒息和創傷而導致的新生兒腦病，總共導致了1億8千萬人死亡在全球范圍內，2016年死亡率的前五大原因主要是心血管疾病;腹瀉、下呼吸道感染和其他常見感染性疾病;腫瘤;新生兒疾病;HIV/艾滋病和肺結核GBD2016 Causes of Death Collaborators. Lancet. 2017; 39(1000): 11511-1210.血流感染發展迅速，死亡率高院內死亡率達16%，比其他診斷的死亡率高8倍以上住院時間延長，住院費用高1990年-2003年間，敗血癥相關住院時間增長了153%，年均增長6%感染性疾病嚴重感染導

3、致住院時間延長AHRQ, Center for Delivery, Organization, and Markets, Healthcare Cost and Utilization Project, Nationwide Inpatient Sample, 1993-2009 感染性疾病增加耐藥菌感染的抗菌藥物治療花費傳統臨床微生物檢測傳統微生物檢測方法：分離培養+抗原抗體檢測+普通PCR檢測缺點：細菌無法生長（應用抗生素后）病毒、真菌、寄生蟲難以培養多種細菌混合很難分離鑒定厭氧菌經常被忽略無法準確定量局限性微生物實驗室的挑戰硬件設施和人員的技術水平、診斷水平等參差不齊微生物專家需多年的經

4、驗培養 傳統鑒定能力有限 人力資源普遍不足 平均每1000床位5位臨床微生物專家 臨床要求更快檢驗時效更高的工作強度臨床微生物專家與臨床醫師對稱、溝通有障礙較少涉略臨床用藥指引政策,評鑒需求增多抗菌藥物臨床應用管理辦法（衛生部令第84號)三級綜合醫院評審標準實施細則耐藥菌株逐年上升更多藥物敏感性報告需求微生物實驗室如何面對挑戰?更加標準化更高效率更主動的信息交流更高質量微生物檢測新技術的發展趨勢敏感快速特異準確多種病原體同時檢測（multiplex）高通量型別的鑒定MALDI-TOFGeneXpertFilmArray基因芯片檢測高通量測序技術（NGS）有應用前景的微生物檢測技術Filmarr

5、ayMALDI-TOF質譜技術（MALDI-TOF MS）是最新開發的鑒定固體培養基上分離的病原菌的方法原理：是在高真空系統中將樣本分子離解成帶電的離子，并通過對生成離子的質量和強度的測定，而進行樣品成分和結構分析的方法BrukerABI島津MALDI-TOF MS-基本原理激光照射樣品與基質形成的共結晶薄膜，基質從激光中吸收能量傳遞給生物分子，而電高過程中將質子轉移到生物分子或從生物分子得到質子，而使生物分子電離的過程X軸：M/ZY軸：相對強度很直觀的看到整個分子的質譜全貌質譜信號：分子離子峰、碎片離子峰、亞穩離子峰、重排離子峰等MALDI-TOF MS蛋白質指紋特征基于譜圖模式比對的細菌鑒

6、定2022/8/20MALDI-TOF鑒定流程MALDI-TOF vs VITEK 2 微生物培養（without MALDI) 微生物培養 （with MALDI)Day 1接種平板培養；PCT接種平板培養，PCTDay 2革蘭染色，直接鏡檢；配置鑒定藥敏菌懸液上機；及藥敏試驗MS檢測13分鐘鑒定出細菌報告臨床；同時有選擇做藥敏Day 3ID&AST臨床報告藥敏報告縮短報告TAT（24h）TAT時間將數天數小時降低至數分鐘傳統 VS MALDI-TOFMALDI-TOF用于血培養檢測應用MALDI-TOF MS降低治療成本Perez KK, et al. Integrating Rapid

7、Pathogen Identification and Antimicrobial Stewardship Significantly Decreases Hospital Costs.Arch Pathol Lab Med. 2012 Dec 6.將快速識別和易感技術與抗菌管理結合起來，大大改善了最佳治療的時間，并降低了住院時間和總成本MALDI TOF-MS 優缺點優勢：操作簡單、快速一個樣品從獲得單克隆開始，到樣本處理、譜圖采集和獲得鑒定結果可以在幾分鐘之內完成，操作簡單、快速、通量高靈敏度高使用經久耐用且性能可靠的布魯克道爾頓的MALDI-TOF系列質譜儀，可以實現高重現性的快速可靠的

8、檢測準確度好MALDI-TOF 獲得的蛋白指紋圖譜用作模式匹配，匹配分值用作鑒定結果的分級和歸類，軟件對所得的圖譜進行歸一化分析，其精巧的算法保證了鑒定的精確性缺點：MALDI-TOF MS檢測的次代培養物，從血培養陽性到鑒定還需要24-36hr無法提供AST實時熒光定量PCR技術檢測方法： SYBR Green I TaqMan Molecular Beacon優勢：擴增、檢測在一個實時PCR反應系統中即時完成 ，快速、特異、敏感，最有發展前景檢測對象：真菌、結核分枝桿菌、淋病奈瑟氏菌、HBV、HCV、HIV、解脲支原體、巨細胞病毒、EB病毒等21GeneXpert檢測原理：應用microf

9、luidic cartridges（微流樣品管）中的超聲裝置破碎原始樣品釋放內含的DNA，并在各小室間轉移并洗滌、純化和濃縮DNA，在定量PCR反應管中進行實時熒光定量PCR反應，同時進行擴增和檢測GeneXpert技術整合的微流控技術儀器平臺試劑盒運行程序和對照GeneXpert檢測流程2010年12月世界衛生組織宣布認可并向全球推薦使用Xpert MTB/RIF技術用于結核病及利福平耐藥的檢測在2個小時之內直接檢出病人痰標本中是否有結核分枝桿菌以及利福平耐藥性GeneXpert技術GeneXpert可檢測的其他項目檢測難辨梭菌毒素用于抗生素相關性腹瀉診斷耐藥菌株的檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球

10、菌mecA基因、碳青霉烯類耐藥基因、萬古霉素耐藥腸球菌基因病毒及載量EV、Flu、H1N1、HIV-1、HCV等GeneXpert優點：全自動的工作流程整合了裂解、提取、擴增和實時檢測的過程快速獲得結果整合的超聲裂解裝置以快速獲得核酸特殊的PCR反應管設計大大縮短PCR循環時間自動解讀結果即時檢測無需批次檢測隨時進行任意檢測即插即用無需日常維護通過整合LIS系統即時獲得結果Filmarray基本原理兩種具有獨特擴增產物序列的不同靶標的熔解曲線樣本裂解、提純、擴增、檢測一步到位節省培養時間，縮短TAT48小時1小時報告覆蓋80%常見病原微生物提供萬古霉素等抗生素耐藥基因情況Filmarray檢測

11、統一平臺下的多種檢測解決方案測試面廣廣泛的臨床研究Filmarray ME Panel與培養或PCR對比，FA對于腦脊液標本的檢測9種病原體敏感性達100%；2種病原體一致性達85%以上Multicenter evaluation of BioFire FilmArray Meningitis/Encephalitis Panel for detection of bacteria, viruses, andyeast in cerebrospinal fluid specimens. J Clin Microbiol 54:22512261Journal of Clinical Microb

12、iology p. 32163221 October 2012 Volume 50 Number 10. 我院2017年Filmarray與DFA檢查FilmarrayDFA法陽性率：58.02%陽性率：16.33%多重PCR用于微生物檢測大多數呼吸道感染的臨床表現是非特異的，可能由分枝桿菌、病毒、嗜肺軍團菌、衣原體和支原體等病原微生物中的一種或幾種感染引起。多重PCR在一個反應管中加入了多對引物來擴增不同靶基因的核苷酸片斷，從而篩選臨床標本中可能存在的多種病原菌。 35高通量基因芯片用于微生物檢測36基因芯片用于多種耐藥基因的檢測可以檢測革蘭陽性菌常見的90種耐藥基因此平臺可用于基礎研究、食品安全和耐藥監測Vincent Perreten et al. J. Clin. Microbiol. 2005, 43: 22912302. 高通量測序（NGS）邊合成邊測序，通過捕捉新生成的末端的標記來確定DNA的序列DNA 文庫的制備連接接頭測序數據分析應用：基因組/宏基因組測序新一代高通量測序技術使得微生物基因組