1、第十二章維生素類藥物的分析維生素類藥物的分析(4)維生素： 是維持人體正常代謝機能所必需的微量營養物質。 人體不能合成維生素 VitA、D、 E、K等 脂溶性水溶性 VitB VitC、葉酸、煙酸維生素類藥物的分析(4)-H 維生素A醇-COCH3 維生素A醋酸酯-COC15H31 維生素A棕櫚酸酯R :第一節 維生素A維生素類藥物的分析(4)溶解性（一）不溶于水易溶于有機溶劑和植物油等性質一、維生素類藥物的分析(4)為一個具有共軛多烯側鏈的 環己烯（二） 具有UV吸收 325-328nm VA主要為全反式VA,存在多種立體異構化合物,如：新維生素Aa,新維生素Ab,新維生素Ac,異維生素Aa

2、，異維生素Ab 維生素類藥物的分析(4)維生素A 325.5 100% 新維生素Aa 328 75%新維生素Ab 320.5 24%新維生素Ac 310.5 15%異維生素Aa 323 21%異維生素Ab 324 24% 相對生物效價維生素類藥物的分析(4)VitA2VitA3 易發生脫氫、脫水、聚合反應維生素類藥物的分析(4)鯨醇維生素類藥物的分析(4) 或有金屬離子存在時氧化維生素A醋酸酯在臨床上較常用共軛多烯側鏈 易被氧化（三）維生素類藥物的分析(4)環氧化物VitA醛VitA酸維生素類藥物的分析(4)（四）與三氯化銻發生呈色反應CHCl3維生素類藥物的分析(4)三氯化銻反應（一）無醇C

3、HCl3鑒別二、維生素類藥物的分析(4)藍色紫紅條件 無水無醇三氯化銻水解生成氯化氧銻乙醇可與C+作用而使正電荷消失維生素類藥物的分析(4)方法 取維生素A油溶液1d， 加氯仿10 ml，振搖溶解，取出兩滴，加氯仿2 ml，與25%三氯化銻氯仿液0.5 ml反應，成藍色，漸成紫紅。維生素類藥物的分析(4) BP（2005）max為326nm一個吸收峰UV法（二）max為350390nm三個吸收峰且在332nm的波長處有較低的吸收峰或拐點維生素類藥物的分析(4)去水VitA（VitA3）VitAHCl維生素類藥物的分析(4)討論 維生素 A有五個共扼雙鍵，無水乙醇溶液在 326 nm處有最大吸收

4、，鹽酸催化加熱脫水，成6個雙鍵，故，波長紅移，同時在350-390之間出現3個吸收峰。維生素類藥物的分析(4)max為326nm一個吸收峰max為350390nm三個吸收峰維生素類藥物的分析(4)USP 顯色劑 磷鉬酸 規定斑點顏色和Rf值BP 顯色劑 三氯化銻（三） TLC法對照品法維生素類藥物的分析(4) VitA在325-328nm處有最大吸收,可用于含量測定.但是含有立體異構體;氧化降解產物;光照產物；合成中間體; 副產物;稀釋用油等雜質會有紫外吸收,干擾VitA在紫外區的測定.為了得到準確的測定結果，消除非VitA產生的無關吸收所引起的誤差，故采用“三點校正法”測定。 (一)UV法

5、（三點校正法）三. 含量測定維生素類藥物的分析(4) 三點校正法1. 測定原理：本法是在三個波長處測得吸收度，根據校正公式計算吸收度A校正值后，再計算含量，故本法稱為“三點校正法”。主要基于以下兩點：（1）雜質的吸收在310340nm波長范圍內幾乎呈一條直線，且隨波長的增大吸收度減小；（2）物質對光的吸收具有加和性。維生素類藥物的分析(4)2. 波長的選擇：（1） 三點波長的選擇原則為：一點選擇在Va的最大吸收波長處（即1 ） VitA的max（2） 2 3 分別在1的兩側各選一點維生素類藥物的分析(4)測定對象 純度高的VitA醋酸酯第一法 等波長差法3-1=1-21=328nm 2=316

6、nm 3=340nm =12nm維生素類藥物的分析(4)第二法 等吸收度法(皂化法)測定對象 VitA醇1=325nm 2=310nm 3=334nm維生素類藥物的分析(4)測定法（1）基本步驟:第一步 A值的選擇要求：所選A值中雜質的干擾已基本消除維生素類藥物的分析(4)維生素A的含量用生物效價即國際單位（IU/G）表示。維生素A的國際單位表示如下：維生素類藥物的分析(4)/IU維生素類藥物的分析(4)注意： C 為混合樣品的濃度 第二步 求維生素類藥物的分析(4)第三步 換算因子維生素A的含量用生物效價即國際單位（IU/G）來表示。維生素A的國際單位表示如下：換算因子的定義為單位 所相當的

7、效價維生素類藥物的分析(4)/IU維生素類藥物的分析(4)/IU維生素類藥物的分析(4)第四步：求標示量維生素類藥物的分析(4) 方法：（2） 第一法 維生素A醋酸酯維生素類藥物的分析(4) 判斷 是否在326329nm之間改用第二法是否 求算 并與規定值比較維生素類藥物的分析(4) 規定值 差值維生素類藥物的分析(4) 判斷差值是否超過有一個以上超過無超過 計算 A328（校正） 用A328計算維生素類藥物的分析(4)03%15%3%第二法第二法維生素類藥物的分析(4) VitAD膠丸中VitA的含量測定 精密稱取本品(規格10000VitAIU/丸)裝量差異項下（平均裝量0.08262g/

8、丸）的內容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用環己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用環己烷稀釋至刻度，搖勻。以環己烷為空白，測定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測得吸收度為維生素類藥物的分析(4)A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300 /A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 求本品中維生素A的含量？維生素類藥物的分析(4)A300 /A328 ：0.564A

9、316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 =維生素類藥物的分析(4)維生素類藥物的分析(4)適用于維生素A醇（等吸收度法也稱為皂化法） 第一法無法消除雜質干擾時用此法（3）第二法維生素類藥物的分析(4)水溶性脂溶性維生素類藥物的分析(4) 判斷max是否在323327nm之間取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定 計算是否維生素類藥物的分析(4) 判斷 A300 /A325 是否小于或等于0.73是否

10、取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定 計算A325(校正)維生素類藥物的分析(4)03%3%維生素類藥物的分析(4)（二）三氯化銻比色法標準曲線法1.原理：維生素A與三氯化銻的無水氯仿溶液作用,產生不穩定的藍色,在618nm620nm波長處有最大吸收,符合Beer定律.2.方法：取維生素A對照品，制成系列濃度的氯仿溶液，加入一定量的三氯化銻無水氯仿溶液，在5s 10s內,于620nm波長處測定吸收度，繪制標準曲線。按同法測定供試液的吸收度，根據標準曲線計算含量。維生素類藥物的分析(4)3.注意事項：呈色不穩定, 要求操作迅速。一般規定加入三氯化銻后應在5s 10s內測定水分干擾測定,三氯化銻水解

11、產生SbOCl而使溶液渾濁，影響比色溫度影響較大,樣品測定時的溫度與繪制標準曲線溫差1專屬性差,常使測定結果偏高三氯化銻有腐蝕性維生素類藥物的分析(4) 氨基嘧啶環CH2噻唑環(季銨堿)連接而成的季銨類化合物HClCl-第二節 維生素B1的分析(鹽酸硫胺)維生素類藥物的分析(4) 二 、性質（一） 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性（二） 硫色素反應：噻唑環在堿性介質中開環，再與嘧啶環上的氨基環合，經鐵氰化鉀等氧化劑氧化成具有熒光的硫色素。 維生素類藥物的分析(4)嘧啶環 伯氨噻唑環 季銨1、可與酸成鹽2、與生物堿3、含量測定 非水堿量法（四）堿性（三）UV 共軛雙鍵max = 246nm維生素類

12、藥物的分析(4)ChP鑒別試驗二、（一）硫色素反應維生素類藥物的分析(4)維生素類藥物的分析(4)硫色素(O)維生素類藥物的分析(4)方法 取本品約5mg，加氫氧化鈉2.5ml，加鐵氰化鈉試液0.5ml與正丁醇5ml,強烈振搖2min,放置分層，上面醇層顯強烈藍色熒光。加酸消失，再加堿又重現。專屬性反應。維生素類藥物的分析(4)(二) 沉淀反應 VitB1H+H+H+H+維生素類藥物的分析(4)S元素反應Cl-反應（三）其他反應維生素類藥物的分析(4)三、含量測定喹那啶紅亞甲藍（紫紅天藍）（一）非水溶液滴定法原理：維生素B1分子含有2個堿性的已成鹽的伯胺和季銨基團，在非水溶液中均與HClO4作

13、用，根據消耗HClO4的量可以計算維生素B1的含量。維生素類藥物的分析(4)討論：1.加入Hg(Ac)2溶液2. 有2個堿性基團，與HClO4比例1：23.用本法替代硅鎢酸重量法維生素類藥物的分析(4)(二)UV ChP片劑、注射劑= 421（每片）相當于標示量的%=A = ECL W D維生素類藥物的分析(4)注射劑（每ml）相當于標示量的%=規格g/mlml VD維生素類藥物的分析(4)（一）結構 為L-抗壞血酸，在化學結構上和糖類似。有4種光學異構體，L構型的右旋體活性最強。具有二烯醇的結構，具有內酯環，具有兩個手性碳（C4，C5），性質活潑。L抗壞血酸第三節 維生素C維生素類藥物的分析

14、(4)（二）性質溶解性易溶于水，水溶液呈酸性；在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。維生素類藥物的分析(4) 2 酸性C3OH的酸性較強。pK1 = 4.17，C2OH的酸性較弱pK2 = 11.57。故表現為一元酸的性質。能與碳酸氫鈉成鈉鹽。維生素類藥物的分析(4)二烯醇結構二酮基結構強還原性二烯醇結構的還原性極強。維生素類藥物的分析(4)有活性有活性無活性L抗壞血酸去氫抗壞血酸二酮古洛糖酸維生素類藥物的分析(4)光學活性手性C（C4、C5）L(+)抗壞血酸活性最強*維生素類藥物的分析(4)5 水解性維生素類藥物的分析(4)維生素類藥物的分析(4)506 具糖的性質 結構與糖類相似 有糖類的顯色

15、反應水解、脫羧維生素類藥物的分析(4)7 紫外特征243nm或中性維生素類藥物的分析(4)二. 鑒別試驗(一)與氧化劑反應維生素類藥物的分析(4)1、與AgNO3反應 (ChP2005) 2、與2，6 - 二氯靛酚反應(ChP2005)氧化型玫瑰紅色還原型藍色OH維生素類藥物的分析(4)（玫瑰色）（無色）3、與堿性酒石酸銅反應 USP4、與KMnO4反應維生素類藥物的分析(4)糖類的反應（二）或鹽酸50吡咯USP維生素類藥物的分析(4)維生素類藥物的分析(4)（藍色）(糠醛)（戊糖）50(吡咯)脫羧維生素類藥物的分析(4)(三)UV (BP)維生素C 在0.01mol/L HCl中,在243n

16、m有最大吸收維生素類藥物的分析(4)指示劑 淀粉指示液三 含量測定(一)碘量法1.原理維生素C在醋酸酸性條件下,可被碘定量氧化.根據消耗碘的體積,可以計算維生素C的含量維生素類藥物的分析(4)H+維生素類藥物的分析(4) 取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍色，在30秒內不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當于8.806mg的C6H8O62. 方法維生素類藥物的分析(4)3.討論（1）酸性環境 d . HAc 減慢VitC被O2氧化速度（2）新沸冷H2O 趕走水中O2（3）立即

17、滴定 減少O2的干擾維生素類藥物的分析(4)（4）附加劑干擾的排除片劑 滑石粉 過濾注射劑 抗氧劑 丙酮Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 維生素類藥物的分析(4)(二) 2，6 - 二氯靛酚滴定法1.原理自身指示終點法終點： 顯示過量的2，6 - 二氯靛酚的顏色（粉紅色）2.方法維生素類藥物的分析(4)（定量過量）（測剩余染料）3. 討論（1）酸性環境 HPO3-HAc 穩定VitC（2）快速滴定 2min內 防止其他還原性物質干擾（3）剩余比色測定維生素類藥物的分析(4)（4）缺點不穩定 需經常標定 貯備液 貯存一周維生素類藥物的分析(4)*第三節 維生素E的分析苯

18、并二氫吡喃醇的衍生物苯環上有一個乙酰化的酚羥基，故又稱生育酚醋酸酯主要有，等異構體，其中以-異構體的生理活性最強。結構分3部分：苯環+二氫吡喃環+飽和烴鏈維生素類藥物的分析(4)生物效價 右旋體 :消旋體 = 1.4 ：10 （天然品） （合成品）dl生育酚醋酸酯維生素類藥物的分析(4)一、性質1、溶解性 為微黃色或黃色透明的粘稠液體， 易溶于有機溶劑，不溶于水2、UV 苯環3、酯鍵 易水解生成游離生育酚4、氧化性 維生素E在無氧條件下對熱穩定,加熱200也不破壞，但對氧十分敏感，遇光、空氣可被氧化。其氧化產物為-生育醌或-生育酚二聚體。維生素類藥物的分析(4)二、鑒別試驗（一）硝酸反應橙紅色

19、75,15維生素類藥物的分析(4)（橙紅色）生育紅生育酚HNO3強氧化劑維生素類藥物的分析(4) 取本品約30mg，加無水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，搖勻，在75加熱15分鐘，溶液應顯橙紅色。維生素類藥物的分析(4)（二）三氯化鐵聯吡啶反應原理：維生素E在堿性條件下，水解生成游離的生育酚，生育酚經乙醚提取后，可被FeCl3氧化生成對-生育醌，同時Fe3+ 被還原為Fe2+， Fe2+ 與聯吡啶生成紅色的配位離子。維生素類藥物的分析(4)生育酚對-生育醌O弱氧化劑Fe2+ +維生素類藥物的分析(4)紅色維生素類藥物的分析(4) = 41.045.5max = 284nmmin = 254n

20、m(三)UV法VE0.01%無水乙醇溶液維生素類藥物的分析(4)薄層板 硅膠G展開劑 環己烷 -乙醚（4 ：1）顯色劑 硫酸（105 5） VitE Rf = 0.7(四) TLC法維生素類藥物的分析(4)游離生育酚 利用游離生育酚的還原性，可被硫酸鈰定量氧化。故在一定條件以消耗硫酸鈰滴定液體積來控制游離生育酚的限量。 檢查 三、原理（一）中國藥典采用硫酸鈰滴定法檢查制備過程中未酯化的生育酚維生素類藥物的分析(4)硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黃灰紫）（二）試劑維生素類藥物的分析(4)（M生育酚= 430.8）例 取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸

21、鈰液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）不得過 1.0ml。維生素類藥物的分析(4)2.15限量（三）維生素類藥物的分析(4)藥典規定消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）1.0ml若硫酸鈰液濃度不是0.01mol/L，應重新計算硫酸鈰的消耗量維生素類藥物的分析(4)四、含量測定GC法（Ch.P、USP、BP）（一）GC特點1、選擇性好靈敏度高速度快分離效能好揮發性低、不穩定、極性強的藥物不適宜用GC 法，VE沸點達350，但可以不經衍生化直接用GC法維生素類藥物的分析(4)載氣N2固定液硅酮（OV-17）擔體硅藻土或高分子多孔小球柱溫265檢測器氫火焰離子化檢測器(FI

22、D)內標正三十二烷 R2VitE測定的色譜條件2、內標法加校正因子維生素類藥物的分析(4)維生素類藥物的分析(4)內標法供試液（樣品+內標）內標物對照液（對照+內標）是樣品中不存在的物質與被測組分峰靠近能與各組分完全分離與被測組分的量接近維生素類藥物的分析(4)BP GC 內標 正三十二烷 R1.4USP GC 內標 十六酸十六醇酯 R1.0JP HPLC 外標 R2.6維生素類藥物的分析(4)樣品 dl生育酚固定相十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相甲醇-水（49 ：1）檢測波長292nm R 2.6JP - RP - HPLC法（外標法）（二）維生素類藥物的分析(4) 在三氯醋酸或鹽酸存在下，經 水

23、解、脫羧、失水后，加入吡 咯即產生藍色產物的藥物應是 A. 氯氮卓 B. 維生素A C. 普魯卡因 D. 鹽酸嗎啡 E. 維生素C維生素類藥物的分析(4)中國藥典采用 以下何法測定維生素E含量 A. 酸堿滴定法 B. 氧化還原法 C. 紫外分光光度法 D. 氣相色譜法 E. 非水滴定法維生素類藥物的分析(4)中國藥典采用 氣相色譜法測定維生素E含 量，內標物質為 A. 正二十二烷 B. 正二十六烷 C. 正三十烷 D. 正三十二烷 E. 正三十六烷 維生素類藥物的分析(4)下列藥物的堿性溶液，加入 鐵氰化鉀后，再加正丁醇， 顯藍色熒光的是 A. 維生素A B. 維生素B1 C. 維生素C D.

24、 維生素D E. 維生素E維生素類藥物的分析(4)既具有酸性又具有還原性的 藥物是 A. 維生素A B. 咖啡因 C. 苯巴比妥 D. 氯丙嗪 E. 維生素C維生素類藥物的分析(4)維生素C的鑒別反應，常采 用的試劑有 A. 堿性酒石酸銅 B. 硝酸銀 C. 碘化鉍鉀 D. 乙酰丙酮 E. 三氯醋酸和吡咯維生素類藥物的分析(4)測定維生素C注射液的含量 時，在操作過程中要加入 丙酮，這是為了 A. 保持維生素C的穩定 B. 增加維生素C的溶解度 C. 使反應完全 D. 加快反應速度 E. 消除注射液中抗氧劑的干擾維生素類藥物的分析(4)能發生硫色素特征反應的藥物 是 A. 維生素A B. 維生

25、素B1 C. 維生素C D. 維生素E E. 煙酸維生素類藥物的分析(4) 可發生以下反應或現象的藥物為 A.維生素B1 B.維生素C C.兩者均能 D.兩者均不能與碘化汞鉀生成黃色沉淀在乙醚中不溶與2,6-二氯靛酚反應使顏色消失硫色素反應ACBA維生素類藥物的分析(4)維生素A的鑒別試驗為 A. 三氯化鐵反應 B. 硫酸銻反應 C. 2,6-二氯靛酚反應 D. 三氯化銻反應 E. 間二硝基苯的堿性乙醇液反 應維生素類藥物的分析(4)中國藥典規定維生 素A的測定采用紫外分光光度法 （三點校正法），此法又分為 A等波長差法 B等吸收比法 C皂化法 D差示分光法 E雙波長法維生素類藥物的分析(4)

26、用三點校正法（三波長校正法）測定維生素醋酸酯含量時，采用未校正吸收度（實測值）計算含量，必須滿足以下條件：A 在環己烷溶液中，最大吸收波長在326-329nm之間B 在異丙醇溶液中，最大吸收波長在326-329nm之間C 在各測定波長處的吸收度與328nm波長處的吸收度比值的規定值之差在-0.02-+0.02之間D 校正吸收度與未校正吸收度之差在未校正吸收度的3%之間E 校正吸收度與未校正吸收度之差在未校正吸收度-15% -3%之間維生素類藥物的分析(4)用三點校正法（三波長校正法）測定維生素醋酸酯含量時，以下敘述正確的是A 原理是維生素A可以與三氯化銻反應顯色B 雜質吸收在測定波長范圍內為線性，且隨波長增加吸收度增強。C 當最大吸收波長在326-329nm之間時，不一定不需皂化處理。D 當校正吸收度與未校正吸收度之差在未校正吸收度的3%以內時，使用校正吸收度計算含量維生素類藥物的分析(4)維生素E的鑒別試驗有 A硫色素反應 B硝酸氧化呈色反應 C硫酸-乙醇呈色反應 D堿性水解后加三氯化鐵乙醇