1、每天用足夠的時間來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得最大的補償，而且您的色譜柱的壽命也會變得更長！- 一定得做！ 新的色譜柱在使用之前應該在您自己的液相色譜儀上進行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗報告上測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應時常對色譜柱進行測試。 卡套柱的安裝（不加預柱） 1將卡套架套入柱芯 2將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夾套（見左圖） 3將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片 4將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手擰緊 5然后依同樣的順序連接好柱子的另一端 6連接到液相色譜儀，PEEK接頭手擰即可；若為不銹鋼接頭應使用專用扳手 注意：使用

2、卡套柱時，兩端的卡套應時刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時候都不能將卡套取下來，否則會造成填料的流失。 卡套柱的安裝（加預柱） 1將卡套架套入柱芯 2將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯（見左圖） 3將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片 4將子彈頭預柱放入卡套片內 5將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手擰緊 6然后依同樣的順序連接好柱子的另一端 7連接到液相色譜儀，PEEK接頭手擰即可；若為不銹鋼接頭應使用專用扳手 更換色譜柱濾網和玻璃棉過濾片（同時可以修補色譜柱） 注意：在取出反相柱芯的濾網和玻璃片之前，應該將色譜柱充分用水和甲醇/乙腈沖洗，而且修補工具的頭部也應

3、該蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出濾網和玻璃棉濾片時帶出柱子內的填料。 1將修補工具中的2套入柱芯的頂端 2將修補工具中的3輕輕地旋入已套著2的柱芯中，并順時針方向旋轉到旋緊 3一手握柱芯，另一只手輕輕地向外拉3，取出柱芯頂端的濾網 4用一個小鏟子輕輕地取出濾網下面的玻璃棉以及被污染的填料 5將新的填料用甲醇潤濕，然后填入挖去的部位，壓平 6照（左圖）裝上新的玻璃棉濾網，并用修補工具中的4將玻璃棉壓入柱芯頂端 7柱芯頂端套上2，然后參照（左圖）將濾網放入 8壓緊，然后取下2，再用4將濾網的邊緣壓平 平衡色譜柱 反相色譜柱在經過出廠測試后是保存在乙腈/水中的。請一定確保您所使用的流動相和乙腈/

4、水互溶。由于色譜柱在儲存或運輸過程中可能會干掉，因此在用流動相分析樣品之前，應使用1020倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱；如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽，應注意用純水過渡。 硅膠柱或極性色譜柱在經過出廠測試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動相，請在使用流動相之前用乙醇或異丙醇平衡 如何平衡色譜柱？ 平衡過程中，將流速緩慢地提高 用流動相平衡色譜柱直到獲得穩定的基線（緩沖鹽或離子對試劑度如果較低，則需要較長的時間來平衡） 色譜柱的再生 進行色譜柱再生時，應使用一個謙價的泵，我們建議最好不使用您的高效液相色譜儀上的泵。 表1建議用來沖洗的溶劑體積 色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的

5、體積 125-4 1.6ml 30ml 250-4 3.2ml 60ml 250-10 -20ml 400ml 請根據下表選擇您的再生方法： 極性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色譜填料）的再生： 正庚烷氯仿乙酸乙酯丙酮乙醇水* 非極性固定相（如反相色譜填料RP18，RP8，CN等）的再生： 水乙腈氯仿（或異丙醇）乙腈水 0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱 注意： 在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。 *如果簡單的有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質，用0.05M稀

6、硫酸沖洗非常有效。 色譜柱的維護 1使用預柱保護分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度） 2大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是27.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍 3避免流動相組成及極性的劇烈變化 4流動相使用前必須經脫氣和過濾處理 5如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應在實驗完畢柱子沖洗干凈，并保存大乙腈中高效液相色譜中常遇見的問題及處理方法1 色譜柱跑干了，處理方法：將貯液瓶裝入重蒸水，首先按purge鍵，將柱前氣柱排出，若無法排出，可將色譜柱前拆下，用注射器抽吸。待柱前氣體排空后，連接色譜柱，用水高低流速交替沖洗色譜柱，直至柱壓穩定為止。2.基線不穩，有靜電，處理方

7、法：檢查接地是否良好。3.峰面積變化非常大，處理方法：檢查是否進樣閥堵塞。4.基線突然提高，變粗，處理方法：檢查樣品池能量，若低于正常值，說明檢測器污染。5.柱壓變動范圍較大，處理方法：多為進氣泡。高低流速交替沖洗。6.柱效或峰形突然變差，處理方法：更換預柱。 7塔板數低 ：色譜柱選擇不對，二次保留、峰形不好的影響8色譜柱易變性：色說柱選擇不對，二次保留的影響9色譜柱壽命短：色譜柱選擇不對，樣品需預處理（PH7）10保留值變化：色譜柱平衡不夠，流動相比例改變11出現新的干擾峰：初始分離不夠或初始樣品無代表性 選擇波長要從以下幾個方面考慮：1. 檢測波長要大于溶劑截止波長。如果所選擇的波長下溶劑

8、有很強的吸收當然是不合適的。溶劑有強吸收后，基線抬高，減小檢測的線性范圍而且會加大基線噪聲，對溶質的檢測靈敏度下降。2. 對各組分都要有適當的吸收。一般是不可能做到的。所以只要選擇一個對大多數組分都有較大吸收的波長就可以了。3. 外標法定量時，要選擇被測組份最大吸收波長。254nm 對常見的共軛結構和羰基官能團都有吸收。對飽和基團也有弱的吸收。而對于常見的乙腈、甲醇的透過率很高。是在不知道用什么波長時最理想的試驗波長。 （一）渦流擴散（Eddy diffusion）流動相碰到較大的固體顆粒，就像流水碰到石頭一樣產生渦流。如果柱裝填得不均勻，有的部分松散或有細溝，則流動相的速度就快；有的部位結塊

9、或裝直緊密則流就慢，多條流路有快有慢，就使區帶變寬。因此，固相載體的顆粒要小而均勻，裝柱要松緊均一，這樣渦流擴散小，柱效率高。（二）分子擴散（Molecular diffusion）分子擴散就是物質分子由濃度高的區域向濃度低的區域運動，也稱縱向分子擴散。要減少分子擴散就要采用小而均勻的固相顆粒裝柱。同時在操作時，如果流速太慢，被分離物質停留時間長，則擴散嚴重。（三）質量轉移（Mass transfer）被分離物質要在流動相與固定相中平衡，這樣才能形成較窄的區帶。在液相色譜中，溶質分子要在兩個液相之間進行分配，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的時間。當流速快時，轉移速度慢，來不及達到平衡動相就

10、向前移，這各物質的非平衡移動，使區帶變寬。四）動相流速當流速太低時，分子擴散嚴重，特別是在氣相色譜中尤為突出。如將理論塔板高度對流速作圖，理論塔板高度隨流速增加而急速下降，當達到最低值時，流速再加大則質量轉移起主要作用，理論塔板高度又加大。在高效液相色譜中，流速稍快影響不大，但在凝膠過濾色譜中，因為物質要滲透到凝膠內部，所以質量轉移影響大，流速咖大會降低柱效率。五）固定相顆粒大小定相顆粒越小柱效率越高，對流動相流動的阻力越大，需要加大壓力才能使它流動。 1、開泵后壓力即升高至最高限度，經過對色譜柱前，色譜柱，色譜柱后的分段測試，確定為檢測池堵塞。2、換檢測波長后，色譜峰面積比以前做的小很多，懷

11、疑進樣環或管路漏夜，經檢查，排除，最后確定為，檢測波長的顯示值和實際值不符。 由氣味、景象和聲音可以發現的問題你需要運用你所有的感官去發現液相色譜的問題。你最好養成習慣，每天花上幾分鐘運用你的感官（除了味覺）來“感覺”你的液相色譜是否存在問題，這樣可以幫助你迅速找到問題所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先聞到它的氣味。大部分的問題是可以通過眼睛看到。A、溶劑的氣味原 因 解決方法1、漏液 1、見前2、濺出 2、a、檢查廢液瓶是否已滿 b、找到濺出的部位并清洗干凈B、熱氣味原 因 解決方法1、儀器過熱 1、a、檢查并調節通風設施 b、檢查并調節溫度設定c、關掉儀器，查找維修手冊C、讀數不正常

12、原 因 解決方法1、壓力不正常 1、見前2、柱溫箱問題 2、a、檢查并調節設定 b、參照用戶手冊3、檢測器燈失效 3、更換燈D、燈警告原 因 解決方法1、壓力超出極限值 1、a、檢查是否阻塞 b、檢查并調節極限值的設定2、其它警示燈 2、見用戶手冊E、警告音原 因 解決方法1、溶劑泄漏/濺出 1、找到并解決2、其它警告音 2、見用戶手冊F、刺耳的短音或長音原 因 解決方法1、軸承失效 1、見用戶手冊2、潤滑不夠 2、進行恰當的潤滑3、機械故障 3、見用戶手冊 進樣閥可能發生的問題A、手動進樣閥，轉動不靈原 因 解決方法1、轉子密封損壞 1、更換或調整轉子密封2、轉子太緊 2、調整轉子的松緊度B

13、、手動進樣閥，載樣困難原 因 解決方法1、進樣閥安裝不當 1、重新安裝2、定量環阻塞 2、清洗或更換定量環3、進樣器污染 3、清洗或更換進樣器4、管路阻塞 4、清洗或更換管路C、自動進樣閥，不能轉動原 因 解決方法1、無壓力（或電源） 1、提供恰當的壓力（電源）2、轉子太緊 2、調整轉子的松緊度3、進樣閥安裝不當 3、重新安裝D、自動進樣閥，其它問題原 因 解決方法1、阻塞 1、清洗或更換阻塞部件2、機械故障 2、見隨機維修手冊3、控制器故障 3、維修或更換控制器 HPLC柱壓過高：1.拆去保護柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；2.把色譜柱從儀器上取下來，如果壓力仍然

14、不降，則是管路堵塞，須清洗，如果壓力下降了，將柱子的進出口反過來接再儀器上，用10倍量柱體積的流動相沖洗柱子，如果柱壓仍不降，再檢查3.更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明溶劑獲樣品中含有固體顆粒，若柱壓還高，可在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器基線不穩，上下波動或漂移1。流動相有溶解氣體；用超聲波脫氣15-30分鐘2。單向閥堵塞，取下超聲去除堵塞物3。泵密封損壞，造成壓力波動，更換泵密封4。系統存在漏液點，確定漏液位置并維修5。流通池內有贓物或者雜質，清洗雜物6。柱后產生氣泡，流通池出液口加負壓調節器7。檢測器沒有設定在最大吸收波長處8。柱平衡慢，特別是流動相發生變化時。用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的心流動相對柱子進行沖洗 1.檢測信號出現倒峰，檢查檢測器與主機相連接是否有松動，可以把下重新連接。2.夏季氣溫高，水容易生菌，要求HPLC所用重蒸水必須每天都要更新。3.由甲醇換到流動相平衡時，壓力先稍稍下降，然后慢慢回升，可能是混合池混合效果不好，也可能是B泵輕度堵塞。4.色譜柱長期不用，應用甲醇沖洗2h以上后，寧上兩端螺絲保存。 島津機器易出現的毛病是：1、壓