1、NT-proBNP-氨基末端腦鈉肽前體胡臘英美國雅培i2000化學發光免疫分析儀運行原理美國雅培i2000胡臘英化學發光基本原理反應體系中的某種物質的分子(反應物、產物、中間體或熒光物質) 吸收了反應所釋放的能量而由基態躍遷至激發態，然后再從激發態返回基態，同時將能量以光輻射的形式釋放出來，產生化學發光。將化學發光反應應用于分析化學，根據某一時刻的發光強度或反應的發光總量來確定體系的相應組分含量的分析方法叫化學發光分析法。 A + B = C + D*（激發態分子） D*D + hv（激發態分子D*的光輻射）化學發光的反應條件（1）能快速地釋放出足夠的能量 （化學發光反應多為氧化還原反應，激發

2、能與反應能相當，DE=170300 kJ/mol）；發光位于可見光區；（2）化學反應的能量至少能被一種物質所接受并使之生成激發態；（3）激發態分子能夠以輻射躍遷的方式返回基態。化學發光分析法的特點由于化學發光分析不使用任何光源，避免了背景光和雜散光的干擾，降低了噪聲，大大提高了信噪比，因而，化學發光分析法一般都有很高的靈敏度，通常可測定納克級或皮克級的化學成分。高靈敏度測量化學發光強度，多采用光電轉換裝置，用函數記錄儀或數顯裝置，記錄化學發光的相對強度。以最大發光強度(曲線的峰高)定量被測組分的濃度。光電轉換配備微機系統，自動進樣，儲存記錄，打印結果，使化學發光分析的速度更快。全自動化學發光的

3、分類化學發光反應參與的免疫測定分為二種類型：第一種是以發光劑作為酶免疫測定的底物，通過發光反應增強測定的敏感性。如：化學發光酶免疫測定（CLEIA，與酶標ELISA法類似，即最后一步酶反應所用底物為發光劑 ） 第二種是以發光劑作為抗體或抗原的標記物，直接通過發光反應檢測標本中抗原或抗體的含量。 如：化學發光標記免疫測定亦稱化學發光免疫測定（CLIA）、電化學發光免疫測定（ECLI） ABBOTT i2000SR檢測原理Architect I系統采用化學發光微粒子免疫分析技術（Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay, CMIA）檢測樣品中的抗原，抗體和

4、分析物。即：磁性微粒子包被的捕捉分子（抗原，抗體或病毒顆粒）特異的與被分析物中抗原、抗體結合形成抗原抗體復合物，再與吖啶酯標記的連接物反應形成雙抗體夾心抗原抗體復合物。吖啶酯在過氧化氫的稀堿溶液中發生氧化還原反應生成10-甲基吖啶酮，當它恢復到基態時發光，根據發光強度可計算出分析物的濃度 。CMIA分析成份 磁性微粒子包被的捕捉分子（抗原，抗體或病毒顆粒）用于特異性的檢測被分析物。 吖啶酯標記的連接物 預激發液和激發液ABBOTT i2000SR試劑組成試劑組成 中圈（RI）：包被有抗體的順磁性微粒子內圈（R2）：吖啶酯包被的抗體外圈：樣本稀釋液預激發液：1.32%的過氧化氫激發液：0.35m

5、ol./L的氫氧化鈉清洗緩沖液：磷酸鹽緩沖液R1試劑R2試劑CMIA分析步驟1樣品與微粒子結合 在樣品檢測過程中，微粒子（磁性微粒子包被的捕捉分子）與樣品在反應杯中混合，在孵育過程中，樣品中的被分析物與微粒子上的捕捉抗原相互反應結合，形成免疫復合物。2磁石將磁性微粒子吸附孵育后，磁石將磁性微粒子（包括特異性的分析物）吸附在反應杯的管壁上，反應復合物被清洗去除未結合的物質，然后繼續進行測定。3加吖啶酯標記的連接物 反應復合物在反應杯中與吖啶酯標記的連接物反應結合，反應結束后，反應復合物被清洗去除未結合的物質。4 預激發液（H2O2）被加入進行本底讀數 預激發液具有以下功能：建立一個酸性環境，防止

6、能量的過早釋放（光發射）防止微粒子的凝集將吖啶酯從反應復合物中脫離下來，為吖啶酯的下步反應做準備然后系統在反應復合物中加入激發液（NaOH），吖啶酯在過氧化物和堿性溶液中發生氧化反應，在堿性H2O2 溶液中，分子受到過氧化氫離子進攻時，生成不穩定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解為CO2 和電子激發態的N - 甲基吖啶酮，當其回到基態時發出最大發射波長為430nm 的光子。5 檢測被分析物存在的量 要檢測被分析物存在的量，CMIA光路系統通過預先確定好的時間讀取化學發光發射的量（活動讀數），可計算分析物的濃度，或根據Index（截斷值）來定性進行判斷。項目運行方法類型一步法一步法分析需要29分鐘處理時

7、間,其中包括25分鐘孵育二步法二步法分析需要29分鐘處理時間,其中包括22分鐘孵育預先處理法預先處理法需要對樣品自動預先處理再按一步法和二步法分析樣品快速反應一步法快速反應一步法需要18分鐘處理時間,其中包括11分鐘孵育快速反應二步法快速反應二步法需要18分鐘處理時間,其中包括8分鐘孵育一步法 (iSystem) 1 在位置1加樣品到RV杯中. 在位置2試劑針R1加微粒子試劑和吖啶酯標記的連接物試劑. 在位置3振動混合樣品和試劑. 在位置4-86孵育25分鐘.一步法 (iSystem) 2 在位置87 - 90 清洗站2#清洗RV杯混合物吸走沒結合物質.一步法 (iSystem) 3 在位置9

8、4加入預激發液(Pre-trigger), 然后振動混合. 在位置98 CMIA光學系統讀空白值, 然后加入激發液(Trigger), 再測CMIA光學系統速率讀數. 在位置100液體從RV杯中廢液吸走. 在位置109退出RV杯裝置(UL)推出RV杯道廢物盒.二步法 (iSystem) 1 在位置1加樣品到RV杯中. 在位置2試劑針R1加微粒子試劑. 在位置3振動混合樣品和試劑. 在位置4 - 63孵育18分鐘.共112個RV杯空位，每18秒轉一個空位，200T/h。常規28Min/TEST二步法 (iSystem)2 在位置64 - 67清洗站1#清洗RV杯混合物吸走沒結合物質.二步法 (i

9、System) 3 在位置71試劑針R2吖啶酯標記的連接物試劑. 在位置72振動混合樣品和試劑. 在位置73 86 孵育4分鐘.二步法 (iSystem)4 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走沒結合物質.二步法 (iSystem) 5 在位置94加入預激發液(Pre-trigger), 然后振動混合. 在位置98 CMIA光學系統讀空白值, 然后加入激發液(Trigger), 再測CMIA光學系統速率讀數. 在位置100液體從RV杯中廢液吸走. 在位置109退出RV杯裝置(UL)推出RV杯道廢物盒.預先處理法Pretreatment預先處理法需要對樣品自動預先處理再按一步法和二

10、步法分析樣品,目前預先處理法如下:7分鐘預先處理14分鐘預先處理7分鐘預先處理 在位置1加樣品到RV杯中. 在位置2試劑針R1加預先處理試劑. 在位置3振動混合樣品和試劑. 在位置4 - 24孵育7分鐘. 在位置24樣品針將預先處理樣品吸到在位置1上新RV杯上. 按一步法和二步法分析樣品. 在位置24樣品針將預先處理樣品吸到在位置1上新RV杯上. 在位置2試劑針R1加預先處理試劑. 在位置3振動混合樣品和試劑. 在位置4 - 24孵育7分鐘. 在位置24樣品針將預先處理樣品吸到在位置1上新RV杯上. 按一步法和二步法分析樣品.14分鐘預先處理 在位置1加樣品到RV杯中. 在位置2試劑針R1加預

11、先處理試劑. 在位置3振動混合樣品和試劑. 在位置4 - 24孵育7分鐘.ARCHITECT維生素B12項目以一種包含樣本自動預處理的兩步免疫檢測法，測定人血清或血漿中的維生素B12。將樣本和預處理液1、2、3混合。然后，吸取部分預處理的樣本至新的反應杯（RV）內。將預處理的樣本和項目稀釋液、內因子包被的順磁微粒子混合。樣本中存在的B12結合到內因子包被的微粒子上。沖洗后進入第二步，加入吖啶酯標記的B12結合物。接著向反應混合物中加入預激發液和激發液；測量產生的化學發光反應，以相對發光單位（RLUs）表示。樣本中的B12含量與ARCHITECT i光學系統檢測到的RLUs值之間成反比。快速反應

12、一步法 (iSystem) 1 在位置47快速反應針加樣品到RV杯中. 在位置48試劑R2針加微粒子和吖啶酯標記的連接物試劑. 在位置49振動混合樣品和試劑. 在位置50-86孵育11分鐘.快速反應一步法 (iSystem)2 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走沒結合物質.快速反應一步法 (iSystem)3 在位置94加入預激發液(Pre-trigger), 然后振動混合. 在位置98 CMIA光學系統讀空白值, 然后加入激發液(Trigger), 再測CMIA光學系統速率讀數. 在位置100液體從RV杯中廢液吸走. 在位置109退出RV杯裝置(UL)推出RV杯道廢物盒.快速

13、反應二步法 (iSystem)1 在位置47快速反應針加樣品到RV杯中. 在位置48試劑R2針加微粒子和吖啶酯標記的連接物試劑. 在位置49振動混合樣品和試劑. 在位置50-63孵育4分鐘.快速反應二步法 (iSystem) 2 在位置64 - 67清洗站1#清洗RV杯混合物吸走沒結合物質.快速反應二步法 (iSystem) 3 在位置71試劑針R2吖啶酯標記的連接物試劑. 在位置72振動混合樣品和試劑. 在位置73 86 孵育4分鐘.快速反應二步法 (iSystem) 4 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走沒結合物質.快速反應二步法 (iSystem) 5 在位置94加入預激發液(Pre-trigger), 然后振動混合. 在位置98 CMIA光學系統讀空白值, 然后加入激發液(Trigger), 再測CMIA光學系統速率讀數. 在位置100液體從RV杯中廢液吸走. 在位置109退出RV杯裝置(UL)推出RV杯道廢物盒.i系統光學測量光學測量元件1. 光學倍增管 (PMT) 2. CMIA 讀數器 3. 光路管 4. 激發液(Trigger)噴頭5.