1、會計學1外周血循環腫瘤細胞檢測技術外周血循環腫瘤細胞檢測技術(jsh)進展進展第一頁，共38頁。第1頁/共37頁第二頁，共38頁。Ashworth TR. Aust Med J, 1869, 14: 146-147Allard WJ, Matera J, Miller MC, et al. Clin Cancer Res, 2004, 10: 6897-6904第2頁/共37頁第三頁，共38頁。第3頁/共37頁第四頁，共38頁。CTCs的臨床意義的臨床意義第4頁/共37頁第五頁，共38頁。CTCs的臨床意義的臨床意義第5頁/共37頁第六頁，共38頁。CTCs的臨床意義的臨床意義第6頁/共37頁

2、第七頁，共38頁。CTCs的臨床意義的臨床意義第7頁/共37頁第八頁，共38頁。CTCs的臨床意義的臨床意義第8頁/共37頁第九頁，共38頁。第9頁/共37頁第十頁，共38頁。CTC的的檢測步檢測步驟驟檢測檢測富集富集第10頁/共37頁第十一頁，共38頁。以特異性抗體(kngt)經抗原抗體(kngt)吸附篩選根據細胞大小(dxio)進行富集免疫(miny)細胞化學結合納米材料物理學免疫學免疫/化學第11頁/共37頁第十二頁，共38頁。陽性選擇法陽性選擇法MACS、Cellsearch系統系統(xtng)以及以及CTC-Chip陰性陰性(ynxng)排除法排除法CD45磁珠去除白細胞（磁珠去除白

3、細胞（IMB法）法）抗原抗體吸附篩選抗原抗體吸附篩選第12頁/共37頁第十三頁，共38頁。第13頁/共37頁第十四頁，共38頁。分子生物分子生物學方法學方法(fngf)(PCR)CTC檢測檢測免疫細胞免疫細胞化學方法化學方法(ICC(ICC、 EPISPOT)EPISPOT)流式細胞流式細胞技術技術(jsh)第14頁/共37頁第十五頁，共38頁。CellTracks AutoPrep System第15頁/共37頁第十六頁，共38頁。第16頁/共37頁第十七頁，共38頁。1 1、不同腫瘤表面抗體的表達、不同腫瘤表面抗體的表達(biod)(biod)量存在差異量存在差異 2 2、腫瘤發展過程中細

4、胞的去上、腫瘤發展過程中細胞的去上皮化皮化 CTC研究研究(ynji)現狀現狀第17頁/共37頁第十八頁，共38頁。 CTC方法學現狀方法學現狀(xinzhung)第18頁/共37頁第十九頁，共38頁。第19頁/共37頁第二十頁，共38頁。Sekine J, et al. Adv Mater, 2011, 23 (41):4788-4792Zhang N, et al. Adv Mater, 2012, 24 (20):2756-2760第20頁/共37頁第二十一頁，共38頁。腫瘤細胞和正常細胞在粗糙表面上具有不同的黏附特性，利用納米(n m)粗糙表面(如功能化的納米(n m)線、納米(n m

5、)柱)分離血液中的CTCChen W Q,et al. ACS Nano, 2013, 7 (1): 566-575第21頁/共37頁第二十二頁，共38頁。Hou S, et al. Adv Mater, 2013, 25(11): 1547-1551第22頁/共37頁第二十三頁，共38頁。第23頁/共37頁第二十四頁，共38頁。第24頁/共37頁第二十五頁，共38頁。獲獲被捕獲的細胞分布在微流芯片被捕獲的細胞分布在微流芯片三維空間內三維空間內納米技術納米技術(jsh)與微流控技術與微流控技術(jsh)結合結合第25頁/共37頁第二十六頁，共38頁。第26頁/共37頁第二十七頁，共38頁。第2

6、7頁/共37頁第二十八頁，共38頁。第28頁/共37頁第二十九頁，共38頁。第29頁/共37頁第三十頁，共38頁。A) The HB-Chip consists of a microfluidic array of channels with a single inlet and exit. Inset illustrates the uniform blood flow through the device. (B) A micrograph of the grooved surface illustrates the asymmetry and periodicity of the her

7、ringbone grooves. Cartoon illustrating the cell-surface interactions in (C) the HB-Chip, and (D) a traditional flat-walled microfluidic device. Flow visualization studies using two paired streams of the same viscosity (one stream is green, the other clear) demonstrate (E) the chaotic microvortices g

8、enerated by the herringbone grooves, and the lack of mixing in (F) traditional flat-walled devices. 舊方法舊方法(fngf):(fngf):病人血液病人血液樣本通過一種表層涂有抗樣本通過一種表層涂有抗體的硅芯片，該抗體與腫體的硅芯片，該抗體與腫瘤細胞結合，血液平滑流瘤細胞結合，血液平滑流過過micropostsmicroposts限制了與抗限制了與抗體覆蓋層的接觸。體覆蓋層的接觸。新方法新方法(fngf)(fngf)：將血液：將血液標本經過一個人字形溝槽標本經過一個人字形溝槽，可快速混合液體，并

9、產，可快速混合液體，并產生一個更亂的血流，顯著生一個更亂的血流，顯著增加捕獲細胞的數量。增加捕獲細胞的數量。Toner M, et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010，107(43):18392-7第30頁/共37頁第三十一頁，共38頁。Blood from metastatic prostate cancer patients and healthy donors was processed using the HB-Chip. (A) Healthy donors (n = 10, red circles) were used to select the

10、signal intensity threshold in our automated imaging system (19). The metastatic prostate cancer patient data (n = 15, green circles) had significantly higher results, with 14 15 patient samples presenting CTCs above-threshold levels. Additionally, (B) the TMPRSS2-ERG fusion transcript was detected f

11、rom RNA isolated from the HB-Chip, using RT-PCR. Sequencing of the gel band identified the rare gene fusion of TMPRSS2 exon 1 and ERG exon 5. (C and D) Micrographs of CTCs isolated from patients with metastatic prostate cancer costained using antibodies against PSA (green), a leukocyte marker, CD45

12、(red), and a nuclear stain (DAPI). Corresponding micrographs of the same cells are shown to the right of the fluorescent images, demonstrating their appearance after subsequent staining with H and E. (Scale bars: 10 m). Toner M, et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010，107(43):18392-7第31頁/共37頁第三十二頁，共38頁。Toner M, et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010，107(43):18392-7第32頁/共37頁第三十三頁，共38頁。Shen Q, et al. Adv Mater, 2013, 25(16): 2368-2373第33頁/共37頁第三十四頁，共38頁。第34頁/共37頁第三十五頁，共38頁。第35頁/共37頁第三十六頁，共38頁。第36頁/共3