1、-袁基策袁基策 干物質干物質水分水分礦物質礦物質有機物有機物粗蛋白粗蛋白維生素維生素氨化物氨化物真蛋白真蛋白無氮物無氮物碳水化合物碳水化合物粗脂肪粗脂肪粗纖維粗纖維無氮浸出物無氮浸出物飼料飼料蛋白質蛋白質是一種復雜的有機化合物。氨基酸是組成蛋白質的基本單位，氨基酸通過脫水縮合連成肽鏈。蛋白質是由一條或多條多肽鏈組成的生物大分子，每一條多肽鏈有二十至數百個氨基酸殘基（-R）不等；各種氨基酸殘基按一定的順序排列。蛋白質的三維結構圖蛋白質是由C（碳）、H（氫）、O（氧）、N（氮）組成，一般蛋白質可能還會含有P（磷）、S（硫）、Fe（鐵）、Zn（鋅）、Cu（銅）、B（硼）、Mn(錳)、I（碘）、Mo（

2、鉬）等。這些元素在蛋白質中的組成百分比約為：碳50% 氫7% 氧23% 氮16% 硫03% 其他微量一切蛋白質都含一切蛋白質都含N元素，且各種蛋白質的含氮量元素，且各種蛋白質的含氮量很接近，平均為很接近，平均為16%； ：任何生物樣品中每1g元N的存在，就表示大約有100/16=6.25g蛋白質的存在， 6.25常稱為蛋白質數。反芻動物飼料中的粗蛋白包括兩個部分： 真蛋白： 即上述提到的由肽鏈構成的蛋白質。也稱為純蛋白。 主要由飼料原料中的餅粕類提供。 非蛋白氮：(Nonprotein NitrogenNPN) 非蛋白氮是指除真蛋白(多肽)以外的其他所有含氮物質化合物，主要是一些有機非蛋白氮化

3、合物如氨、酰胺、胺、氨基酸和無機氮化合物如銨鹽類。作為非蛋白氮補充飼料的一般為氨的衍生物：尿素、雙縮脲、氨、銨鹽及其它合成的簡單含氮化合物。作為簡單的純化合物質，NPN對動物不能提供能量，其作用只是供給瘤胃微生物合成蛋白質所需的氮源，以節省飼料蛋白質。 凱氏定氮法質譜分析法（MS）雙縮脲法（Biuret法）福林酚試劑法（Lowry法，Folin-酚法）考馬斯亮藍法（Bradford法）電泳法凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法也是國家對飼料檢測的標準方法國家對飼料檢測的標準方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，然后在堿性條件下將銨鹽轉化為 氨，隨水蒸

4、氣餾出并為過量的酸液吸收，再以標準堿滴定，就可計算出樣品中的氮量。然后乘上蛋白質常數，就得出了樣品中蛋白質含量。凱氏定氮法測定的是含氮量，即飼料中包括NPN的總蛋白（粗蛋白含量）。特點是結果準確，重復性好。缺點是操作復雜，耗時耗試劑。原理：通過電源將蛋白質分子轉化為氣相離子（電離），然后利用質樸分析儀的電場、磁場將具有特定質量與電荷比值（M/Z值）的蛋白質離子分離開來，經過離子檢測器收集離子，確定其M/Z值，分析鑒定蛋白質含量。優點是很高的靈敏度，能提供亞微克級的檢測結果，適用于復雜配方中微量蛋白質的鑒定和結構測定。如使用高效液相色譜-串聯質譜法可準確分辨出真蛋白與非蛋白氮的種類和含量。能準確

5、測定出每一種蛋白質的含量，但需要復雜的技術水平和精密的儀器設備。且檢測成本極高。雙縮脲法為傳統的分光光度法測定蛋白質的方法，當含有兩個或者兩個以上肽鍵的物質和堿性的硫酸銅反應時，形成紫色的絡合物，這個顏色產物是肽鍵中的氮原子和銅離子配價結合的結果。形成顏色產物的量取決于蛋白質的濃度，且在一定條件下顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比，因此可以根據分光光度法來測量蛋白質的含量。可以檢測出真蛋白的含量。雙縮脲法檢測特異性和準確度好，呈色穩定性好，試劑單一，方法簡便，但靈敏度不高，約為lmg。可能會被飼料中添加的氨基酸影響。Folin一酚法的原理與雙縮脲法大體相同，利用蛋白質中的肽鍵與銅結合產生雙縮脲反應

6、。同時也由于Folin一酚試劑中的磷鉬酸一磷鎢酸試劑被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產生深藍色的鉬藍和鎢藍的混合物。在一定的條件下，藍色深度與蛋白的量成正比。由此可測定蛋白質的含量。由于NPN中不含肽鍵，所以測定是真蛋白的含量。Folin一酚法是蛋白質測定法中最靈敏的方法之一，對水溶性蛋白質含量的測定很有效。但飼料中過量添加的氨基酸會對檢測結果造成一定的影響。考馬斯亮藍G250是一種有機染料，在游離狀態下呈紅色，在稀酸溶液中與蛋白質的堿性氨基酸(特別是精氨酸)和芳香族氨基酸殘基結合后變為藍色。蛋白質在11000微克范圍內，蛋白質-色素結合物在595nm波長下的吸光度與蛋白質含量成正比，故

7、可用于蛋自質的定量測定。是目前靈敏度最高的檢測方法。可準確測定真蛋白的含量。該法方法簡便，易于操作，所用試劑較少，顯色劑易于配制，干擾物質少。缺點是蛋白質含量較高（超過150g/ML）時結果偏差較大。電泳是指在電場作用下，帶電粒子向著與其所帶電荷電性相反的電極移動的現象。電泳法就是指帶電荷的蛋白質在惰性支持介質(如濾紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)中，在電場的作用下，向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動，由于各組分之間的移動速度不同，使各組分分離成狹窄的區帶，并用適宜的檢測方法記錄其電泳區帶圖譜或計算其百分含量的方法。近年來蛋白質凝膠電泳技術在國際上迅猛發展，已成為高分辨(等電

8、聚焦，0001pH)，高靈敏度(銀染色，熒光染色，ng級)和獲得大量信息(雙向電泳，近萬個點)的現代技術。目前，運用于蛋白質檢測的電泳法有雙向凝膠電泳法、毛細管電泳法、火箭免疫電泳法等常用與飼料分析的是SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法。聚丙烯酰胺凝膠電泳法。此方法有操作簡便、快速、樣品用量少、高自動化等優點。但是也存在核酸、多糖、脂類等干擾分子，影響檢測結果。尿素是一種不帶電荷的水溶性化合物。而蛋白質是帶有負電荷的有機物質。故此方法只能檢測出真蛋白的含量。此方法要求技術水平較高，設備和耗材的價格昂貴，且需要建立標準曲線。目前實際意義不大。聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據不同種類的蛋白質分子所帶電荷的差異及

9、分子大小的不同所產生的不同遷移率將蛋白質分離成若干條區帶，如果分離純化的樣品中只含有同一種蛋白質，蛋白質樣品電泳后，就應只分離出一條區帶。飼料中的蛋白質含有許多種類，會在凝膠上出現多條區帶，需要分別計算每條區帶所表達的蛋白質含量，然后統計分析出蛋白含量，其過程復雜且技術含量極高。愛德使用的方法只是初步的判斷蛋白質種類和含量的多少，并不能計算出準確的含量。愛德的實驗結果豆代表豆粕 棉代表棉粕11316 21612 31812 4犢牛顆粒客戶對我們產品的檢測結果存在質疑時應解釋清楚試驗方法的不同對結果的影響非常大，因為我們的產品是合法且科學地添加了NPN，不會對奶牛和牛奶品質產生不良影響。建議客戶使用凱氏定氮法進行檢測。取樣過程對檢測結果的 影響非常大，從黃梅愛德的電泳結果來看，只有2種可能：一是取樣時取的粉料的上層。因運輸或搬運過程中的震蕩，比重較輕的麩皮等物質漂浮在袋口上層，比重較大的餅粕類飼料位于中下層。另一種可能就是取得的樣品被別有用心的人摻入了其他物質或被掉包。我們以后在取樣時應盡量混合均勻后取樣或者抽取中下層樣品，以免檢測結