1、間充質(zhì)干細(xì)胞功能及臨床應(yīng)用第1頁，共125頁。MSC簡(jiǎn)介MSC安全性評(píng)價(jià)MSC功能與應(yīng)用中國(guó)的政策第2頁，共125頁。間充質(zhì)干細(xì)胞簡(jiǎn)介1#第3頁，共125頁。間充質(zhì)干細(xì)胞 間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSC），來源于發(fā)育早期的中胚層，1968年MSC在骨髓中發(fā)現(xiàn)，后發(fā)現(xiàn)其具有多向分化潛能、造血支持和促進(jìn)干細(xì)胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點(diǎn)而日益受到人們的關(guān)注。第4頁，共125頁。BM-MSC接種在珊瑚狀羥基磷灰石微載體（3小時(shí)后的掃描電鏡500X）Tissue Eng 2002;8(6):911-920第5頁，共125頁。間 充 質(zhì) 干 細(xì) 胞沒滿 4X長(zhǎng)滿 4

2、X第6頁，共125頁。間 充 質(zhì) 干 細(xì) 胞貼壁生長(zhǎng)特定表面標(biāo)志 陽性 (95%) 陰性 (2%) CD105 CD45 CD73 CD34 CD90 CD14 or CD11b CD79 or CD19 HLA-DR多向分化潛能 體外分化能力: 軟骨，成骨，脂肪The International Society For Cell Therapy Cytotherapy, 8:315-317, 2006鑒定標(biāo)準(zhǔn)（最低標(biāo)準(zhǔn)）：第7頁，共125頁。Annu Rev Pathol 2011;6457-478第8頁，共125頁。無處不在MSC脂肪骨髓臍帶臍帶血牙髓外周血胸腺羊膜第9頁，共125頁。富含

3、MSC的人體組織圖片來自網(wǎng)絡(luò)第10頁，共125頁。年齡與骨髓MSC含量的變化第11頁，共125頁。研究的里程碑安全1，1995年間充質(zhì)干細(xì)胞首次應(yīng)用于臨床治療，評(píng)價(jià)血液腫瘤患者使用后的安全性和有效性。第12頁，共125頁。研究的里程碑2，1999年science發(fā)表文章，首次證明MSC的多向分化能力！分化第13頁，共125頁。研究的里程碑3，2002年Exp Hematol和blood 發(fā)表文章，首次證明MSC具有免疫抑制能力！免疫調(diào)節(jié)第14頁，共125頁。研究的里程碑4，2006年國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)（ISCT）頒布了間充質(zhì)干細(xì)胞的定義（最低鑒定標(biāo)準(zhǔn)）。統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)第15頁，共125頁。研究的里程

4、碑5，2012年Osiris公司申報(bào)MSC作為藥品上市得到加拿大FDA的批準(zhǔn)，MSC的臨床應(yīng)用達(dá)到一個(gè)歷史性高度！MSC藥物第16頁，共125頁。1，活性差、功能低的間充質(zhì)干細(xì)胞（自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞）2，臍血單個(gè)核細(xì)胞（mononuclear cell，不是monocytes）冒充間充質(zhì)干細(xì)胞（部分醫(yī)院和企業(yè)）3，干細(xì)胞制劑里添加各種藥物（激素）4，治療方案沒有經(jīng)過優(yōu)化5，各種忽悠的干細(xì)胞類型，比如：外周血干細(xì)胞（外周血含有少量的間充質(zhì)干細(xì)胞，但目前無法擴(kuò)增到臨床所需的細(xì)胞數(shù)）、母乳干細(xì)胞（退一步說，即使母乳里含有干細(xì)胞，但經(jīng)過胃酸和腸道消化，早就死翹翹了）、植物干細(xì)胞、心臟干細(xì)胞（專業(yè)上有

5、心肌干細(xì)胞）等負(fù)面消息（包括無效）的特點(diǎn)第17頁，共125頁。MSC的新理解Cell Immunol 2012;272(2):112-116MSC是機(jī)體免疫系統(tǒng)安全信號(hào)的來源！第18頁，共125頁。血液病1994年Matzinger提出“danger model ”核心：免疫系統(tǒng)只關(guān)心其是否受到損壞來啟動(dòng)免疫反應(yīng)或誘導(dǎo)免疫耐受受到損壞（dangerous）活化APC活化T-cell未受到損壞（not dangerous ）誘導(dǎo)免疫耐受signals遺憾：當(dāng)時(shí)沒有明確涉及dangerous signals和safe signals的定義和內(nèi)涵。Danger Model第19頁，共125頁。應(yīng)用受

6、限2001年Matzinger提出具體的“dangerous signals”SignalsDangerous siganlsSafe signalsendogenous: Hsp, DNA, RNA, TNF,CD40L exogenous: unmethylated CpG sequences in microbial（2001年）?意義：能夠解釋更多免疫學(xué)現(xiàn)象，成功地解釋了壞死細(xì)胞為何能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答反應(yīng)。Danger Model第20頁，共125頁。應(yīng)用受限MSCs是免疫系統(tǒng)“安全信號(hào)”的來源acute phasechronic phasesafe signalsself-MSCsCel

7、l Immunol. 2012;272(2):112-6MSC在免疫中的作用第21頁，共125頁。思 考人體含豐富的MSCMSC具有很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能為何還會(huì)出現(xiàn)自身免疫性疾病？第22頁，共125頁。間充質(zhì)干細(xì)胞安全性評(píng)價(jià)2#第23頁，共125頁。“成瘤性/致癌”的擔(dān)憂和恐懼是干細(xì)胞臨床應(yīng)用的最大障礙！擔(dān)憂和恐懼的最早來源是胚胎干細(xì)胞的強(qiáng)致癌性，包括后來的iPS。What about mesenchymal stem cell (間充質(zhì)干細(xì)胞)？Think about hemopoietic stem cell (造血干細(xì)胞)！不是所有的干細(xì)胞都具有成瘤性/癌變！第24頁，共125頁。1，間充

8、質(zhì)干細(xì)胞廣泛存在于人體中，包括外周血、骨髓、脂肪、所有組織器官的基質(zhì)（ Ann Med 2005;37(7):469-479 ）。如果間充質(zhì)干細(xì)胞具有成瘤性，那么腫瘤一定伴隨著每個(gè)人的完整人生！2，每次患者輸血或造血干細(xì)胞移植（骨髓移植），都伴隨著輸入少量的間充質(zhì)干細(xì)胞。但從來沒有證據(jù)證明輸血和造血干細(xì)胞移植能導(dǎo)致腫瘤的出現(xiàn)！3，間充質(zhì)干細(xì)胞作為藥品，已經(jīng)在國(guó)外上市，那是否意味著安全性已經(jīng)得到國(guó)外的認(rèn)可？能否得到中國(guó)專家、醫(yī)生、民眾的認(rèn)可？值得反思的三點(diǎn)第25頁，共125頁。安全性評(píng)價(jià)臨床使用安全性報(bào)道：- J Gastroenterol Hepatol 2012;27 Suppl 2112-

9、120- Stem Cells Transl Med 2012;1(10):725-731第26頁，共125頁。安全性評(píng)價(jià)臨床使用安全性報(bào)道：- Stem Cells Dev 2013;22(24):3192-3202- J Tissue Eng Regen Med 2011;5(2):146-150第27頁，共125頁。安全性評(píng)價(jià)臨床使用安全性報(bào)道： 8個(gè)隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn)（RCTs）發(fā)現(xiàn)MSC治療組和對(duì)照組的感染率沒有差異，明確提出MSC治療不會(huì)增加感染的風(fēng)險(xiǎn)，MSC治療組和對(duì)照組在惡液質(zhì)和成瘤方面沒有差異。J Invasive Cardiol 18: 552556；Chin Med J (

10、Engl) 117: 14431448；J Am Coll Cardiol 54: 22772286；Stem Cells 28: 10991106；Clin Pharmacol Ther 83: 723730；Leukemia 22: 593599；Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi 34: 107110(Chinese)；Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research 11: 12771279 (Chinese)第28頁，共125頁。安全性評(píng)價(jià)臨床使用安全性報(bào)道： 對(duì)目前大量的臨床

11、試驗(yàn)的文獻(xiàn)進(jìn)行分析（Meta-Analysis），發(fā)現(xiàn)MSC輸入治療與發(fā)燒存在一定的關(guān)聯(lián)性，而與其他文獻(xiàn)所報(bào)道的不良反應(yīng)沒有必要的聯(lián)系，認(rèn)為MSC治療是安全的。 PLoS One 2012;7(10):e47559第29頁，共125頁。 MSC治療軟骨損傷，41個(gè)病人的45個(gè)關(guān)節(jié)軟骨，最長(zhǎng)觀察11年5 個(gè)月，沒發(fā)現(xiàn)患者得腫瘤等副作用，證明了MSC的長(zhǎng)期安全性！ J Tissue Eng Regen Med 2011;5(2):146-150.安全性評(píng)價(jià)第30頁，共125頁。風(fēng)險(xiǎn)控制基因組穩(wěn)定性體外擴(kuò)增導(dǎo)致的基因突變微生物病毒細(xì)菌支原體輔料素內(nèi)毒素胎牛血清殘留穩(wěn)定性評(píng)價(jià)生產(chǎn)工藝第31頁，共125

12、頁。 Array-CGH and cytogenetic analyses showed that BM-MSCs expanded in vitro did not show chromosomal abnormalities. Telomerase activity and hTERT transcripts were not expressed in any of the examined cultures and telomeres shortened during the culture period.(Cancer Res 2007;67(19):9142-9149)P14P18穩(wěn)

13、定性評(píng)價(jià)第32頁，共125頁。穩(wěn)定性評(píng)價(jià)P30Although hUC-MSCs with genomic alterations do not undergo malignant transformation, periodic genomic monitoring and donor management focusing on genomic stability are recommended before these cells are used for clinical applications.(Cell Death Dis 2013;4e950)第33頁，共125頁。生產(chǎn)工藝管理

14、要求干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行）干細(xì)胞制劑的質(zhì)量控制明確提出要求：“應(yīng)制定干細(xì)胞采集、分離和干細(xì)胞（系）建立的標(biāo)準(zhǔn)操作及管理程序，并在符合GMP要求基礎(chǔ)上嚴(yán)格執(zhí)行。”GMP級(jí)車間第34頁，共125頁。歐盟GMP關(guān)鍵點(diǎn)（Cytotherapy 2015;17(2):128-139）第35頁，共125頁。間充質(zhì)干細(xì)胞功能及應(yīng)用3#第36頁，共125頁。多向分化免疫調(diào)節(jié)能力消炎能力促進(jìn)器官特異性干細(xì)胞增殖修復(fù)組織器官軟骨損傷/缺損、血管新生GVHD、自免肝、RA、SLE、移植排斥各種炎癥、腦水腫、潰瘍性結(jié)腸炎肝病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、再障心梗、中風(fēng)間充質(zhì)干細(xì)胞功能應(yīng)用多重治療機(jī)制，但有偏

15、重！第37頁，共125頁。MSC研究的差異性Cell Cycle; 9(15): 2923-2924第38頁，共125頁。MSC分泌的趨化受體（綠色）和趨化因子（藍(lán)色）Stem Cells 2008;26(9):2287-2299MSC具有很強(qiáng)的趨化性第39頁，共125頁。Cell Stem Cell 2009;5(1):54-63MSC在肺部滯留，激活TSG-6的高表達(dá)。MSC在肺部的清除和激活第40頁，共125頁。Control Nude NOD/SCID Nude Balb/c Balb/c MSCMSCFibroblastFibroblastMSC體內(nèi)代謝Zangi L , et al

16、. Stem Cells 2009;27:2865-2874天數(shù)第41頁，共125頁。 Circulation 2005;112(10):1451-1461Cytotherapy 2015;肺部沒有損傷肺部有損傷第42頁，共125頁。 Circulation 2005;112(10):1451-1461第43頁，共125頁。臍帶MSC和骨髓MSC（細(xì)胞因子表達(dá)）Biology of Blood and Marrow Transplantation 13:1477-1486, 2007我們的結(jié)果: Haematologica. 2006 ;91:1017-26CytokineUC-MSCBM-M

17、SCIL-6+LIF+IL-3-GM-CSF+-G-CSF+-SDF-1+M-CSF+VEGF+FLt-3+SCF+2MG+第44頁，共125頁。評(píng)價(jià)MSC的質(zhì)量克隆形成能力細(xì)胞大小免疫調(diào)節(jié)能力分泌細(xì)胞因子的量第45頁，共125頁。MSC免疫調(diào)節(jié)因子趨化因子營(yíng)養(yǎng)因子血管再生因子抑制疤痕因子抗凋亡因子HGF、TGF-1、PGE2、IDORANTES、SDF-1、MIP-1、MCP-1HGF、NGF、FGF-2、PDGF-AA、PDGF-BB、EGFVEGF165、FGF-2、EGF、PDGF-AA、PDGF-BB、HGF、FGF-2VEGF165、FGF-2、HGFStem Cells 2015

18、;33(6):1878-1891第46頁，共125頁。空氣潔凈度臍帶脂肪骨髓影響MSC的質(zhì)量的因素MSC功效來源病理生理細(xì)胞活率體外培養(yǎng)健康患者培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)年青年老活率越高越好第47頁，共125頁。概念的差異臨床研究：clinical study 是以人體疾病的診斷、治療、預(yù)后、病因和預(yù)防為主要研究?jī)?nèi)容。臨床試驗(yàn)：clinical trial 指任何在人體（病人或健康志愿者）進(jìn)行藥物的系統(tǒng)性研究，以證實(shí)或揭示試驗(yàn)藥物的作用、不良反應(yīng)及/或試驗(yàn)藥物的吸收、分布、代謝和排泄，目的是確定試驗(yàn)藥物的療效與安全性。 臨床試驗(yàn)一般分為I、II、III、IV期臨床試驗(yàn)和EAP（expanded access p

19、rogram）臨床試驗(yàn)。第48頁，共125頁。間充質(zhì)干細(xì)胞臨床試驗(yàn)：全球（554+115項(xiàng)）2015-11-1搜索詞結(jié)果第49頁，共125頁。間充質(zhì)干細(xì)胞臨床試驗(yàn)：中國(guó)（109+9項(xiàng)）2015-11-1搜索詞結(jié)果第50頁，共125頁。全球分布（區(qū)域）第51頁，共125頁。Up to 2015-11-01MSC的全球clinicaltrials項(xiàng)目第52頁，共125頁。完成臨床試驗(yàn)發(fā)表文章的病種MSC免疫系統(tǒng)心血管造血系統(tǒng)神經(jīng)系統(tǒng)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)呼吸系統(tǒng)GVHD、腎移植Crohns病、RA急性心梗、心肌缺血、心衰難治性心絞痛、擴(kuò)張型心肌病下肢缺血再障、GVHD帕-羅二氏綜合征脊髓損傷、MS膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨

20、缺損骨發(fā)育不全支氣管肺發(fā)育不全COPD第53頁，共125頁。MSC質(zhì)量最佳治療方案最佳治療效果第54頁，共125頁。間充質(zhì)干細(xì)胞美國(guó)FDA對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞治療的支持！第55頁，共125頁。間充質(zhì)干細(xì)胞國(guó)家年份公司細(xì)胞來源適應(yīng)癥加拿大FDA2012美國(guó)Osiris公司骨髓GVHD韓國(guó)FDA2011FCB-Pharmicell公司自體骨髓急性心梗韓國(guó)FDA2012Medi-post公司臍帶血退行性關(guān)節(jié)炎和膝關(guān)節(jié)軟骨損傷韓國(guó)FDA2012Cuepistem公司自體脂肪復(fù)雜性Crohn病并發(fā)肛瘺新西蘭FDA2012美國(guó)Osiris公司骨髓GVHD瑞士FDA2012美國(guó)Osiris公司骨髓GVHD作為藥品

21、上市：第56頁，共125頁。慎用癥：嚴(yán)重的精神病史，目前病情仍未穩(wěn)定者；腫瘤或癌癥患者（取決于使用目的）；高度過敏體質(zhì)或有嚴(yán)重過敏史（產(chǎn)品的輔料）；極個(gè)別期望值過高，或者不切合實(shí)際的要求者；間充質(zhì)干細(xì)胞第57頁，共125頁。免疫性疾病間充質(zhì)干細(xì)胞第58頁，共125頁。World J Stem Cells 2014;6(5):526-539第59頁，共125頁。World J Stem Cells 2014;6(5):526-539第60頁，共125頁。The balance between these opposing pathways may serve to promote host de

22、fense on one hand and at the same time create a loop that prevents excessive tissue damage and promotes repair.(Cell Stem Cell 2013;13(4):392-402.)第61頁，共125頁。不同來源的MSC的免疫功能比較臍帶MSC的免疫抑制功能優(yōu)于健康人和SLE患者骨髓MSC，而且MHC-I類抗原表達(dá)量最低。J Immunol 2014;193(9):4381-4390第62頁，共125頁。思 考現(xiàn)在的免疫學(xué)認(rèn)識(shí)是否足以解釋MSC臨床現(xiàn)象？第63頁，共125頁。MSC免

23、疫調(diào)節(jié)能力aGVHD組MSC治療組小鼠GVHD臨床表現(xiàn)： 倦怠、納差、消瘦、體重下降、 弓背、脫毛、腹瀉等第64頁，共125頁。免疫重建胸腺組織具有可塑性，可通過治療阻止或恢復(fù)胸腺功能。第65頁，共125頁。我們證明間充質(zhì)干細(xì)胞能促進(jìn)胸腺的發(fā)育和免疫系統(tǒng)的重建！Cell Mol Immunol 2014;11(3):275-284第66頁，共125頁。骨髓MSC治療GVHDa phase II study. Lancet 2008;371(9624):1579-1586第67頁，共125頁。中國(guó)第一例 2006-9-26造血干細(xì)胞移植治療后，出現(xiàn)移植物抗宿主病（GVHD），表現(xiàn)為腹瀉、皮疹瘙癢

24、、肝臟損傷等，外周靜脈輸入間充質(zhì)干細(xì)胞后，腹瀉及皮疹消失、肝功能正常，血象顯示造血干細(xì)胞正常造血。臍帶MSC治療GVHD病例1第68頁，共125頁。肝功能改善 12/12（100%）腹瀉次數(shù)減少 5/6（83.3%）皮疹消退 12/12（100%）口干眼干 1/1（100%）血象改善 3/3（100%）道培醫(yī)院治療12例患者的情況GVHD的表現(xiàn)：生存率100%第69頁，共125頁。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA） T 細(xì)胞介導(dǎo)的全身性自身免疫性疾病，由于病人免疫耐受機(jī)制的缺失，造成關(guān)節(jié)滑膜炎和關(guān)節(jié)損傷。第70頁，共125頁。患者，女性，26歲，類風(fēng)濕病史10年。癥狀：頭昏,疲勞乏力、頸椎僵硬,雙手指骨關(guān)

25、節(jié)變形、腫脹，活動(dòng)受限，胃腸功能也減退，食欲不振，精神萎靡。08年8月5日，進(jìn)行UC-MSC移植治療。第二天，手指明顯消腫，其它關(guān)節(jié)腫脹也消退，全身癥狀明顯減輕 ，胃腸功能逐漸恢復(fù)，精神狀態(tài)良好，現(xiàn)在可正常工作。MSC治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎悲喜孕事第71頁，共125頁。MSC治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎Stem Cells Dev 2013;22(24):3192-3202治療方案：前三個(gè)月，每個(gè)月一次，再隔2-3個(gè)月，第4次治療。第72頁，共125頁。異體骨髓MSC治療Crohns病多中心、II臨床研究Clin Gastroenterol Hepatol 2014;12(1):64-71第73頁，共125

26、頁。臍帶MSC治療SLE40名活動(dòng)期SLE患者（死亡3例），1x106/kg，在第0天和第7天各靜脈注射一次。沒有對(duì)癥組。a multicenter clinical study. Arthritis Res Ther 2014;16(2):R79第74頁，共125頁。MSC在腎移植中的應(yīng)用A Randomized Controlled Trial. JAMA 2012;307(11):1169-1177腎移植2周后，外周靜脈輸入自體骨髓MSC (12)x106/kg第75頁，共125頁。間充質(zhì)干細(xì)胞組織器官損傷性疾病第76頁，共125頁。異體骨髓MSC治療COPD（慢阻肺）Quality o

27、f Life？每個(gè)月一次，連續(xù)4次，1x108MSC/次。Chest 2013;143(6):1590-1598第77頁，共125頁。自體骨髓MSC治療多發(fā)性硬化癥（MS ）an open-label pre-test: post-test study with blinded outcome assessments10名患者，8名健康者，治療一次，(1-2)x106/kg，觀察1年。Trials 2011;1262第78頁，共125頁。自體脂肪MSC治療膝骨關(guān)節(jié)炎1x108AD-MSC關(guān)節(jié)腔注射能有效改善膝蓋關(guān)節(jié)功能，減少疼痛。Stem Cells 2014;32(5):1254-1266第

28、79頁，共125頁。異體骨髓MSC治療心肌梗塞隨機(jī)、雙盲臨床研究：心肺功能明顯改善，左心室射血分?jǐn)?shù)明顯提高。沒有統(tǒng)計(jì)再次心臟血管堵塞情況。急性心梗再通后，外周靜脈輸入(0.5-5)x106/kg的MSC，一次治療。J Am Coll Cardiol 2009;54(24):2277-2286第80頁，共125頁。臍帶MSC治療心肌梗塞多中心II期研究：心肌活力明顯增強(qiáng)，左心室射血分?jǐn)?shù)明顯提高。沒有統(tǒng)計(jì)再次心臟血管堵塞情況。急性心梗再通后，冠脈介入注射6x106MSC，一次治療。BMC Med 2015;13162第81頁，共125頁。自體骨髓MSC治療慢性脊髓損傷損傷局部介入注射5x106MS

29、C，一次治療。Stem Cell Res Ther 2014;5(6):126第82頁，共125頁。異體骨髓MSC治療兒童骨發(fā)育不全MSC治療后，促進(jìn)骨骼生長(zhǎng)和骨密度增加。三個(gè)病人，沒有對(duì)照組，沒提及治療方案。Nat Med 1999;5(3):309-313第83頁，共125頁。骨髓MSC治療心肌缺血12個(gè)月后， 6-minute walk test31個(gè)病人MSC細(xì)胞數(shù)為(2-20)x107/人治療一次經(jīng)心內(nèi)膜干細(xì)胞注射（TESI）短期效果：提高生活質(zhì)量，改善心臟功能。JAMA 2012;308(22):2369-2379第84頁，共125頁。模型鼠治療組正常鼠MSC治療腦中風(fēng)臍帶MSC治

30、療，缺血區(qū)的血管密度增加，提高缺血區(qū)的血供！MCAO(中腦動(dòng)脈閉塞 ) rat model第85頁，共125頁。患者，男性，26歲，突發(fā)大面積腦梗塞，全身癱瘓，知名專家診斷，“他們可能不能再坐起來了”。07年12月，08年7月5日兩次輸入患者兒子的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，目前患者恢復(fù)了四肢的知覺，談笑自若，與正常人沒有區(qū)別。患者自行行走到醫(yī)院進(jìn)行第二次干細(xì)胞治療。MSC治療腦梗塞第86頁，共125頁。MSC治療糖尿病足第87頁，共125頁。 田某某，女，22歲，因面部紅斑，在當(dāng)?shù)蒯t(yī)院診斷：系統(tǒng)性紅斑狼瘡，經(jīng)激素沖擊治療無效，出現(xiàn)雙側(cè)股骨頭壞死，此后患者出現(xiàn)頭暈、疲乏，經(jīng)第四軍醫(yī)大學(xué)附屬醫(yī)院診斷為再生

31、障礙性貧血。 患者于2010年元月份入院檢查， 血常規(guī)提示： WBC 2.8109/L， Hb：76g/L， PLT 31109/L， 血沉80mm/h， MR提示雙側(cè)股骨頭無菌性壞死。MSC治療再障第88頁，共125頁。診斷： 1.系統(tǒng)性紅斑狼瘡； 2.慢性再生障礙性貧血 中度貧血； 3.雙側(cè)股骨頭無菌性壞死。處理及效果： 經(jīng)用間充質(zhì)干細(xì)胞8107靜脈輸注，六周后再次輸注，復(fù)查血常規(guī)提示：WBC 3.7109/L，Hb：90g/L，PLT 45109/L，血沉下降至40mm/h，腹部B超提示肝膽腎胰未見明顯異常。 MR提示雙側(cè)股骨頭無菌性壞死，與原片對(duì)照無進(jìn)展。十二周后第三次輸注，全身靜脈間

32、充質(zhì)干細(xì)胞4107靜脈輸注，雙側(cè)股骨頭插管（髂外動(dòng)脈內(nèi)旋支），分別給予1107干細(xì)胞，局部酸困不適減輕，面部紅斑消退，面色紅潤(rùn)，半年后生化及血常規(guī)正常。 第89頁，共125頁。 任xx，男76歲，因患銀屑病，經(jīng)各方治療效果不佳，長(zhǎng)期服用甲氨蝶呤，3年前出現(xiàn)腹脹，下肢水腫，于2010年入院診斷為銀屑病（紅皮病型），肝硬化失代償期 大量腹水，低蛋白血癥，下肢水腫重度，經(jīng)肝動(dòng)脈插管注入間充質(zhì)干細(xì)胞1108/80ml，術(shù)中無不良反應(yīng)，次日全身皮膚瘙癢停止，脫屑大幅減少，兩月后患者皮膚呈局灶恢復(fù)。MSC治療銀屑病并發(fā)肝硬化第90頁，共125頁。患者治療前后體征改變記錄前后第91頁，共125頁。 朱：女，

33、27歲，2008年開始身體不適，2010年3月確診為卵巢早衰。 去過多家三甲醫(yī)院診治，醫(yī)生建議服用雌激素治療，直至50歲。2010年5月開始服用雌激素。 2010年9月，經(jīng)朋友介紹，來醫(yī)院進(jìn)行間充質(zhì)干細(xì)胞治療。兩周后潮熱癥狀明顯減輕，1個(gè)月后停用雌激素。到目前為止，應(yīng)用干細(xì)胞治療3次（1次/月）。建議治療6次以上。 目前月經(jīng)周期基本正常，各項(xiàng)指標(biāo)恢復(fù)良好。間充質(zhì)干細(xì)胞治療卵巢早衰第92頁，共125頁。治療后骨密度增加大約5.7% 治療后骨密度增加大約2% BMD 0.5217g/cm2 BMD 0.5309g/cm2 BMD 0.5601g/cm2 BMD 0.5918g/cm2松質(zhì)骨Mrs.

34、 Na (Female/78) 密質(zhì)骨第93頁，共125頁。MSC治療放射性肺損傷MSC尾靜脈注射，治療放射性肺損傷大鼠模型。28天后，組化染色提示MSC治療減少肺部炎癥滲出、減少肺纖維化的形成。Cytotherapy 2015;17(5):560-570第94頁，共125頁。MSC治療放射性肺損傷MSC治療放射性肺損傷，在于減少肺部炎癥、減少肺上皮細(xì)胞的凋亡；減少促纖維化因子的表達(dá)，從而預(yù)防肺纖維化的形成。Cytotherapy 2015;17(5):560-570第95頁，共125頁。MSC治療放射性腸損傷Cell Death Dis 2013;4e685第96頁，共125頁。MSC治療肝

35、病在clinicaltrials登記注冊(cè)的項(xiàng)目數(shù)（2015-11-1）第97頁，共125頁。應(yīng)用受限MSCs及其向肝細(xì)胞分化后的肝細(xì)胞樣細(xì)胞（HLCs）的功能比較：第98頁，共125頁。MSCsHLCs免疫調(diào)節(jié)能力 減弱分泌HGF 減少趨化能力 減弱急性肝衰竭的療效 減弱MSCs及其向肝細(xì)胞分化后的肝細(xì)胞樣細(xì)胞（HLCs）的功能比較：結(jié)論：直接用MSCs治療急性肝衰竭的療效優(yōu)于分化后的HLCs。 Cytotherapy 2014;16(3):309-318.第99頁，共125頁。我國(guó)肝衰竭患者2年死亡率1，我國(guó)報(bào)道肝衰竭的病死率為73.9%，其中急性肝衰竭為87.8%、亞急性肝衰竭為69.3%

36、、慢性肝衰竭為66.5%，凝血功能越差，病死率越高（臨床肝膽病雜志2009,25(5): 352-354）；2，中山大學(xué)傳染病醫(yī)院（3附院）肝衰竭2年的死亡率到50%（和MSCs治療組沒差異）（Peng, L., D. Y. Xie, et al. (2011). Hepatology 54(3): 820-828.）。3，北京302醫(yī)院肝衰竭2年的死亡率到60%，間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）治療后降低到30%（Shi, M., Z. Zhang, et al. (2012). Stem Cells Transl Med 1(10): 725-731）。第100頁，共125頁。肝衰竭患者的選擇肝衰

37、竭肝移植間充質(zhì)干細(xì)胞失敗成功優(yōu)先第101頁，共125頁。MSC治療肝病的多重機(jī)制Stem Cell Res 2013;11(3):1348-1364第102頁，共125頁。 1# 文獻(xiàn)題目: Autologous bone marrow mesenchymal stem cell transplantation in liver failure patients caused by hepatitis B: short-term and long-term outcomes (Hepatology 2011;54(3):820-828)結(jié)論: 短期內(nèi)能改善肝功能，但長(zhǎng)期沒有效果。治療方案: 骨

38、髓來源的MSC，治療1次，肝動(dòng)脈介入，但沒有細(xì)胞數(shù)。間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝衰竭的文獻(xiàn)分析P=0.715臨床大樣本數(shù)據(jù)直接證明自體骨髓MSC治療肝衰竭無效！第103頁，共125頁。 2# 文獻(xiàn)題目: Human mesenchymal stem cell transfusion is safe and improves liver function in acute-on-chronic liver failure patients(Stem Cells Transl Med 2012;1(10):725-731. )結(jié)論: 間充質(zhì)干細(xì)胞能改善肝功能，提高肝衰竭患者的生存率，減低MELD評(píng)分。治療方

39、案: 臍帶來源的MSC, 治療3次，每個(gè)月一次，外周靜脈， 0.5x106/kg間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝衰竭的文獻(xiàn)分析第104頁，共125頁。 3# 文獻(xiàn)題目: Clinical therapeutic effects of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells transplantation in the treatment of end-stage liver disease(Transplant Proc 2015;47(2):412-418)結(jié)論: 在24周的觀察期內(nèi)，肝功能改善明顯，但凝血功能沒有改善。治療方案: 臍帯來源的

40、MSC，治療一次，肝動(dòng)脈介入，3x107/每人MELD Score: from 8.49 to 7.57但是，本文沒有提及肝衰竭患者的生存率！間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝衰竭的文獻(xiàn)分析第105頁，共125頁。文獻(xiàn)MSC來源細(xì)胞數(shù)治療次數(shù)輸入途徑生存率MELD 評(píng)分1#骨髓-1次肝動(dòng)脈介入50%沒變化2#臍帶0.5x106/kg3次外周靜脈70%下降3#臍帶3x107/每人1次肝動(dòng)脈介入-沒對(duì)照組總結(jié)表：體會(huì): 療效與三方面密切相關(guān)：治療方案，MSC的來源， 適應(yīng)癥的選擇注: 第二個(gè)文獻(xiàn)所用的MSC是我公司提供的干細(xì)胞產(chǎn)品。間充質(zhì)干細(xì)胞治療肝衰竭的文獻(xiàn)分析第106頁，共125頁。2013年以來的4名肝衰竭

41、患者第107頁，共125頁。2013年以來的4名肝衰竭患者經(jīng)過6-8次的UC-MSC治療，全部擺脫肝衰竭的病理狀態(tài)，凝血功能達(dá)不到診斷肝衰竭的標(biāo)準(zhǔn)！第108頁，共125頁。MSC治療肝衰竭1#2013-12-3 北京302醫(yī)院肝硬化診療中心治療時(shí)間：2013-8至2014-11。治療方案：每個(gè)月一次， 每次6x107臍帶MSC診斷：乙肝肝硬化（失代償期） 肝衰竭（慢加急） 肝性腦病 食管胃底靜脈曲張破裂大出血 脾切除術(shù)后第109頁，共125頁。肝硬化&肝衰竭1#時(shí)間ALT/AST（U/L）白蛋白（g/L）總膽紅素（umol/L）凝血酶原時(shí)間（S）凝血酶原活動(dòng)度INRB超2013-7-306/2

42、935.660.226.730%2.52肝硬化（肝門靜脈主干和左右支內(nèi)栓子形成）2013-8-1112/3936.540.719.847%1.962014-1-1235/774319.415.562.7%1.342014-6-1723/3732.735.214.978%1.17肝硬化（肝門靜脈主干和左右支內(nèi)栓子形成）2014-9-2550/8036.43911.782%1.06肝臟彌漫性病變，無血栓 2014-11-229/4637.926.311.593%1.04肝臟彌漫性病變，無血栓正常值0-40/0-5040-553.4-20.511-1580-120%第110頁，共125頁。肝病專業(yè)評(píng)

43、分1#時(shí)間Child-PughMELD2013-7-3012分（C級(jí)）20分2014-6-179分（B級(jí)）11分2014-11-25分（A級(jí)）4分第111頁，共125頁。MSC治療肝衰竭2#診斷：1，肝衰竭，慢加急2，肝硬化 失代償期3，肝性腦病4，肺炎5，膽囊結(jié)石第112頁，共125頁。MSC治療肝衰竭2#檢查項(xiàng)目治療前2次治療后4次治療后6次治療后谷丙ALT158661.741.342.5谷草AST2753104.265.166.9總膽紅素44.432.714.724.1白蛋白27.43628.531.6凝血酶原時(shí)間PT21.116.216.415.9國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值INR1.861.391

44、.411.36第113頁，共125頁。MSC治愈肝硬化的第一例國(guó)內(nèi)首次從人臍帶中分離培養(yǎng)出間充質(zhì)干細(xì)胞！1，影像學(xué)未發(fā)現(xiàn)肝硬化跡象；2，HBV病毒拷貝數(shù)陰性；3，HBsAg陰性；4，從2009年開始停止服用抗病毒藥物MSC正規(guī)治療2年（2007-2009年）：而后每年約1-3次的頻率2007年2月1日第一次輸入MSC第114頁，共125頁。臍帶MSC治療肝衰竭的方案1，連續(xù)8次，每個(gè)月1次，每次6（2）袋（1x107/袋）；2，外周靜脈輸入；3，常規(guī)治療：抗病毒、輸白蛋白、保肝利肝、利尿、抗生素（感染）4，凝血功能指標(biāo)INR2.5，治療效果不佳。5，肝癌慎用。肝衰竭：0.5-1年肝硬化：2-4年肝硬化：治療方案：接上述肝衰竭的治療，以后每季度治療1次； 治療方案：前2年，每?jī)蓚€(gè)月治療一次；后2年，每個(gè)季度治療1次。第115頁，共125頁。為何不主張自體骨髓MSC治療？衰老的MSC細(xì)胞質(zhì)量分化能力再生能力遷移能力Ann N Y Acad Sci 200