1、啤酒檢驗(yàn)手冊（微生物檢驗(yàn)部分）目錄A、半成品質(zhì)量檢驗(yàn)一、冷麥汁2二、發(fā)酵酒2三、貯酒4四、一濾酒6五、清酒7B、成品質(zhì)量檢驗(yàn)8C、原輔材料質(zhì)量檢驗(yàn)13附錄1:培養(yǎng)基、中和劑及染色劑的配制和染色方法15附錄2:玻璃器皿的洗滌、包扎與滅菌19附錄3:無菌吸樣要求19附錄4:大腸菌群最可能數(shù)（MPN檢索表20A、半成品質(zhì)量檢驗(yàn)一、冷麥汁1、抽樣方法1.1 傳統(tǒng)發(fā)酪1.1.1 每班至少抽檢一批。1.1.2 取樣時(shí)先打開取樣閥排放少量液體，后用70-75%的酒精由內(nèi)至外消毒取樣閥，再用火焰滅菌（酒精火焰外焰灼燒15秒以上）。重新打開閥門排放樣品，待閥門冷卻后，取150200ml入已滅菌的三角瓶。1.2

2、錐形罐發(fā)酪逐批抽檢，取樣方法同A、1.1.22、檢驗(yàn)項(xiàng)目好氣菌（每班至少抽檢一批）厭氣菌（每天至少抽檢一批，原則上由日班完成）注：停產(chǎn)搞衛(wèi)生后的第一批麥汁一定要抽樣檢驗(yàn)好氣菌和厭氣菌。3、檢驗(yàn)方法3.1 好氣菌：無菌操作吸取1ml樣品加入已滅菌的平皿內(nèi)，及時(shí)將冷卻至45±1C（手感不燙手）的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿10-15ml,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1C的電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24或48士2小時(shí)后，在菌落計(jì)數(shù)器上計(jì)菌落總數(shù)，結(jié)果即是每毫升樣品中所含的好氣菌數(shù)。3.2 厭氣菌：無菌操作吸取1ml樣品加入已滅菌的平皿內(nèi)，及時(shí)將冷卻至45±

3、1C的UBAD（或NBBD）培養(yǎng)基注入平皿10-15ml,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。待培養(yǎng)基凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置25±1C的厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)57天后，在菌落計(jì)數(shù)器上計(jì)菌落總數(shù)，結(jié)果即是每毫升樣品中所含的厭氣菌數(shù)。4、結(jié)果處理4.1 檢驗(yàn)結(jié)果以電腦報(bào)告單或書面報(bào)告單的形式報(bào)給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部和釀造部。二、發(fā)醉酒1、抽樣方法1.1 傳統(tǒng)發(fā)酯1.1.1 0代的酵母，半罐即取樣；滿罐1小時(shí)后再取樣。1代以上（包括1代）的酵母滿罐1小時(shí)后取樣。取樣時(shí)先打開取樣閥排放少量液體，后用70-75%的酒精由內(nèi)至外消毒取樣閥，再用火焰滅菌（酒精火焰外焰灼燒15秒以上）。重新打開閥門排放樣品，待閥門冷卻后，取

4、150200ml入已滅菌的三角瓶。1.1.2 滿罐56小時(shí)后再取前酵液150200ml檢測高泡時(shí)期的酵母數(shù)。1.2 錐形罐發(fā)酪1.2.1 0代的酵母，添加第一批麥汁后1小時(shí)及滿罐后1小時(shí)取樣；1代以上（包括1代）的酵母滿罐1小時(shí)后取樣。無菌操作取樣，方法同A、1.1.2。1.2.2 滿罐的第四日取樣檢測厭氧菌，方法同A、1.1.2。1.2.3 滿罐的第20日取發(fā)酵液150200ml檢測酵母數(shù)和死亡率。2、檢驗(yàn)項(xiàng)目2.1 傳統(tǒng)發(fā)酪2.1.1 每罐檢驗(yàn)項(xiàng)目：酵母數(shù)、出芽率、酵母形態(tài)及厭氣菌；高泡期酵母數(shù)。2.1.2 抽檢項(xiàng)目：0代酵母逐罐檢驗(yàn)死亡率及好氣菌；1代以上（包括1代）每月至少抽4罐檢驗(yàn)好

5、氣菌及死亡率。2.2 錐形罐發(fā)酪2.2.1 每罐檢驗(yàn)項(xiàng)目：酵母數(shù)、出芽率、死亡率、酵母形態(tài)、好氣菌及厭氣菌；2.2.2 抽檢項(xiàng)目：20天后的酵母數(shù)；（0代的酵母逐罐檢驗(yàn)，0代以上的酵母抽檢的罐數(shù)不少于當(dāng)日滿罐總數(shù)的50%）20天后的死亡率（0代的酵母逐罐檢驗(yàn)，0代以上的酵母每月至少抽檢4罐）3、檢驗(yàn)方法3.1 好氣菌：同A、一、3.1中好氣菌的檢驗(yàn)方法3.2 厭氣菌：同A、一、3.2中厭氣菌的檢驗(yàn)方法3.3 酵母形態(tài)與死亡率：取1:5000的美藍(lán)染色液一滴，滴在一塊潔凈的載玻片中央，用滴管或玻棒加一滴酵母懸浮液，混合均勻，染色3分鐘后蓋上蓋玻片制成水浸片，鏡檢（在3分鐘內(nèi)用高倍鏡觀察）。染上藍(lán)

6、色的細(xì)胞是死細(xì)胞，未著色的是活細(xì)胞。用血球分類計(jì)算器計(jì)出死亡酵母數(shù)與酵母細(xì)胞總數(shù)（檢酵母死亡率時(shí)，要求每個(gè)視野不少于50個(gè)酵母，數(shù)1000個(gè)以上酵母個(gè)數(shù)）。同時(shí)觀察酵母形態(tài)，主要觀察酵母的形狀、大小、內(nèi)含物、液泡及細(xì)胞壁。（單純觀察酵母形態(tài)時(shí)可以用蒸儲(chǔ)水代替美藍(lán)染色死亡酵母數(shù)酵母死亡率（）=X100（計(jì)算結(jié)果保留一位小數(shù)）酵母細(xì)胞總數(shù)3.4 酵母數(shù)與出芽率：3.4.1 計(jì)酵母數(shù)時(shí)一般要求用2%的H2SO4稀釋10倍（1ml酵母液加入9ml2%H2SO4）,使血球計(jì)數(shù)板每個(gè)小方格中平均46個(gè)細(xì)胞為宜。但酵母含量少時(shí)不用稀釋。3.4.2 取一塊潔凈的血球計(jì)數(shù)板，在中央計(jì)數(shù)區(qū)的上方加蓋一塊潔凈的蓋玻

7、片。3.4.3 用滴管或玻棒取酵母懸浮液滴于蓋玻片的邊緣，讓菌液靠毛細(xì)作用滲入計(jì)數(shù)室，注意不得有氣泡產(chǎn)生。將計(jì)數(shù)板置于顯微鏡的載物臺(tái)上，靜止5分鐘，使酵母細(xì)胞全部沉降到計(jì)數(shù)板的表面。3.4.4 分別統(tǒng)計(jì)5個(gè)中方格（左上、右上、左下、右下、中央）中細(xì)胞總數(shù)及芽體數(shù)，酵母菌的芽在未脫離母細(xì)胞前，若已達(dá)母細(xì)胞的1/2大小，則不作為芽體而作為成熟的細(xì)胞計(jì)數(shù)。在計(jì)數(shù)時(shí)，若遇到位于中方格間線上的細(xì)胞，只統(tǒng)計(jì)位于左線及下線上且在線內(nèi)的體積不少于一半的細(xì)胞。為盡量減少實(shí)驗(yàn)誤差，對同一樣品血球計(jì)數(shù)板的上下兩個(gè)劃線區(qū)域的5個(gè)中方格（左上、右上、左下、右下、中央）均要計(jì)細(xì)胞總數(shù)及芽體個(gè)數(shù)，分別取其平均值（酵母細(xì)胞總

8、數(shù)平均值以A表示、芽體個(gè)數(shù)平均值以B表示）。3.4.5 使用完畢后，將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈（絕對不能用硬物洗刷），讓其自行晾3.4.6 將細(xì)胞總數(shù)平均值A(chǔ)乘以5即得25個(gè)中方格中的細(xì)胞總數(shù)3.4.7 細(xì)胞數(shù)/毫升=25個(gè)中方格中細(xì)胞總數(shù)X稀釋倍數(shù)X104,即稀釋10倍的計(jì)算結(jié)果是25個(gè)中方格中細(xì)胞總數(shù)將其小數(shù)向前移1位x106個(gè)/毫升，沒稀釋的則向前移兩位小數(shù)。（計(jì)算結(jié)果保留一位小數(shù)）3.4.8芽體個(gè)數(shù)（B）出芽率（）=X100（計(jì)算結(jié)果保留一位小數(shù)）細(xì)胞總數(shù)（A）4、結(jié)果處理4.1檢驗(yàn)結(jié)果以電腦報(bào)告單或書面報(bào)告單的形式報(bào)給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部和釀造部。三、貯酒（僅對傳統(tǒng)發(fā)醉）1、抽樣方法1.1 滿

9、罐后即時(shí)取樣1.2 取樣時(shí)先打開取樣閥排放少量液體，后用70-75%的酒精由內(nèi)至外消毒取樣閥,再用火焰滅菌（酒精火焰外焰灼燒15秒以上）。重新打開閥門排放樣品，待閥門冷卻后，取150200ml入已滅菌的三角瓶。2、檢驗(yàn)項(xiàng)目2.1 厭氣菌：每班抽檢的罐數(shù)不小于當(dāng)班滿罐總數(shù)的50%2.2 好氣菌與死亡率：每月至少抽檢4罐2.3 酵母數(shù)：每班抽檢的罐數(shù)不小于當(dāng)班滿罐總數(shù)的50%3、檢驗(yàn)方法3.1 厭氣菌：同A、一、3.2中厭氣菌的檢驗(yàn)方法3.2 好氣菌：同A、一、3.1中好氣菌的檢驗(yàn)方法3.3 酵母數(shù)：3.3.1 同A、二、3.4.13.3.2 同A、二、3.4.23.3.3 同A、二、3.4.33

10、.3.4 分別統(tǒng)計(jì)5個(gè)中方格（左上、右上、左下、右下、中央）中酵母細(xì)胞總數(shù)，在計(jì)數(shù)時(shí)，若遇到位于中方格間線上的細(xì)胞，只統(tǒng)計(jì)位于左線及下線上且在線內(nèi)的體積不少于一半的細(xì)胞。為盡量減少實(shí)驗(yàn)誤差，對同一樣品血球計(jì)數(shù)板的上下兩個(gè)劃線區(qū)域的5個(gè)中方格（左上、右上、左下、右下、中央）均要計(jì)數(shù)，取其平均值（數(shù)值以A表示）。3.3.5 將酵母細(xì)胞總數(shù)平均值A(chǔ)乘以5即得25個(gè)中方格中的細(xì)胞總數(shù)3.3.6 細(xì)胞數(shù)/毫升=25個(gè)中方格中細(xì)胞總數(shù)X稀釋倍數(shù)X104,即稀釋10倍的計(jì)算結(jié)果是25個(gè)中方格中細(xì)胞總數(shù)將其小數(shù)向前移1位x106個(gè)/毫升，沒稀釋的則向前移兩位小數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留一位小數(shù)。3.4 死亡率：同A、二

11、、3.3中死亡率的檢測方法4、結(jié)果處理4.1檢驗(yàn)結(jié)果以電腦報(bào)檢單或書面報(bào)檢單的形式報(bào)給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部和釀造部。四、一濾酒1、抽樣方法1.1取樣方法同A、1.1.22、檢驗(yàn)項(xiàng)目：2.1 好氣菌：每天日班至少抽檢一罐2.2 厭氣菌：每周至少抽檢一罐3、檢驗(yàn)方法3.1 好氣菌：同A、1.3.13.2 厭氣菌：同A、1.3.24、結(jié)果處理4.1檢驗(yàn)結(jié)果以電腦報(bào)檢單或書面報(bào)檢單的形式報(bào)給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部和釀造部五、清酒1、抽樣方法1.1 滿罐后即取樣。1.2 取樣時(shí)先打開取樣閥排放少量液體，后用70-75%的酒精由內(nèi)至外消毒取樣閥，再用火焰滅菌（酒精火焰外焰灼燒15秒以上）。重新打開閥門排放樣品，待閥

12、門冷卻后，取150200ml入已滅菌的三角瓶。2、檢驗(yàn)項(xiàng)目2.1 每罐檢驗(yàn)項(xiàng)目：好氣菌（60c前及60c后）2.2 抽檢項(xiàng)目：60c后厭氣菌（每10罐至少檢測1罐）3、檢驗(yàn)方法3.1 好氣菌：無菌操作吸取1ml清酒加入已滅菌的平皿內(nèi)，將余下的酒液重新包扎放入電熱恒溫水浴鍋中，60±1C恒溫15分鐘模擬殺菌。再吸取已殺菌的酒液1ml入已滅菌的平皿。及時(shí)將冷卻至45±1C的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿10-15ml,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1C的電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24或48±2小時(shí)后，分別在菌落計(jì)數(shù)器上計(jì)菌落總數(shù)。3.2 厭氣菌：無

13、菌操作吸取已模擬殺菌的酒液1ml入已滅菌的平皿。及時(shí)將冷卻至45±1C的UBA（或NBB）培養(yǎng)基注入平皿10-15ml,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置25±1C的厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)57天后，在菌落計(jì)數(shù)器上計(jì)菌落總數(shù)，結(jié)果即是每毫升酒液中所含的厭氣菌數(shù)。4、結(jié)果處理4.1檢驗(yàn)結(jié)果以電腦報(bào)告單或書面報(bào)告單的形式報(bào)給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、釀造部、生技部和包裝部。B、成品質(zhì)量檢驗(yàn)1 .抽樣方法1.1 瓶/罐裝酒1.1.1 正常生產(chǎn)情況下，每批取前、中、后期三個(gè)酒樣；當(dāng)同一個(gè)清酒桶包兩條線時(shí)，各取前、后期兩個(gè)酒樣。1.1.2 同一批酒，如包裝時(shí)間超過8小時(shí)，除按正常取樣外，每3小

14、時(shí)加取1個(gè)微檢樣。1.1.3 同一批酒，如包裝時(shí)間小于6小時(shí)，則可只取前、中期或前期酒樣。1.1.4 如一批酒中有頭板酒、PU或殺菌溫度偏低、殺菌運(yùn)行時(shí)間偏短部分，則各取兩支酒樣。1.1.5 以上酒樣均由包裝線檢驗(yàn)人員提供給微檢檢驗(yàn)人員。1.2 桶裝啤酒1.2.1 同一個(gè)清酒桶包出來的桶裝啤酒為一批，每批取第三桶作前期酒樣；同一個(gè)清酒桶的酒未包完而停包4個(gè)小時(shí)以上的，再重包時(shí)作另一批，也取第三桶的酒樣，由車間通知取樣。1.2.2 正常生產(chǎn)情況下，每班至少抽檢一桶。2 .檢驗(yàn)項(xiàng)目2.1 瓶/罐裝啤酒2.1.1 每支酒檢驗(yàn)項(xiàng)目：好氣菌（前期要做平行樣）2.1.2 抽檢項(xiàng)目：活酵母（每批至少抽檢前期

15、酒樣；640ml瓶裝線使用舊瓶包裝時(shí)加抽后期酒樣，抽檢批數(shù)不低于當(dāng)月總批數(shù)的80%（頭板、PU偏低、殺菌溫度偏低、殺菌時(shí)間偏短至少抽檢一支）大腸菌群（每批至少抽檢前期酒樣）厭氣菌（連續(xù)生產(chǎn)時(shí)至少批數(shù)逢“0”抽檢，停產(chǎn)一段時(shí)間后包返的第一批要求抽檢，每批抽檢前期酒樣）2.2 桶裝啤酒2.2.1 每桶酒檢驗(yàn)項(xiàng)目：好氣菌（前期要做平行樣）活酵母2.2.2 抽檢項(xiàng)目：大腸菌群（每批至少抽檢前期酒樣）厭氣菌（連續(xù)生產(chǎn)時(shí)每3批至少抽檢1批，停產(chǎn)一段時(shí)間后包返的第一批要求抽檢，每批抽檢前期酒樣）3 .檢驗(yàn)方法3.1 好氣菌、活酵母與厭氣菌3.1.1 樣品處理3.1.1.1 瓶/罐裝啤酒：在無菌狀態(tài)下，用70

16、-75%的酒精棉抹干凈開瓶器、瓶口（或罐裝拉環(huán)部分），再用酒精火焰滅菌。無菌操作開啟瓶/罐蓋，迅速倒出2/3左右的酒液后馬上用酒精棉蓋住瓶/罐口，并輕輕搖蕩，使CO2逸出后備用。3.1.1.2 桶裝啤酒：依次用1%的碘液與70-75%的酒精棉抹干凈酒閥，再用酒精火焰對酒閥及取樣器與酒閥接觸的部分殺菌，連接好取樣器（已用1%的碘液浸泡滅菌）及酒閥。打開取樣閥排放100-150ml的酒液，用70-75%的酒精棉由內(nèi)至外抹干凈取樣口，再用酒精火焰滅菌（灼燒15秒鐘以上），打開取樣閥排放液體，待取樣口冷卻后，無菌操作接取400500ml的樣品入已滅菌的三角瓶中備用。3.1.2 檢驗(yàn)程序：見下圖1:（圖

17、1）3.1.3 操作步驟無菌操作吸取1ml的酒液加入已滅菌的平皿內(nèi)，及時(shí)將冷卻至45±1C的培養(yǎng)基注入平皿10-15ml,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)一定時(shí)間，在菌落計(jì)數(shù)器上計(jì)菌落總數(shù)。3.1.4培養(yǎng)條件檢驗(yàn)項(xiàng)目培養(yǎng)基培養(yǎng)條件培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)箱好氣菌營養(yǎng)瓊脂36±1C24或48±2小時(shí)電熱恒溫培養(yǎng)箱活酵母麥汁瓊脂30±1C48±2小時(shí)電熱恒溫培養(yǎng)箱厭氣菌UBANBB25±1C57天厭氧培養(yǎng)箱103.2 大腸菌群3.2.1 樣品處理：同3.1.1,詳細(xì)見3.1.1.1及3.1.1.23.2.2 檢驗(yàn)程序：見下

18、圖2:簞蘭耳陽七|革蘭氏陰性無琴抱桿菌_k-._L_1產(chǎn)氣不產(chǎn)氣大腸菌群陰件1,_1I大腸菌群陽性大腸菌群陰性報(bào)告報(bào)告報(bào)查（圖2）3.2.3 操作步驟3.2.3.1 乳糖發(fā)酵試驗(yàn)將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量為10ml者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1ml及0.1ml者，用單料乳糖發(fā)酵管。每一接種量各接種3管，加2%NaOH中和至中性。置36±1C電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2小時(shí)，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。3.2.3.2 分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36±1C電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)

19、1824小時(shí)，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。3.2.3.3 證實(shí)試驗(yàn)在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36±1C電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2小時(shí)，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即為大腸菌群陽性。3.2.4 大腸菌群含量判定根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，即可得到每100ml酒樣中大腸菌群的MPN值。（附MPN檢索表）4、結(jié)果判定與處理4.1 檢驗(yàn)結(jié)果以電腦報(bào)告單或書面報(bào)告單的形式報(bào)給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部、釀造部、包裝部。4.2 電腦報(bào)檢時(shí)成品前、中、后期的好氣菌及活酵母取其

20、各自的平均值（保留整數(shù)位）；如前、中、后期好氣菌檢驗(yàn)結(jié)果均為零，則整批酒的好氣菌結(jié)果為“1”，平均值不足“1”時(shí)取為“1”，超過“1”時(shí)保留整數(shù)位。電腦檢驗(yàn)報(bào)告單中的取樣日期及檢驗(yàn)日期統(tǒng)一報(bào)檢成品前期相應(yīng)的日期。4.3 如好氣菌w50個(gè)/毫升、100ml酒液中大腸菌群w3MPN則為合格品；如好氣菌50個(gè)/毫升、或大腸菌群3MPN,則為不合格品，由有關(guān)部門按不合格品控制程序處理。C原輔材料質(zhì)量檢驗(yàn)一、硅藻土等過濾材料1、抽樣方法1.1 新購進(jìn)硅藻土等過濾材料，以同一天同一單位進(jìn)貨并且同一類型為一批，每批按進(jìn)貨量抽樣：進(jìn)貨量20噸以下（含20噸）2040噸（含40噸）4060噸（含60噸）以此類推

21、抽樣包數(shù)1包2包3包1.2 現(xiàn)場使用的硅藻土等過濾材料，每月至少抽檢兩次，每次至少抽一包。1.3 取樣時(shí)先用70-75%的酒精棉抹干凈開包處包表面及開包工具（剪刀或刀片等），再用酒精火焰滅菌，用已滅菌的勺子在每包內(nèi)采樣（150200ml）,裝入采樣容器內(nèi)混勻加蓋封好。要求整個(gè)操作過程在火焰旁進(jìn)行，并且手不得接觸樣品。2、檢驗(yàn)項(xiàng)目2.1好氣菌3、檢驗(yàn)方法3.1 無菌操作稱取1g樣品放入已滅菌的平皿內(nèi)，吸取10ml無菌水注入平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)使混合均勻。3.2 無菌操作吸取1ml樣品的稀釋液加入已滅菌的平皿內(nèi)，及時(shí)將冷卻至45±1C的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿10-15ml,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。

22、待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36±1C的電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24或48土2小時(shí)后，在菌落計(jì)數(shù)器上計(jì)菌落總數(shù)，結(jié)果乘以10即得每克樣品中所含的好氣菌數(shù)。4、結(jié)果處理4.1 檢驗(yàn)結(jié)果以電腦報(bào)告單或書面報(bào)告單的形式報(bào)給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部、釀造部、供應(yīng)部。二、無菌水、脫氧水1、抽樣方法1.1取樣時(shí)先打開取樣閥排放少量液體，后用70-75%的酒精由內(nèi)至外消毒取樣閥,再用火焰滅菌（酒精火焰外焰灼燒15秒以上）。重新打開閥門排放樣品，待閥門冷卻后，取150200ml樣品入已滅菌三角瓶。2、檢驗(yàn)項(xiàng)目2.1 好氣菌：每月至少抽檢8次2.2 厭氣菌：每月至少抽檢1次2.3 大腸菌群：每月至少抽檢1次3、檢驗(yàn)

23、方法3.1 好氣菌：同A、一、3.1中好氣菌的檢驗(yàn)方法3.2 厭氣菌：同A、四、3.2中厭氣菌的檢驗(yàn)方法3.3 大腸菌群：同B、3.2.2及B、3.2.3中大腸菌群的檢驗(yàn)方法4、結(jié)果處理4.1檢驗(yàn)結(jié)果以電腦報(bào)告單或書面報(bào)告單的形式報(bào)給企業(yè)領(lǐng)導(dǎo)、生技部和釀造部。注：以上樣品的細(xì)菌檢驗(yàn)結(jié)果如每平板中的菌落總數(shù)1500時(shí)，即判為樣品中的細(xì)菌含量無法計(jì)數(shù)，電腦報(bào)告單中以“9999”表示。附錄1:培養(yǎng)基、中和劑及染色劑的配制和染色方法1、營養(yǎng)瓊脂1.1 配制方法稱取40克（當(dāng)瓶身標(biāo)簽上的定量與之有出入時(shí)，按照標(biāo)簽上所規(guī)定的量配制）營養(yǎng)瓊脂加入1000ml蒸儲(chǔ)水，邊加熱邊攪動(dòng)，使培養(yǎng)基全部溶解，待培養(yǎng)基沸

24、騰后分裝入干燥潔凈的三角瓶，裝入三角瓶的培養(yǎng)基的量一般為三角瓶容積的1/31/2。在分裝時(shí)應(yīng)注意不得使培養(yǎng)基沾污瓶口，以免浸濕棉塞，造成污染。1.2 滅菌條件121c濕熱高壓滅菌20分鐘。1.3 保存條件低溫保存2、UB幅養(yǎng)基2.1 配制方法稱取62克（當(dāng)瓶身標(biāo)簽上的定量與之有出入時(shí)，按照標(biāo)簽上所規(guī)定的量配制）UBA粉末培養(yǎng)基加入750ml蒸儲(chǔ)水，邊加熱邊攪動(dòng)，使培養(yǎng)基全部溶解，待培養(yǎng)基沸騰后加入250ml未除氣的啤酒混勻，分裝入干燥潔凈的三角瓶，裝入三角瓶的培養(yǎng)基的量一般為三角瓶容積的1/31/2。在分裝時(shí)應(yīng)注意不得使培養(yǎng)基沾污瓶口，以免浸濕棉塞，造成污染。2.2 滅菌條件121c濕熱高壓滅

25、菌15分鐘（當(dāng)瓶身標(biāo)簽上的規(guī)定與之有出入時(shí)，按照標(biāo)簽上的規(guī)定滅菌）。2.3 保存條件低溫保存3、NB酹養(yǎng)基3.1 配制方法稱取66.3克NBB粉末培養(yǎng)基加入500ml蒸儲(chǔ)水及500ml已除氣的啤酒，邊加熱邊攪動(dòng)，煮沸后維持沸騰狀態(tài)1分鐘使培養(yǎng)基全部溶解。分裝入干燥潔凈的三角瓶，裝入三角瓶的培養(yǎng)基的量一般為三角瓶容積的1/31/2。在分裝時(shí)應(yīng)注意不得使培養(yǎng)基沾污瓶口，以免浸濕棉塞，造成污染。3.2 滅菌條件121c濕熱高壓滅菌15分鐘。3.3 保存條件低溫保存4、1000PPM線菌酮溶液4.1 配制方法精確稱取0.5g放線菌酮溶于500ml蒸儲(chǔ)水，分裝于三角瓶。4.2 滅菌條件115c濕熱高壓滅

26、菌15分鐘。4.3 保存條件密封保存5、UBAD（或NBBD培養(yǎng)基無菌操作每100ml已滅菌的UBA（或NBB培養(yǎng)基中加入1ml1000PPM勺放線菌酮溶液，重新煮沸以混合均勻。6、麥汁培養(yǎng)基6.1 配制方法每1000mL已煮沸的麥汁緩慢加入已充分?jǐn)嚢璧牡扒?個(gè)，邊加邊攪拌，持續(xù)沸騰30-40分鐘（加熱過程要不斷攪拌），待麥汁冷卻后過濾，加蒸儲(chǔ)水調(diào)整糖度為11勃力克司，然后加入1.7%1.8%瓊脂，繼續(xù)加熱使瓊脂全部溶解后過濾分裝入干凈三角瓶。6.2 滅菌條件115c濕熱高壓滅菌25分鐘。6.3 保存條件低溫保存7、乳糖膽鹽發(fā)酯管（初發(fā)酯用）7.1 配制方法稱取66克（當(dāng)瓶身標(biāo)簽上的定量與之有

27、出入時(shí)，按照標(biāo)簽上所規(guī)定的量配制）乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基溶入1000ml蒸儲(chǔ)水（如配單料，蒸儲(chǔ)水量加倍），加熱至沸，分裝入10ml的試管，裝入培養(yǎng)基的量為3-4ml。在分裝時(shí)應(yīng)注意不得使培養(yǎng)基沾污試管口。7.2 滅菌條件115c濕熱高壓殺菌15分鐘。7.3 貯存條件低溫保存8、乳糖發(fā)酯管（復(fù)發(fā)酯用）8.1 成分蛋白月東20g乳糖10g0.04%澳甲酚紫水溶液25ml蒸儲(chǔ)水1000mlpH7.48.2 配制方法將蛋白月東及乳糖溶于水中，校正pH,加入指示劑，按檢驗(yàn)要求分裝，方法同7.1。（雙料乳糖發(fā)酵管除蒸儲(chǔ)水外，其他成份加倍）8.3 滅菌條件同7.28.4 貯存條件同7.39、伊紅美藍(lán)瓊脂平板9.

28、1配制方法稱取伊紅美藍(lán)瓊脂31g（當(dāng)瓶身標(biāo)簽上的定量與之有出入時(shí)，按照標(biāo)簽上所規(guī)定的量配制）加入1000ml冷蒸儲(chǔ)水，微火加熱至溶解，115c高壓滅菌15min,冷至56c左右傾注無菌平皿備用。平皿即制即用。10、革蘭氏染色法10.1 結(jié)晶紫染色液（1:100）配制方法：a、準(zhǔn)確稱取1.000g結(jié)晶紫b、準(zhǔn)確稱取1.000g草酸鏤溶于50ml蒸儲(chǔ)水，再加水定容至100ml將結(jié)晶紫溶解于20ml95%的乙醇中，然后與80ml1%的草酸鏤溶液混合至100ml。保存方法：密封保存保存期：3個(gè)月10.2 革蘭氏碘液（1:300）配制方法：碘1g碘化鉀2g蒸儲(chǔ)水300ml將碘與碘化鉀先進(jìn)行混合，加入蒸儲(chǔ)

29、水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸儲(chǔ)水至300ml。保存方法：密封避光保存保存期：3個(gè)月。10.3 復(fù)紅染色液（1:400）配制方法：稱取0.2500g堿性復(fù)紅（或品紅）溶于10ml無水乙醇，再加水稀釋至100量升。保存方法：密封保存有效期：六個(gè)月10.4 染色法10.4.1 將涂片在火焰上干燥固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染1分鐘，水洗。10.4.2 滴加革蘭氏碘液，作用1分鐘，水洗。10.4.3 滴加95%乙醇脫色，約30s;或?qū)⒁掖嫉螡M整個(gè)涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個(gè)涂片，脫色10s。10.4.4 水洗，滴加復(fù)紅染色液，復(fù)染1分鐘。水洗，待干，鏡檢。10.4.5 結(jié)果革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。11、美藍(lán)染色液（比例：1:5000）11.1配制方法：a、準(zhǔn)確稱取0.1000g亞甲基藍(lán)溶于100ml蒸儲(chǔ)水，再加水稀釋至500mlb、準(zhǔn)確稱取5.4436g磷酸二氫鉀溶于