1、植物組織培育實驗教師：葉水英實驗一、熟習和整理植物組織培育實驗室一、實驗目的： 了解植物組織培育實驗室的設置及根本設備，學習根本儀器設備的運用原理與方法，掌握植物組織培育的一些根本技術。二、實驗內容：一組培實驗室的設置我系組培實驗：植物實驗室、分子生物實驗室、組培室三大個實驗室組成。一個規范的組織培育實驗室該當包括：預備室、接種室、培育室、馴化室等，預備室又稱為化學實驗室或通用實驗室，可由洗滌室、培育基配制室和滅菌室構成。在實踐中可結合可行條件，合并一部分。各分室能滿足實驗預備器皿的洗滌與存放、培育基制備和無菌操作、器具的滅菌、無菌操作和控制培育三項根本任務的需求。1、預備室由洗滌室、培育基配

2、制室和滅菌室構成。1洗滌室(cleaning room)用于玻璃器皿和實驗器具的洗滌、枯燥和儲存；培育資料的預處置與清洗；組培苗的出瓶、清洗與整理等。室內應配備大型水槽，最好是白瓷水槽。為防止碰壞玻璃器皿，可鋪墊橡膠。上下水道要暢通。備有塑料筐，用于運輸培育器皿。備有枯燥架，用于放置枯燥涮凈的培育器皿。2培育基配制室用于培育基的配制。要求房間寬闊亮堂、通風、枯燥、清潔衛生，便于多人同時操作；有電源、自來水和水槽池，保證上下水道暢通。有時可將配制室內部間隔為稱量分室和配制分室。規模較小時，配制室可與洗滌室合并為預備室。儀器與器具配置：電子天平、磁力攪拌器、蒸餾水器、酸度計、恒溫水浴鍋、電爐或微波

3、爐、電飯煲、液化氣爐灶等、冰箱等儀器設備；移液管或微量移液器、移液管架、培育瓶包括試管、棕色或透明試劑瓶、燒杯帶或不帶刻度、量筒、容量瓶、培育皿、吸管、打孔器、玻璃棒、標簽紙、記號筆、耐高溫高壓塑料薄膜等封口資料、周轉筐、尼龍繩、脫脂棉、紗布、任務臺、蒸餾水桶、醫用小推車等用品和器具。此外，配備器械柜和藥品柜，分別存放接種器具和分類存放化學試劑可改為藥品。最好配備防塵設備，以減少灰塵污染。3滅菌室用于培育基、器皿、工具和其他物品的消毒滅菌。要求平安、通風、亮堂；墻壁和地面防潮、耐高溫；配備水源、水槽池、電源或煤氣加熱安裝和供排水設備；保證上下水道暢通，通風措施良好。消費規模較小時，可與洗滌室、

4、配制室合并在一同，但滅菌鍋的擺放位置要遠離天平和冰箱，而且必需設置換氣窗或換氣扇，以利通風換氣。儀器與器具配置：高壓滅菌鍋、干熱消毒柜或烘箱、細菌過濾安裝、任務臺、培育基存放架或櫥柜、周轉筐、換氣扇、醫用小推車等。2、無菌操作室transfering room進展植物資料的接種、培育物的轉移等無菌操作，因此接種室也稱為無菌操作室。其無菌條件的好壞對組織培育的勝利與否起著重要作用。在任務方便的前提下，接種室宜小不宜大，普通78m2，要求地面、天花板及四壁盡能夠密閉光滑，易于清潔和消毒。配置推拉門，以減少開關門時的空氣擾動。接種室要求干爽安靜，清潔亮堂。在適當位置吊裝1-2盞紫外線滅菌燈，用以照射

5、滅菌。最好安裝一小型空調，使室溫可控，這樣可使門窗緊閉，減少與外界空氣對流。儀器與器具配置：超凈任務臺、空調機、解剖鏡、接種器具消毒器(或高溫焚化爐)、紫外光燈、酒精燈、廣口瓶、三角瓶、搪瓷盤、接種工具、手持噴霧器、任務臺、擱架、接種用的小平車、不銹鋼長方形飯盒(盛放7075%酒精，用于浸泡接種工具)或醫院用消毒盒等。配置污物桶，以便存放接種過程中的丟棄物，須每天清洗改換。進入無菌室前，為了防止帶菌空氣直接進入接種室和任務人員進出接種室時帶進雜菌，接種人員在緩沖間更衣、換鞋、洗手、戴上口罩后，才干進入接種室。該當在此室內安裝滅菌用的紫外燈。3、培育室culturing room 培育室是將接種

6、的資料進展培育生長的場所。培育室的大小可根據需求培育架的大小、數目、及其他附屬設備而定。其設計以充分利用空間和節省能源為原那么。高度比培育架略高為宜，周圍墻壁要求有絕熱防火的性能。培育資料放在培育架上培育。培育架大多由金屬制成，普通 設5、6層，最低一層離地高約l0-20cm，其他每層間隔30cm左右，培育架即高1.7m左右。培育架長度都是根據日光燈的長度而設計，如采用40W日光燈，那么長1.3m，30W的長lm，寬度普通為60cm。培育室最重要的因子是溫度，普通堅持在2027左右，具備產熱安裝，并安裝窗式或立式空調機。由于熱帶植物和寒帶植物等不同種類要求不同溫度，最好不同種類有不同的培育室。

7、室內濕度也要求恒定，相對濕度以堅持在7080為好，可安裝加濕器。控制日光照時間可安裝定時開關鐘，普通需求每天光照1016h也有的需求延續照明。現代組培實驗室大多設計為采用天然太陽光照作為主要能源，這樣不但可以節省能源，而且組培苗接受太陽光生長良好，馴化易成活。在陰雨天可用燈光作補充。4、馴化室馴化室要求清潔無菌，配有空調機、加濕器、恒溫恒濕控制儀、噴霧器、光照調理安裝、通風口以及必要的殺菌劑。二組培實驗室常用儀器設備1、常用儀器設備1超凈臺最常用最普及的無菌操作安裝,主要經過風機,送入的空氣經過細菌過濾安裝,再流過任務臺面.因此,超凈任務臺應放置在空氣干凈,地面無灰塵的地方,以延伸運用期.運用

8、過久,引起堵塞,需求清洗和改換過濾器。2高壓滅菌鍋是最根本的設備，用于培育基.器械等的滅菌。3空調機保證室內溫度，普通為252，應安頓在室內較高的位置。以便于排熱散涼。4光照培育箱用于植物資料的特定培育，可以控制溫度、濕度及光照等。5烘箱洗凈后的玻璃器皿，如需迅速枯燥，可放在烘箱內烘干，溫度以80-100為宜假設需干熱滅菌，溫度升高至150-160 ,繼續1-3小時即可6冰箱某些試劑藥品和母液需低溫保管，有些資料需低溫處置，需求運用冰箱7電子分析天平電子分析天平，用于稱取大量元素、微量元素、維生素、激素等微量藥品準確度為0.0001g；托盤天平用于稱取用量較大的糖和瓊脂等，其準確度為0.1g。

9、天平應放置在枯燥、不受震動的天平操作臺上。8顯微鏡及解剖鏡，種類較多，用于分別微莖尖可采用雙筒實體解剖鏡。雙筒解剖鏡在分別莖尖等較小組織時，便于察看、操作，通常放大5-80倍。放大40倍以上操作需求有相當熟練的技術和較好的工具。為進展操作，要有照明安裝。解剖鏡上帶有照相安裝，根據需求隨時對所需資料進展攝影記錄。9搖床與轉床用于改善液體培育資料的通氣情況及促進酶解原生質體的解離。普通在液體培育中轉速為每分鐘100次左右，在解離原生質體時為每分鐘80左右。10磁力攪拌器磁力攪拌器用于加速攪拌難溶的物質，如各種化學物質、瓊脂粉等。磁力攪拌器還可加熱，使之更利于溶解。11培育架進展固體培育和試管苗大量

10、繁衍時,需求有放置培育瓶的培育架。12酸度計組織培育中培育基pH值的準確度是非常重要的，該當運用酸度計，假設無酸度計，也可運用pH試紙進展粗測。13離心機用于搜集原生質體，轉速要求較低。普通為10004000rpm即可。三必要的器皿1、玻璃器皿長時間培育和儲存藥液用的玻璃器皿，要求由堿性溶解度小的硬質玻璃制成，而且可以耐高壓滅菌。1培育器皿裝入培育基進展植物資料的培育，根據培育目的和要求不同，可以采用不同種類和規格的玻璃器皿。試管、三角瓶或錐形瓶、培育皿。通常以紗布包被棉花塞，外面再包一層牛皮紙，用線繩或橡皮筋扎好。如今多采用聚丙烯塑料薄膜作為封口，以線繩結扎或橡皮圈箍扎。為了添加通氣性，可在

11、里面襯一層硫酸紙或牛皮紙。這樣經濟方便，且通氣好。也可采用公用的封口膜。以到達防止培育基枯燥和杜絕污染的目的。目前，培育容器和制備培育基所需的玻璃器皿逐漸被塑料器皿所替代。塑料容器具有質輕、透明、不易破碎、本錢低等優點，如培育容器多為平底方盒形，可提高培育空間利用率的植株數，并能一層層地疊摞起來，從而節約空間。這類塑料制品多是采用聚丙烯資料制成，能耐高溫，可進展高壓滅菌。有些產品為一次性耗費品，不但可節省洗滌人工，還可節省時間，提高效率。一次性塑料容器或帶螺絲帽的玻璃瓶，無須另外配蓋，運用時比較方便。2盛裝器皿配制培育基時，各種藥品的溶解，貯藏均需求各種規格的燒杯、試劑瓶等。大燒杯用于培育基的

12、熔化，本錢高，易破，可以用搪瓷盆替代。2計量器皿母液的配制、藥液的分裝、汲取需求玻璃計量器皿，如10ml、25 ml、50 ml、100 ml、200 ml、500 ml、1000 ml的量筒，25 ml、50 ml、100 ml、200 ml、500 ml、1000 ml、2000 ml的容量瓶，以及0.1 ml、0.2 ml、0.5 ml、1 ml、2 ml 、5 ml的移液管，用于配制培育基時汲取不同種類的母液。應多預備幾支，分開運用。3、其他器皿：如滴瓶、稱量瓶、玻璃棒、漏斗、玻璃管、注射器等實驗室常用器皿應具備。2、金屬器械報告：組織培育常用的金屬器械，可選用醫療器械或微生物實驗所用

13、的器械。1鑷子類：常運用醫療上的鑷子。根據操作需求有各種類型，假設用l00ml的三角瓶作為培育瓶，可用20em長的鑷子。鑷子過短容易使手接觸瓶口，呵斥污染。鑷子太長，運用起來不靈敏。2剪刀類：可采用醫療五官科用的中型剪刀。主要用于切斷莖段、葉片等。也可以用彎形剪刀，由于其頭部彎曲，可以深化到瓶口中進展剪切。3解剖刀切割較小資料和分別莖尖分生組織時，可用解剖刀。刀片要經常互換，使之堅持鋒利形狀，否那么切割時會呵斥擠壓，引起周圍細胞組織大量死亡，影響培育效果。4接種針用來轉移細胞和愈傷組織。四實驗器具的洗滌和滅菌1、器皿的清洗植物組織培育最重要的，也是最根本的要求，就是各項操作都應從無毒害、無污染

14、的培育環境來思索。培育過程中最經常、最大量的任務之一，是洗滌培育瓶及其它常用器皿。在清洗器皿處應有較大的水池，水池運用水泥制造，白瓷磚砌內外外表，池底另放一張橡膠墊，以減少器皿破損。自來水龍頭宜采用三孔鵝頸式的，用水方便，并在需求時可加裝抽濾器。下水道應暢通，以免妨礙任務。除水池外，還需輔助以假設干盆與桶。 最常用的洗滌助劑就是家庭用的洗衣粉及肥皂兩種，備一點去污粉也有些用途。假設冷的洗衣粉水效能欠佳，可以添加濃度或適當加熱。這已可以處置許多清洗中的問題。沒必要運用鉻酸-硫酸洗液，由于運用這種洗液要非常小心，而且效率也不高。洗瓶時先將瓶子在清水中泡一會兒，然后在水龍頭下涮去瓶內污物，瀝干水，泡

15、入濃洗衣粉水中，再用瓶刷沿瓶壁上下刷動和呈圓周旋轉兩個方向刷洗。瓶外也要刷到，不要留下未刷到之處。刷后放到水龍頭下用流水沖刷4次，以徹底沖去洗衣粉殘留物。洗好的瓶子應透明锃亮，內外壁水膜均一，不掛水珠，即表示無污跡存在。通常無須乎再用蒸餾水涮一遍，直接置于擱架上瀝晾水汽。也可制造晾洗架，瓶子倒放在孔格中或掛在小木棍上，這樣洗后要擺一遍瓶子，用時再收一次瓶子。急等運用的瓶子可以用烘箱烘干。烘時緩慢升溫，溫度也無須太高。新買進的瓶子亦可按上述方法處置。移液管之類的儀器，可用橡皮吸球(洗耳球)和熱洗衣粉水吸洗，再放水龍頭下流水沖凈，垂直放置晾干。帶刻度的計量儀器不宜烘烤，以免玻璃變形，影響計量的準確

16、度。如洗后急等運用，只需用要吸量的液體吸棄數次，或用95%酒精吸棄數次后，即可運用。2、滅菌1器皿和器具常用滅菌方法：1、熱壓滅菌法學習操作將洗凈的培育器皿，器具，用牛皮紙包好，放入高壓消毒鍋中，1.1壓力下滅菌2030分鐘。2、干熱滅菌法洗凈的玻璃器皿置于電熱枯燥箱中，15040分鐘或120兩小時，待冷卻后運用。二無菌室滅菌接種室、培育室1、用新潔爾滅擦抺任務臺，70%酒精擦拭超凈任務臺。2、薰蒸學習操作用甲醛、高錳酸鉀提早13天薰蒸密封房間方法1：甲醛倒入蒸發皿加熱，用量10ml/m2。方法2：甲醛HCHO與高錳酸鉀KMn4以10：1比例混合。3、接種前用7075%酒精噴霧，使飄在空氣中的

17、塵埃堆積下來。4、用紫外光燈進展照射滅菌波長26502660A最好接種箱及器具3040分鐘。三培育基滅菌略四培育資料滅菌略五任務人員無菌操作略三、作業：簡述我系組培實驗室中的各儀器及運用方法。實驗二 MS培育基母液的配制與保管一、目的要求：經過MS培育基母液的配制與保管，掌握配制與保管培育基母液的根本技藝。二、資料與器具：配制MS培育基所需的藥品、天平、燒杯、容量瓶、量筒、蒸餾水、母液瓶、標簽、冰箱等。三、實驗步驟：1、母液的配制1母液1的配制：稱量：NH4NO3 82.5g，KNO3 95g， MgSO47H2O 18.5g混合：用少量蒸餾水將藥品分別加熱溶解。然后依次混合。定容：加少蒸餾水

18、定容至1000ml，成50倍液。2母液2的配制：稱量：CaCl22H2O 22.0g定容：加蒸餾水定容至500ml，成100倍液。3母液3的配制：稱量：KH2PO48.5g 定容：加蒸餾水定容至500ml，成100倍液。4母液4的配制：稱量：Na2-EDTA 1.865 g , FeSO47H2O 1.390 g , EDTA：乙二胺四乙酸混合：用少量蒸餾水將Na2-EDTA加熱溶解后。再漸漸倒入FeSO4溶液，充分攪拌并加熱5分鐘，使其充分螯合。定容：加蒸餾水定容至500ml，成100倍液。5母液5的配制：微量稱量：H3BO30.31g ，NaMoO42H2O 0.0125g，MnSO44H

19、2O 1.115g CuSO35H2O 0.00125g，ZnSO47H2O 0.43g，CoCl26H2O 0.00125gKI0.0415g混合：用少量蒸餾水將藥品分別加熱溶解。然后依次混合。定容：加蒸餾水定容至1000ml，成50倍液。6母液6的配制：微量稱量：肌醇：5.0g，甘氨酸：0.1g,煙酸：0.025g。VB6 (鹽酸吡哆素) 0.025g , VB1鹽酸硫氨素0.005g, 混合：用少量蒸餾水將藥品分別加熱溶解。然后依次混合。定容：加蒸餾水定容至250ml，成200倍液。7植物生長調理物質母液的配制。微量稱量：生長素IAA、IBA、NAA、2,4-D或細胞分裂素(KT、ZT、

20、6-BA)50100mg，0.05g0.1g溶解：生長素IAA、IBA、NAA、2,4-D可用少量0.1mol/L的NaOH或95%的酒精溶解，細胞分裂素(KT、ZT、6-BA) 可用少量0.1mol/L的HCI加熱溶解。定容：將溶解的生長物質一滴滴倒入不斷攪拌的盛有5060ml蒸餾水的小燒杯中，然后倒入100ml容量瓶，用水沖洗小燒杯數次，最后加蒸餾水定容至100ml配制成濃度為0.51mg/ml的溶液。2、母液的保管1裝瓶：將配制好的母液分別倒入瓶中，貼好標簽，注明培育基稱號、母液號、配制倍數或濃度與配制日期。2貯藏：將母液瓶儲放在40冰箱內備用。實驗三 MS固體培育基的配制 MS培育基是

21、目前運用最普遍的培育基。其具有較高的無機鹽濃度，可以保證組織生長所需的礦質營養還能加速愈傷組織的生長。由于配方中的離子濃度高，在配制、儲存和消毒等過程中，即使有些成分略有出入，也不會影響離子間的平衡。 MS固體培育基可用于誘導愈傷組織，也可用于胚、莖段、莖尖及花藥的培育，其液體培育基用于細胞懸浮培育時能獲得明顯的勝利。MS培育基的無機營養的數量和比例比較適宜，足以滿足植物細胞在營養上和生理上的需求。因此，普通情況下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有機附加成分。和其它培育基的根本成分相比，MS培育基中的硝酸鹽、鉀和銨的含量高，這是它的顯著特點。一、目的和要求：經過MS固體培

22、育基的配制，掌握配制培育基的根本技藝。二、資料與器具：配制MS培育基的各種母液、生長調理物質母液、瓊脂粉、蔗糖、蒸餾水、移液管量筒、容量瓶、電爐、酸度計或PH試紙、0.1 mol/L的NaOH、0.1 mol/L的HCI、培育瓶、標簽、鉛筆等。三、方法與步驟：下面取的量是定容1000ml，每小瓶30ml左右，每人接種4小瓶左右。要多少ml？1、按母液順序和規定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量的蒸餾水的燒杯中。母液1 20ml 母液2 10ml 母液3 10ml 母液4 10ml母液5 20ml(假設是800倍的，母液1.25ml+水18.75ml) 母液6 5ml2、參與生長調理物質：參與的

23、詳細調理物質與量，視培育物不同而異，有時也可不加。3、參與固化劑：參與瓊脂7g。4、加糖：放入蔗糖30g。5、定容：參與蒸餾水定容至1000ml。如是固體瓊脂要加熱溶化。6、調整PH值：經酸度計或PH試紙測試，用0.1 mol/L的NaOH、0.1 mol/L的HCI把培育基的PH調整到5.86.0之間。7、培育基分注：把配制好的培育基分注到培育瓶中，100150ml的培育瓶每瓶裝入2025ml左右培育基。分注后立刻加蓋，貼上標簽，注明培育基的稱號和配制時間等。實驗四、培育基和培育器具的滅菌一、實驗目的：1、掌握高溫高壓濕熱滅菌的原理及手提式滅菌鍋滅菌操作流程。 2、 探求影響培育基滅菌效果和

24、凝固效果的主要要素。 二、 實驗原理：培育基和培育器具普通采用高溫高壓濕熱滅菌法來進展滅菌， 其滅菌原理是利用高溫高壓產生的蒸汽殺滅微生物的方法， 由于熱蒸氣具有較強穿透力 ，可使蛋白質凝固而到達滅菌的目的。 培育基高溫高壓濕熱滅菌是壓力在 0. 11-0. 15MPa(溫度為 121-126 ) ， 堅持該壓力 15-30 min， 即可到達滅菌目的。 三、 資料、 儀器與試劑 1、儀器: 高壓滅菌鍋 2、用 具: 集裝框、 手套、 計時器 四、實驗步驟 1、洗滌：把組織培育基用 的培育皿、 三角 瓶、 試管等玻璃器皿進展徹底清洗。自 然晾干或烘箱枯燥。 2、包扎：用牛皮紙、報紙、紗布或錫箔

25、紙把玻璃器皿和金屬器械分別包扎好。 3、加水：往鍋里加水至浸沒發熱管( 切忌干燒! ) 。 4、裝鍋：在滅菌鍋內 放入含培育基的培育瓶或三角 瓶、裝蒸餾水的玻璃瓶，以及包扎好的玻璃器皿和金屬器械等。 5、封鍋、 接通電源: 蓋好鍋蓋， 對角線擰緊螺旋。封鎖放氣閥和平安閥， 接通電源， 加熱。 6、排冷空氣：當壓力到達 0. 05Mpa 時，翻開手動放氣閥放冷氣， 將鍋內的冷空氣全部排出。 或將排氣閥開著，加熱，直至鍋內釋放出大量水蒸氣( 此時水蒸氣橫向噴出 ) ，再封鎖閥門 。 7、 升溫升壓: 壓力 回零后， 封鎖放氣閥， 繼續加熱加壓。8、 保溫保壓: 當壓力到達 0. 11Mpa( 溫度

26、為 121 ) 時開場計時，使壓力堅持在 0. 11-0. 15Mpa( 121-126 ) 之間，維持15-30min。 ( 假設滅菌時間過長，會使培育基中的某些成分變性失效) 9、 斷電降溫、出鍋: 滅菌終了后，斷電， 手動緩慢放氣到壓力為 0. 05 Mpa 時，才干快速放氣，當壓力降到“ 0 時翻開鍋蓋， 取出滅菌物品 。 本卷須知: 1、 培育基中含有大量有機物， 尤其是含糖量較高，為各種微生物繁殖和繁衍提供極好場所。 因此，培育基配制好必需盡早( 不能超越 24h) 進展滅菌，以保證植物組織培育的順利進展。2、滅菌鍋運用應留意: ( 1) 先翻開放氣閥， 再翻開鍋蓋。 ( 以免鍋內

27、 壓力 大而爆炸! ) ( 2) 開蓋后應盡快轉移培育瓶，使培育瓶冷卻、 凝固 。 普通應將滅菌后的培育瓶貯藏于 30 以下的室內 ， 最好貯藏在 4-10 的條件下。 ( 3) 某些生長調理劑如 IAA、 ZT、 ABA 等以及某些維生素遇熱是不穩定的， 不能同培育基一同高壓滅菌， 而需求進展過濾滅菌。 ( 4) 鍋內冷氣必需排盡， 以保證滅菌效果。 否那么， 壓力表指針雖指到一定壓力 ， 但由于鍋內冷空氣的存在而達不到要求的溫度， 很難到達徹底滅菌。 ( 5) 當到達一定壓力后， 要嚴厲遵守滅菌時間。時間過長會使一些化學物質遭到破壞，影響培育基成分; 時間短那么達不到徹底滅菌的目的。實驗五

28、 無菌操作技術一、目的和要求：經過在超凈任務臺上進展無菌操作訓練，使學生初步掌握組織培育的無菌操作技術。二、資料與器具：超凈任務臺、70%酒精、95%的酒精、盛有培育基的培育瓶已滅菌、接種器械主要指解剖刀、剪刀、鑷子等、酒精燈、培育資料根、莖、葉或種子等、0.1%的升汞或漂白粉、無菌水等。三、方法與步驟：1、用水和肥皂洗凈雙手，穿上滅菌過的公用實驗服、帽子與鞋子，進入接種室。2、翻開超凈任務臺和無菌操作室的紫外燈，照射20分鐘。3、操作前10分鐘使超凈任務臺處于任務形狀，讓過濾室空氣吹拂任務臺面和周圍的臺壁。4、照射20分鐘后，封鎖紫外燈，5、用70%的酒精燈擦拭任務臺和雙手。6、用蘸有70%

29、的酒精的紗布擦拭裝有培育基的培育器皿，放進任務臺。 7、把解剖刀、剪刀、鑷子等器械浸泡在95%的酒精中，在火焰上滅菌后，放在器械架上。8、把培育資料放進70%的酒精中浸泡30秒后。再在0.1%的升汞氯化汞中浸泡10分鐘，或在10%的漂白粉上清液中浸泡1015分鐘，浸泡時可進展攪動，使植物資料與滅菌劑有良好的接觸；然后用無菌水沖洗35次。9、用火焰燒瓶口，轉動瓶口使瓶口各部分都燒到，翻開瓶口。10、取下接種器械，在火焰上滅菌。11、把培育資料放入培育瓶，蓋上瓶口每人接種510瓶。操作期間應經常用70%酒精擦拭任務臺和雙手；接種器械應反復在95%的酒精中浸泡和在火焰上滅菌。12、接種終了后，清理和封鎖超凈任務臺。防止操作帶來的污染A、整個接種操作應在近火焰處進展，且動作要迅速正 確 錯 誤B、接種過程中盡能夠到達懸空要求防止操作帶來的污染正 確 錯 誤C、接種時不得用手接觸瓶蓋內壁或瓶口防止操作帶