1、實驗四、過氧化氫酶活性測定（高錳酸鉀滴定法）1過氧化氫酶（CAT）普遍存在于植物的所有組織中，其活性與植物的代謝強度及抗寒、抗病能力有一定關(guān)系，故常加以測定。2過氧化氫酶活性的測定方法： 氧電極法 比色法 化學(xué)發(fā)光法 滴定法3過氧化氫酶屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，過氧化氫則既是氧化劑又是還原劑。可根據(jù)H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。在反應(yīng)系統(tǒng)中加入一定量（反應(yīng)過量）的過氧化氫溶液，經(jīng)酶促反應(yīng)后，用標(biāo)準(zhǔn)高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的過氧化氫。即可求出消耗的H2O2的量。 5H2O22KMnO44H2SO45O22K

2、HSO48H2O2MnSO4 一、實驗原理4（一）材料： 新鮮植物葉片（二）儀器設(shè)備： 1. 研缽；2. 試管；3. 酸式滴定管；4. 恒溫水浴鍋；5. 容量瓶/量筒。二、材料、儀器設(shè)備及試劑5（三）試劑：1. 10%H2SO4；2. 0.2 mol/L pH7.8磷酸緩沖液；3. 0.1mol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液:KMnO43.1605g，用新煮沸冷卻蒸餾水配制成1000ml，再用0.1mol/L 草酸溶液標(biāo)定；64. 0.1mol/L H2O2 ：市售30%H2O2大約等于17.6mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀釋至1000ml，用標(biāo)準(zhǔn)0.1mol/L KMnO4溶液（在酸

3、性條件下）進行標(biāo)定；5. 0.1mol/L 草酸：稱取H2C2O4.2H2O 12.607g，用蒸餾水溶解后，定容至1000ml。7（一）酶液提取：取植物葉片1g加入pH7.8的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移至20ml容量瓶中，用該緩沖液沖洗研缽，并將沖洗液轉(zhuǎn)至20ml容量瓶/量筒中，用同一緩沖液定容，000rpm離心1min，上清液即為過氧化氫酶的粗提液。三、實驗步驟8（二）取2個試管（一個測定，另一個對照），測定瓶加入酶液2.5ml，對照加煮死酶液2.5ml（100加熱2分鐘），再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同時計時，于30恒溫水浴中保溫15min，立即加入10%H2S

4、O4 2.5ml。用0.1mol/L KMnO4標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，至出現(xiàn)粉紅色（在30min內(nèi)不消失）為終點。9樣品對照酶液2.5ml酶液2.5ml（ 100加熱2分鐘）2.5ml 0.1mol/L H2O22.5ml 0.1mol/L H2O230恒溫水浴中保溫15min30恒溫水浴中保溫15min10%H2SO4 2.5ml10%H2SO4 2.5ml0.1mol/L KMnO4（Bml）0.1mol/L KMnO4 （Aml）101.酶活性用每g鮮重樣品1min內(nèi)分解H2O2mg數(shù)表示： 過氧化氫酶活性（H2O2mg/g/min） （AB）VT/(WVS1.7t) 式中：A對照KMnO4滴定ml數(shù)；B酶反應(yīng)后KMnO4滴定ml數(shù)；VT提取酶液總量（ml）；VS反應(yīng)時所用酶液量（ml）；W樣品鮮重（g）；t反應(yīng)時間（min）； 1.