1、ISO13913固體質量氣相色譜質譜法測定酞酸酯（鄰苯二甲酸酯）類前言：ISO的介紹（略）介紹：表1中是采用內標法應用和確認的幾種基體物質。表1應用內標法確認和應用的幾種基體基體確認物質污泥、底泥、沉積物等市政污泥生物廢料新鮮堆肥土壤污泥改性土壤警告：內標法對人員要求是擁有實驗室經驗，操作都應有相應的安全和健康措施，符合當?shù)匾蟮陌踩徒】档脑O施條件。主要：本實驗的重點均應由熟練員工按照內標法制訂出相應流程1范圍本方法規(guī)定了土壤中鄰苯二甲酸酯類化合物的氣相色譜-質譜測定方法。本方法測定濃度范圍O.lmg/kg0.5mg/kg（干重）（依化合物不同而不同）。表2本方法中規(guī)定的鄰苯二甲酸酯編號名稱

2、化學式縮寫摩爾質量g/molCAS-No.1鄰苯二甲酸二甲酯c10h10o4DMP194.200131-11-32鄰苯二甲酸二乙酯c12h14o4DEP222.200084-66-23鄰苯二甲酸二丙酯5叫8。4DPP250.300131-16-84鄰苯二甲酸二（2-甲基丙）酯c16H22OdDiBP278.400084-69-55鄰苯二甲酸二丁酯DBP278.400084-74-26鄰苯二甲酸丁芐酯c10h10o4BBzP312.400085-68-77鄰苯二甲酸二環(huán)己酯c20h26o4DCHP330.400084-61-78鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯c24H38O4DEHP390.6001

3、17-81-79鄰苯二甲酸二辛酯DOP390.600117-84-010鄰苯二甲酸二癸酯cloHQDDcP446.700084-77-511鄰苯二甲酸二十一酯C30H50O4DUP474.403648-20-22參考標準ISO5667-l3,partl3ISO5667-l5,partl5ISOl038l-2,part2ISOll465ISOl507ISO228923方法原理經冷凍干燥或硫酸鈉干燥的土壤樣品，使用乙酸乙酯振蕩提取，提取液經氧化鋁凈化，通過GC/MS進行定性與定量分析。4干擾鄰苯二甲酸酯類化合物因被用于增塑劑而廣泛存在，來源多樣，需要特別注意實驗室污染的問題。操作過程中嚴禁使用塑料

4、制品（如：移液器槍頭，進樣瓶隔墊等）。交叉污染有可能來自于實驗室空氣，應盡可能減少實驗室中的塑料制品；清潔劑通常含有增塑劑，可能嚴重污染實驗室空氣，因此在分析過程中盡量避免使用此類物質。試劑和材料5.1僅使用鄰苯二甲酸酯類含量可忽略不計的試劑，并測定空白樣品進行確認；如有必要，應增加凈化步驟。5.2氮氣，高純度N2，純度至少為99.9%，用于干燥或氮吹濃縮5.3氦氣，高純度He,純度至少為99.999%5.4乙酸乙酯，C4H8O2，不含鄰苯二甲酸酯5.5甲醇，CH3OH，HPLC級5.6異辛烷，C8H18，不含鄰苯二甲酸酯5.7石英棉，400C下加熱至少4h5.8氧化鋁，A12O3，中性，粒徑

5、50-200pm,400C下加熱至少4h。加熱后氧化鋁保存于有蓋燒瓶或干燥器中，五天內使用。5.9內標氘代鄰苯二甲酸二乙酯，D4-DEP；氘代鄰苯二甲酸二丁酯，D4-DBP；氘代鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯，D4-DEHP。13C標記的標樣也可使用。5.10鄰苯二甲酸酯標準物質：p=1000pg/mlo市售鄰苯二甲酸酯單標或混合標準物質。也可自行配制。稱取10mg純物質（精確到0.01mg）到10ml容量瓶中，并用乙酸乙酯定容。零下18C下玻璃瓶中避光保存溶液，并至少每三個月檢查濃度。標準儲備液：p=10.0pg/ml。在10ml容量瓶中加入100pl的標準物質（5.10），并用乙酸乙酯定容。

6、零下18C下玻璃瓶中避光保存溶液，并至少每三個月檢查濃度。標準曲線溶液在10ml容量瓶中稀釋標準貯備液（5.11）和溶液III內標液（5.14.4）配制標準溶液，使用乙酸乙酯（5.4）定容。標準曲線濃度取決于樣品中估計的鄰苯二甲酸酯濃度。表3中的濃度可作為濃度單位：ng/ml示例（附錄B）。表3標準曲線推薦濃度濃度水平標準儲備液量ayl溶液III內標液量bylL12.5100L25100L310100L420100L540100L650100L7100100L8150100L9300100L10450100a參見5.11；b參見5.14.4鄰苯二甲酸酯L1L2L3L4L5L6L7L8L9L10

7、DMP2.55.010204050100150300450DEP2.55.010204050100150300450DPP2.55.010204050100150300450DiBP2.55.010204050100150300450DBP2.55.010204050100150300450BBzP5.010.0204080100200300600900DCHP2.55.010204050100150300450DEHP2.55.010204050100150300450DOP5.010.0204080100200300600900DDcP12.525.05050200250500750150

8、02250DUP12.525.0505020025050075015002250D4-DBP100100100100100100100100100100D4-DEHP100100100100100100100100100100D4-DOP100100100100100100100100100100表4標準曲線L1-L10各物質濃度混合并用乙酸乙酯稀釋標準儲備液和內標以配制標準曲線溶液。零下18C下玻璃瓶中避光保存溶液，并至少每三個月檢查濃度。5.14內標的標準溶液5.14.1D4-鄰苯二甲酸酯的內標標準溶液：p=100yg/ml，市售。5.14.2溶液I內標混合標準液將單獨鄰苯二甲酸酯內標標準

9、溶液（5.14.1）混合，按如下步驟稀釋20倍：使用微量注射器轉移各內標標準溶液各1.0ml至20ml容量瓶中后，用乙酸乙酯定容。氘代鄰苯二甲酸酯的最終濃度為5.0mg/L。5.14.3溶液II內標混合標準液轉移1:50稀釋溶液（5.14.2）如200吐到10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容。氘代鄰苯二甲酸酯中的最終濃度為0.1mg/L。5.14.4溶液III內標混合標準液稀釋10倍溶液I內標混合標準液(5.14.2)。用移液槍移取1ml溶液(5.14.2)至10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容。氘代鄰苯二甲酸酯的最終濃度為10yg/ml。5.15硫酸鈉，Na2SO4，400C下加熱至少4h儀器和設備

10、所用設備盡量避免塑料等高分子有機材料。6.1大口平底帶玻璃塞燒瓶，最好為棕色，500ml與1000ml6.2烘箱，可保持溫度于1055C6.3馬弗爐，可調節(jié)溫度，溫度最高可至40010C,容量至少為60L6.4樣品瓶，玻璃材質，有聚四氟乙烯(PTFE)涂層隔墊的樣品瓶用來保存提取液；2-ml有隔墊的樣品瓶用來儲存自動進樣樣品。6.5用以凈化的真空裝置。6.6不銹鋼活塞，有不銹鋼椎體或者有Luer接口的PTFE活塞，用來分離真空接口6.7玻璃小柱，有Luer椎體6.8PTFE隔板，用于6ml小柱6.9鋁箔，經400C加熱不銹鋼容器，用來存儲小型玻璃器皿量筒，50ml和100ml容量瓶，10ml，

11、25ml，250ml巴斯德吸管，2ml6.14微量注射器，2吐，5吐，10吐，50吐，100吐，500吐，最高可容許誤差2%6.15氣相色譜-質譜儀，帶毛細管柱，柱溫箱，質譜檢測器。6.16載氣，氣相色譜/質譜儀使用，高純度，與儀器制造商要求相一致6.17熔融石英毛細管色譜柱，固定相為非極性。固定相：5%苯基甲基硅氧烷，長度：30m,內徑：0.25mm,膜厚：0.25pm；參考柱固定相：34%/64%/2%苯基/甲基/乙烯基硅膠，長度：30m，內徑：0.32mm，膜厚：0.25pm。6.18振蕩裝置，可水平振蕩。6.19實驗室常用設備。分析步驟采樣應該使用不銹鋼容器或玻璃容器，為避免污染，應避

12、免使用任何塑料材料。米樣后應盡快干燥樣品，如無法避免樣品儲存，應在4C避光保存。7.1準備玻璃器皿在清洗器中用水清洗所有分析過程中使用過的玻璃器皿（除微量進樣器），清洗后玻璃器皿先在烘箱于105C烘干，然后放入馬弗爐于400C下烘烤至少4h。加熱后使玻璃器皿在12h內冷卻至室溫。將冷卻的玻璃器皿（較大容器）使用相應的瓶塞或鋁箔封口，較小玻璃器皿儲存于經預處理（加熱）并封閉的不銹鋼容器中。為避免吸附于瓶壁造成的損失，用巴斯德吸管吸取異辛烷溶劑清洗瓶壁，棄去清洗后溶劑。樣品的干燥根據(jù)水分含量和基質的不同，使用硫酸鈉或冷凍干燥干燥樣品。干物質含量80%的樣品（如土壤，廢物）可以用硫酸鈉干燥。高水分含

13、量的污泥使用冷凍干燥。7.2.1冷凍干燥將混勻樣品的一部分或樣品中具有代表性的一部分冷凍至-18C,之后在5kPa的壓力下凍干至樣品重量恒定。使用瑪瑙研缽混勻凍干樣品。722使用硫酸鈉（Na2SO4）干燥根據(jù)樣品可能的鄰苯二甲酸酯含量水平（干基80%），稱取1-10g鮮樣置于燒杯中并加入足夠多的硫酸鈉直至形成可流動的混合物，將混合物在瑪瑙研缽中混勻。當形成可流動的混合物時，水分已被固定。同時，測定樣品的干物質含量。樣品的提取稱取1-10g（根據(jù)干物質含量和可能的鄰苯二甲酸酯含量而定，精確到0.01g）樣品和硫酸鈉的混合物或冷凍干燥樣品到250ml錐形瓶中，加入20ml含內標（如,400“的溶液

14、I內標混合標準液（5.14.2），使內標濃度與標準曲線中內標濃度一致）的乙酸乙酯。如鄰苯二甲酸酯含量可能較高，提取溶劑量可加倍或更多倍（見表5）。由于空白樣品中鄰苯二甲酸酯含量未知，應避免稀釋樣品提取液。使用瓶塞對錐形瓶封口。表5取樣量和干物質/溶劑量示例基質取樣量g干物質/溶劑比例備注土壤2-102:20低含量到高含量的DEHP肥料2-102:20低含量到高含量的DEHP沉積物和懸浮固體2-102:20含DEHP污泥1-101:20高含量的DEHP使用振蕩設備（6.22）提取樣品至少30min，并確保樣品與溶劑的充分混合。提取后，使用移液管移取大約1ml樣品到GC進樣瓶中；當需要進一步凈化時

15、移取3ml（參見8.4）。在樣品瓶和瓶蓋間墊一層經加熱處理的鋁箔（6.9）以避免來自隔墊的鄰苯二甲酸酯污染。提取液可直接進行GC-MS分析。如果需要進一步凈化，如樣品中存在對GC-MS分析帶來干擾的雜質，參見7.4。需要注意溶劑量應足夠供后面步驟的取用（最少3ml）。推薦使用上述提取方法是由于自動索氏提取或加速溶劑提取（ASE）有可能帶來污染，可能提取出的鄰苯二甲酸酯含量相當，但增加了污染的可能性。此外，提取量的關系（溶劑使用量和取樣量）應根據(jù)方法的不同而進行調整。對于空白的要求，參見7.6。7.4凈化只有GC-MS分析受到來自基質的干擾時才使用凈化步驟，否則由于可能增加污染，應盡量避免使用凈

16、化步驟。提取后，使用移液管（6.13）移取大約3ml提取液并使用氧化鋁（5.8）凈化提取液。取l.Og活化的氧化鋁（5.8）置于小柱（6.7）的兩個PTFE隔板（6.8）間。使用1個小柱體積的乙酸乙酯（5.4）清洗氧化鋁（5.8）。使用氮氣（5.2）干燥1min。使用不銹鋼活塞（6.6）固定經清洗的小柱并置于真空裝置（6.5）上。使提取液通過小柱并收集于玻璃管中（6.18）。轉移提取液至GC小瓶（6.4）中，在樣品瓶和瓶蓋間墊一層鋁箔（6.9）以避免來自隔墊的鄰苯二甲酸酯污染。7.5氣相色譜-質譜分析（附錄C）根據(jù)儀器制造商的說明書優(yōu)化GC（6.15）設備。使用毛細管柱（6.17）進行分離。為

17、使進樣系統(tǒng)無鄰苯二甲酸酯污染，在測定樣品及標樣前從不同GC小瓶（參見條款4）進乙酸乙酯（5.4）至少五次。色譜條件：載氣：氦氣5.0；壓力：4.5bar；進樣器：脈沖不分流；分流：20ml/min；不分流，時間：1.5min；隔墊：無泄漏型；進樣器溫度：250C；檢測器溫度：290C；進樣體積：1卩1（自動）；程序升溫：70C,保持3min13C/min升溫至280C保持20min。質譜條件：離子源溫度：230C,離子化模式：EI。標準溶液濃度：25-190pg/pl。標準溶液GC-MS譜圖如下圖所示。11Y12297316182G208W653G0Q600050004000-2000圖2-3

18、-1GC-MS色譜圖1鄰苯二甲酸二甲酯，2鄰苯二甲酸二乙酯，3鄰苯二甲酸二烯丙酯，4鄰苯二甲酸二丙酯，5鄰苯二甲酸二（2-甲基丙）酯，6鄰苯二甲酸二丁酯，7鄰苯二甲酸丁芐酯，8鄰苯二甲酸二環(huán)己酯，9鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯，10鄰苯二甲酸二辛酯，11鄰苯二甲酸二癸酯，12鄰苯二甲酸二十一酯7.6空白檢測定期檢查儀器和試劑的空白情況。對于空白的測定，用和處理樣品同樣的步驟（見7.2和7.3）處理硫酸鈉（5.15），稱取足夠干燥樣品的硫酸鈉進行分析，DEP、DiBP、DBP和DEHP是最常見的鄰苯二甲酸酯，每種鄰苯二甲酸酯的空白值不能高于檢出限的50%。每批樣品分析兩個空白樣品，兩個空白樣品的

19、偏差不能超過30%，否則重新分析。空白樣品的結果用來做空白校正（參見條款10）。7.7化合物的定性化合物的定性是通過對比相同條件下測定的標樣中各物質的保留時間確定的。表2-3-5標準物質典型選擇離子示例化合物簡寫選擇離子目標離子M1%定性離子M2%定性離子M3%1鄰苯二甲酸二甲酯DMP163(100)194(7.8)135(4.5)2鄰苯二甲酸二乙酯DEP149(100)177(23)222(1.6)3鄰苯二甲酸二丙酯DPP149(100)209(5.9)191(6.9)4鄰苯二甲酸二（2-甲基丙）酯DiBP149(100)223(7.4)205(1.9)5鄰苯二甲酸二丁酯DBP149(100

20、)223(5.6)278(1.0)6鄰苯二甲酸丁芐酯BBzP149(100)206(22)312(1.0)7鄰苯二甲酸二環(huán)己酯DCHP149(100)167(32)249(5.5)8鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯DEHP149(100)167(34)279(8.8)9鄰苯二甲酸二辛酯DOP149(100)279(6.6)207(4.4)10鄰苯二甲酸二癸酯DDcP149(100)307(6.4)-11鄰苯二甲酸二十一酯DUP149(100)321(5.4)-化合物簡寫選擇離子目標離子M1%定性離子M2%定性離子M3%12氘代鄰苯二甲酸二丁酯D4-DBP153(100)227(5.7)-13氘代鄰

21、苯二甲酸二（2-乙基己）酯D4-DEHP153(100)171(31)283(14)14氘代鄰苯二甲酸二辛酯D4-DOP153(100)283(17)-注1各離子根據(jù)使用調諧文件的不同可能不同注2當鄰苯二甲酸酯濃度較小時，定性離子可能無法檢出Ml用來定量；M2和M3可用來定性8計算根據(jù)實際需要使用單標或混標溶液為每種化合物建立定量校準曲線，確保響應值和濃度間的線性關系，線性范圍內需最少包括五個濃度點。每種物質的定量校準曲線只能用于相應的濃度范圍，并且與儀器的操作條件有關。定量校準曲線需要定期檢查，日常檢查時兩個點的校準即可滿足要求（見8.3）。本方法給出了建立定量校準曲線的程序，濃度范圍應適應

22、于工作條件（根據(jù)5.l3配制標準溶液）。使用內標定量使用內標定量可減少儀器測定過程中所產生的誤差，同時還能消除樣品前處理過程中樣品量減少所造成的誤差。在目標物質和內標的回收率接近的時候，樣品濃度的測定與樣品基質無關。內標的質量濃度p.在標準曲線標樣和樣品中應一致。i,is對于化合物i來說，縱坐標使用y.td/y.（峰面積，峰高或其他積分單位），.,std.,.s橫坐標使用質量濃度p.td/p.建立曲線。使用數(shù)據(jù)y.td/y.和p.td/p.建立如公式i,stdi,.si,stdi,.si,stdi,.s（1）所示的線性回歸方程：也“字+辱（1）式中，y.td濃度為p.td的物質i在標準曲線中的響應值，如峰面積；.y.,.濃度為p.,.的內標.在標準曲線中的響應值，如峰面積；.,.,.p.std物質.在標準溶液中的濃度，單位為ng/ml；p.s內標.的濃度，單位為ng/ml；a.濃度比p.td/p.和響應比y.td/y.所建立標準曲線的斜率；.,std.,.s.,std.,.sb標準曲線在y軸的截距。標準曲線的驗證運行至少兩個標樣，濃度為已建立標準曲線線性范圍的（2010）%和（8010）%，并建立線性關系，如果該曲線落在已建立標準曲線95%的置信區(qū)間內，則認為所建立的標準曲線是可靠的，否則應根據(jù)9.2重新建立標準曲線。使用公式