1、第四章第四章 高效液相色譜分析高效液相色譜分析2第四章第四章 高效液相色譜分析高效液相色譜分析第一節第一節 概述概述第二節第二節 HPLC儀器儀器第三節第三節 高效液相色譜法的類型及分離原理高效液相色譜法的類型及分離原理第四節第四節 色譜分離方法的選擇色譜分離方法的選擇第五節第五節 高效毛細管電泳簡介高效毛細管電泳簡介第六節第六節 紙層析和薄層層析紙層析和薄層層析3 教學目標及要求教學目標及要求 1、掌握高效液相色譜法的特點及適用范圍，與掌握高效液相色譜法的特點及適用范圍，與GC及經典及經典LC的異同。的異同。 2、掌握高效液相色譜儀的主要部件及基本流程。掌握高效液相色譜儀的主要部件及基本流程

2、。 3、理解常用檢測器的原理、適用的分析對象及適用范圍。、理解常用檢測器的原理、適用的分析對象及適用范圍。 4、理解各種分離方式的原理及選擇原則。、理解各種分離方式的原理及選擇原則。 5、了解、了解高效毛細管電泳基本原理、儀器高效毛細管電泳基本原理、儀器及特點。及特點。6、了解、了解紙層析和薄層層析分離過程、操作技術及特點。紙層析和薄層層析分離過程、操作技術及特點。4第一節第一節 概述概述 高效液相色譜高效液相色譜（HPLC）是一種以是一種以液體為流動相液體為流動相的的快速分快速分離分析色譜技術離分析色譜技術，采用，采用細微粒固定相細微粒固定相、高壓輸液泵高壓輸液泵和和高靈敏高靈敏度檢測器度檢

3、測器，具有，具有高壓、高速、高效、高靈敏度高壓、高速、高效、高靈敏度的特點，對于的特點，對于那些那些沸點高沸點高，熱穩定性差熱穩定性差，相對分子質量大相對分子質量大的的有機化合物有機化合物如如烷烴、烯烴、芳烴、染料、甾族化合物、蛋白質、氨基酸、烷烴、烯烴、芳烴、染料、甾族化合物、蛋白質、氨基酸、核酸等均可進行分離分析。核酸等均可進行分離分析。 按照固定相不同分為按照固定相不同分為：液液分配色譜；吸附色譜（液固：液液分配色譜；吸附色譜（液固色譜）；離子交換色譜；尺寸排阻色譜（凝膠滲透色譜）；色譜）；離子交換色譜；尺寸排阻色譜（凝膠滲透色譜）；離子色譜、平板色譜（薄層色譜）等。離子色譜、平板色譜（

4、薄層色譜）等。51. 高效液相色譜與經典液相色譜方法的比較高效液相色譜與經典液相色譜方法的比較高 壓 ：高 壓 ： HPlC供 液 壓 力 和 進 樣 壓 力 都 很 高 （供 液 壓 力 和 進 樣 壓 力 都 很 高 （ 150350X105Pa）。高壓是的一個。高壓是的一個突出特點突出特點。高速：高速：HPLC采用高壓輸液設備，流速大增加，分析速度極采用高壓輸液設備，流速大增加，分析速度極快，只需數分鐘；而經典方法靠重力加料，完成一次分析快，只需數分鐘；而經典方法靠重力加料，完成一次分析需時數小時。需時數小時。高效：高效：填充物顆粒極細且規則，固定相涂漬均勻、傳質阻填充物顆粒極細且規則，

5、固定相涂漬均勻、傳質阻力小，因而柱效很高。可以在數分鐘內完成數百種物質的力小，因而柱效很高。可以在數分鐘內完成數百種物質的分離。分離。高靈敏度：高靈敏度：檢測器靈敏度極高：檢測器靈敏度極高：UV10-9g, 熒光檢測熒光檢測器器10-11g。62. HPLC與與GC的比較的比較分析對象及范圍：分析對象及范圍：GC分析只限于氣體和低沸點的穩定有機化合分析只限于氣體和低沸點的穩定有機化合物（占總數的物（占總數的20%）；HPLC可分析高沸點、高分子量的穩定或可分析高沸點、高分子量的穩定或不穩定有機化合物（占不穩定有機化合物（占80%）。流動相的選擇：流動相的選擇：GC采用的流動相為幾種采用的流動相

6、為幾種“惰性惰性”氣體，氣體，只起運只起運載作用，對組分作用小載作用，對組分作用小；HPLC采用的流動相為液體或各種液體采用的流動相為液體或各種液體的混合（供選擇的機會多）。它的混合（供選擇的機會多）。它除了起運載作用外，還可與組分除了起運載作用外，還可與組分作用，并與固定相對組分的作用產生競爭作用，并與固定相對組分的作用產生競爭，即流動相對分離的貢，即流動相對分離的貢獻很大，可通過溶劑來控制和改進分離。獻很大，可通過溶劑來控制和改進分離。操作溫度：操作溫度：GC需高溫；需高溫；HPLC通常在室溫下進行。通常在室溫下進行。73. 應用應用極性增加極性增加不溶于水不溶于水溶于水溶于水非極性非極性

7、離子離子非離子極性非離子極性吸附吸附反向分配反向分配分配分配正向分配正向分配離子交換離子交換尺寸排阻尺寸排阻凝膠滲透凝膠滲透凝膠過濾凝膠過濾分分子子量量8第二節第二節 HPLC儀器儀器9HPLC儀器包括：儀器包括：高壓輸液裝置高壓輸液裝置 進樣系統進樣系統 分離系統分離系統 檢測系統檢測系統 此外還配有梯度淋洗、自動進樣和數據處理裝置。此外還配有梯度淋洗、自動進樣和數據處理裝置。梯梯度淋洗度淋洗101. 高壓輸液系統高壓輸液系統1）貯液器）貯液器：1-2L的玻璃瓶，配有溶劑過濾器的玻璃瓶，配有溶劑過濾器(Ni合金合金)，其，其孔徑約孔徑約2 m，可防止顆粒物進入泵內。，可防止顆粒物進入泵內。2

8、）脫氣）脫氣：超聲波脫氣或真空加熱脫氣。溶劑通過脫氣器中：超聲波脫氣或真空加熱脫氣。溶劑通過脫氣器中的脫氣膜，相對分子量小的氣體透過膜從溶劑中除去。的脫氣膜，相對分子量小的氣體透過膜從溶劑中除去。3）高壓泵）高壓泵：要求要求：密封性好、輸液流量穩定無脈動、可調范圍寬、耐：密封性好、輸液流量穩定無脈動、可調范圍寬、耐腐蝕。腐蝕。輸液泵種類：恒壓型和恒流型。輸液泵種類：恒壓型和恒流型。114）梯度淋洗裝置）梯度淋洗裝置：作用是在分離過程中，按一定的程序連續：作用是在分離過程中，按一定的程序連續改變流動相中多種不同性質溶劑的配比，以改變流動相的極改變流動相中多種不同性質溶劑的配比，以改變流動相的極性

9、、離子強度或酸度等，從而提高試樣的分離效率，縮短分性、離子強度或酸度等，從而提高試樣的分離效率，縮短分析時間，使色譜峰形得到改善，提高測定的靈敏度和定量的析時間，使色譜峰形得到改善，提高測定的靈敏度和定量的準確度。準確度。122. 進樣系統進樣系統1）隔膜注射進樣隔膜注射進樣：使用微量注射器進樣。裝置簡單、死體：使用微量注射器進樣。裝置簡單、死體積小。但積小。但進樣量小且重現性差進樣量小且重現性差。2）高壓進樣閥高壓進樣閥：目前最常用的為六通閥。由于進樣量可由：目前最常用的為六通閥。由于進樣量可由樣品管控制，因此樣品管控制，因此進樣準確，重復性好進樣準確，重復性好。裝入樣品裝入樣品出口出口進樣

10、進樣采樣環采樣環泵入溶劑泵入溶劑進色譜柱進色譜柱133. 色譜柱色譜柱1）要求要求：內壁光滑的優質不銹鋼柱，柱接頭的死體積盡可：內壁光滑的優質不銹鋼柱，柱接頭的死體積盡可能小。柱長多為能小。柱長多為1530cm，內徑為，內徑為45mm；2）柱的填充柱的填充：主要采用勻漿法。：主要采用勻漿法。填充方法：填充方法： 填充時，將制作好的勻漿液，用流動相充滿色譜柱及其填充時，將制作好的勻漿液，用流動相充滿色譜柱及其延長管中，然后將勻漿液倒入勻漿填充器，在較高壓力下迅延長管中，然后將勻漿液倒入勻漿填充器，在較高壓力下迅速將其注入色譜柱內。要求填充速度快（防凝聚、沉降或結速將其注入色譜柱內。要求填充速度快

11、（防凝聚、沉降或結塊）、且無空氣進入（影響填充均勻性）。塊）、且無空氣進入（影響填充均勻性）。144. 檢測器檢測器1）紫外檢測器）紫外檢測器 依據被分析組分對特定紫外光的選擇性吸收。依據被分析組分對特定紫外光的選擇性吸收。 最小檢測量最小檢測量10-9gmL-1，對流量和溫度的波動不，對流量和溫度的波動不敏感，可用于梯度洗脫。敏感，可用于梯度洗脫。15光電二極管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器16波長波長可的松可的松氟美松氟美松皮質酮皮質酮快速掃描快速掃描光電二極管陣列（光電二極管陣列（PDA）檢測所獲得的三維色譜）檢測所獲得的三維色譜-光譜圖光譜圖17原理原理：利用兩束相同角度的光照射溶劑相

12、和樣品：利用兩束相同角度的光照射溶劑相和樣品+溶劑相，利用二者溶劑相，利用二者對光的折射率不同對光的折射率不同。 為為通用型檢測器通用型檢測器，靈敏度為，靈敏度為10-7g/mL。但對溫。但對溫度變化敏感，且度變化敏感，且不適于梯度淋洗不適于梯度淋洗。光源光源調零調零光學零光學零參比參比樣品樣品平面鏡平面鏡透鏡透鏡光電轉換光電轉換記錄儀記錄儀放大器放大器遮光板遮光板2）示差折光檢測器）示差折光檢測器183）熒光檢測器）熒光檢測器 根據某些物質受激后能產生一定強度熒光的性質根據某些物質受激后能產生一定強度熒光的性質，可制，可制成靈敏度極高的熒光檢測器。它是一種成靈敏度極高的熒光檢測器。它是一種選

13、擇性很強的檢測器選擇性很強的檢測器，其靈敏度比其靈敏度比UV檢測器高檢測器高23個數量級。個數量級。 適合于稠環芳烴、甾族化合物、酶、氨基酸、維生素、色適合于稠環芳烴、甾族化合物、酶、氨基酸、維生素、色素、蛋白質等熒光物質的測定。素、蛋白質等熒光物質的測定。 4）電導檢測器）電導檢測器 主要用于離子色譜的檢測。主要用于離子色譜的檢測。 原理原理：基于待測物在一些介質中電離后所產生的電導（電：基于待測物在一些介質中電離后所產生的電導（電阻的倒數）變化來測量電離物質的含量。阻的倒數）變化來測量電離物質的含量。19第三節第三節 高效液相色譜法的類型及分離原理高效液相色譜法的類型及分離原理 一、一、吸

14、附色譜（液固吸附色譜）吸附色譜（液固吸附色譜） 二、分配色譜二、分配色譜 三、離子交換色譜三、離子交換色譜 四、體積排阻色譜四、體積排阻色譜高高效效液液相相色色譜譜法法的的分分類類20一、一、吸附色譜（液固吸附色譜）吸附色譜（液固吸附色譜）吸附色譜吸附色譜是基于各組分在固體吸附劑表面上具有是基于各組分在固體吸附劑表面上具有不不同吸附能力同吸附能力而進行分離。而進行分離。l以固體吸附劑為固定相，如極性的硅膠、氧化鋁、以固體吸附劑為固定相，如極性的硅膠、氧化鋁、分子篩和非極性的活性炭等（較常使用分子篩和非極性的活性炭等（較常使用硅膠硅膠）。流動）。流動相可以是各種不同極性的一元或多元溶劑。相可以是

15、各種不同極性的一元或多元溶劑。l宜于宜于分離極性不同或含極性基團相同但數目不同的分離極性不同或含極性基團相同但數目不同的試樣，也適于分離異構體試樣，也適于分離異構體，但不宜于分離同系物。，但不宜于分離同系物。 21二、分配色譜（液液分配色譜）二、分配色譜（液液分配色譜） 原理原理 根據各待測物在互不相溶的兩溶液中的溶解度根據各待測物在互不相溶的兩溶液中的溶解度不同，因而具不同的分配系數不同，因而具不同的分配系數。在色譜柱中，隨著。在色譜柱中，隨著流動相的移動，這種分配平衡需進行多次，造成各流動相的移動，這種分配平衡需進行多次，造成各待測物的遷移速率不同，從而實現分離的過程。待測物的遷移速率不同

16、，從而實現分離的過程。222. 流動相流動相 根據流動相與固定相極性的差別程度，可將液根據流動相與固定相極性的差別程度，可將液液色譜分為液色譜分為正相分配色譜正相分配色譜和和反相分配色譜。反相分配色譜。正相分配色譜正相分配色譜： 流動相極性小于固定相極性，極性小的先流出，流動相極性小于固定相極性，極性小的先流出，適于極性組分分離適于極性組分分離。反相分配色譜反相分配色譜： 流動相極性大于固定相極性，極性大的先流出，流動相極性大于固定相極性，極性大的先流出，適于非極性組分分離適于非極性組分分離。233. 固定相固定相 原則上，用于原則上，用于GC的固定相也可用于的固定相也可用于HPLC作固作固定

17、相。但定相。但HPLC固定液易流失，因此常用的只有幾固定液易流失，因此常用的只有幾種，按極性由高到低為：種，按極性由高到低為： , -氧二丙腈氧二丙腈（ODPN)、聚乙二醇聚乙二醇（PEM）、角鯊烷、角鯊烷（SQ）。 早期通過在擔體上涂漬一薄層固定液制備固定早期通過在擔體上涂漬一薄層固定液制備固定相相, 現多為現多為化學鍵合固定相化學鍵合固定相（通過化學反應將有機通過化學反應將有機分子鍵合在載體表面所形成的柱填充劑，具有穩定、分子鍵合在載體表面所形成的柱填充劑，具有穩定、流失小、適于梯度淋洗等特點流失小、適于梯度淋洗等特點 ）。）。24正相色譜正相色譜低極性流動相低極性流動相反相色譜反相色譜高

18、極性流動相高極性流動相中等極性流動相中等極性流動相中等極性流動相中等極性流動相時間時間時間時間時間時間時間時間待測物極性：待測物極性：ABC正、反相色譜中極性和保留時間的關系正、反相色譜中極性和保留時間的關系25三、離子交換色譜三、離子交換色譜 此法是利用離子交換原理和液相色譜技術相此法是利用離子交換原理和液相色譜技術相結合，測定結合，測定各類陰、陽離子的分離各類陰、陽離子的分離分析方法。分析方法。它它既適于無機離子，也適于有機物分離既適于無機離子，也適于有機物分離，如蛋白質、，如蛋白質、氨基酸、核酸等。氨基酸、核酸等。1. 原理原理：利用不同待測離子對固定相的親和能力：利用不同待測離子對固定

19、相的親和能力（或離子交換能力）的差別來實現分離的。（或離子交換能力）的差別來實現分離的。OHXNRRXOHNR-R:陰離子交換HMSORMHSO-R:陽離子交換33-3-3262. 固定相固定相 按離子交換劑類型分四種：按離子交換劑類型分四種： 類型類型 官官能能團團 強強陽陽離離子子交換交換劑劑 -SO3- 陽陽離離子子交換交換劑劑 弱弱陽陽離離子子交換交換劑劑 -CO2- 強強陰陰離離子子交換交換劑劑 -NR3+ 陰陰離離子子交換交換劑劑 弱弱陰陰離離子子交換交換劑劑 -NH2+ 27微孔型微孔型 大孔型大孔型微孔微孔微孔微孔薄膜型薄膜型 表面多孔型表面多孔型離子交換層離子交換層惰性核惰性

20、核惰性核惰性核離子交換劑硅膠層涂覆離子交換劑硅膠層涂覆按固定相按固定相制作方法制作方法可分為：可分為：283. 流動相流動相 離子交換色譜流動相為離子交換色譜流動相為無機酸或無機堿的無機酸或無機堿的鹽鹽類緩沖溶液（有一定類緩沖溶液（有一定pH和離子強度），通過改變和離子強度），通過改變pH、緩沖劑類型、離子強度、加入有機試劑和配、緩沖劑類型、離子強度、加入有機試劑和配位劑等條件來控制分配比位劑等條件來控制分配比k，改變交換劑的選擇性，改變交換劑的選擇性，進而影響樣品待測物的分離。進而影響樣品待測物的分離。29離子色譜（離子色譜（IC） 以無機、特別是無機陰離子混合物為主要分析對象以無機、特別是

21、無機陰離子混合物為主要分析對象。30離子色譜的原理離子色譜的原理: 采用交換容量非常低的特制離子交換樹脂為固定相；采用交換容量非常低的特制離子交換樹脂為固定相；在分離柱后，用另外一支抑制柱來消除淋洗液的高本在分離柱后，用另外一支抑制柱來消除淋洗液的高本底電流底電流;采用電導檢測器檢測流出組分。快速分離分析微量無采用電導檢測器檢測流出組分。快速分離分析微量無機離子混合物機離子混合物;各種抑制裝置及無抑制方法的出現，發展迅速。各種抑制裝置及無抑制方法的出現，發展迅速。31例如：分析陽離子時，以無機酸為流動相，抑制柱例如：分析陽離子時，以無機酸為流動相，抑制柱為高容量的強堿性陰離子交換樹脂，則發生下

22、列反為高容量的強堿性陰離子交換樹脂，則發生下列反應：應：R+OH + HCl(流動相流動相)R+Cl- + H2O R+OH + MCl(待測物待測物) R+Cl + M+OH- 可見，不僅大量酸轉化為低電導的水，而且待可見，不僅大量酸轉化為低電導的水，而且待測離子轉化為具有更大淌度的堿。測離子轉化為具有更大淌度的堿。離子色譜的原理離子色譜的原理: 32離子色譜的特點：離子色譜的特點：分析速度快：可在數分鐘內完成一個試樣的分析；分析速度快：可在數分鐘內完成一個試樣的分析；分離能力高：在適宜的條件下，可使常見的各種陰分離能力高：在適宜的條件下，可使常見的各種陰離子混合物分離；離子混合物分離； 分

23、離混合陰離子（分離混合陰離子（NO3、NO2、SO42、PO43等）惟一快速、靈敏、準確的最有效分析方法等）惟一快速、靈敏、準確的最有效分析方法 。缺點：缺點：抑制柱要定期再生、譜峰在經過抑制柱后會展抑制柱要定期再生、譜峰在經過抑制柱后會展寬，降低分離度。寬，降低分離度。33四四 、尺寸排阻色譜法、尺寸排阻色譜法 又稱凝膠（滲透）色譜，主要又稱凝膠（滲透）色譜，主要用于大分子的分子用于大分子的分子分離分離。它是。它是基于待測物分子的尺寸和形狀不同來實現基于待測物分子的尺寸和形狀不同來實現分離的分離的。1、分離原理、分離原理：固定相為化學惰性的多孔凝膠，它類似：固定相為化學惰性的多孔凝膠，它類似

24、于分子篩，但孔徑更大。凝膠內有一定大小的空穴，于分子篩，但孔徑更大。凝膠內有一定大小的空穴，分子體積大的待測物不能滲入孔穴中而被排阻，較早分子體積大的待測物不能滲入孔穴中而被排阻，較早地被淋洗出來，中等的部分滲透，小分子則完全滲透，地被淋洗出來，中等的部分滲透，小分子則完全滲透，最后流出色譜柱。即待測物分子按分子大小（分子量最后流出色譜柱。即待測物分子按分子大小（分子量大小）先后從柱中流出。大小）先后從柱中流出。342. 固定相固定相3. 流動相的要求流動相的要求：能溶解樣品且與凝膠相似（潤：能溶解樣品且與凝膠相似（潤濕凝膠）、粘度小（增加擴散速度）。濕凝膠）、粘度小（增加擴散速度）。 類型類

25、型 材料材料 型號型號 特點特點 流動相流動相 葡萄糖凝膠葡萄糖凝膠 Sephadax 水水 軟性凝膠軟性凝膠 聚苯乙烯聚苯乙烯 Bio-head-S 溶脹溶脹,小分小分子分離子分離 有機溶劑有機溶劑 聚苯乙烯聚苯乙烯 Styragel 有機溶劑有機溶劑 半剛性凝膠半剛性凝膠 聚乙酸酯聚乙酸酯 Emgel(OR) 溶脹溶脹較小較小流速較小流速較小 有機溶劑有機溶劑 玻璃珠玻璃珠 CPG-10 有機溶劑和水有機溶劑和水 剛性凝膠剛性凝膠 多孔硅膠多孔硅膠 Porasil 剛性大、剛性大、高高流速分離流速分離 有機溶劑和水有機溶劑和水 35第四節第四節 色譜分離方法的選擇色譜分離方法的選擇 一般可

26、根據試樣相對分子質量范圍、溶解度及一般可根據試樣相對分子質量范圍、溶解度及分子結構等進行分離方法的初步選擇分子結構等進行分離方法的初步選擇。一、根據相對分子質量選擇一、根據相對分子質量選擇二、根據溶解性選擇二、根據溶解性選擇三、根據分子結構選擇三、根據分子結構選擇36分子量分子量 水溶水溶性性 方方 法法 流動相流動相 可溶可溶 排阻色譜排阻色譜 水水 2000 不溶不溶 排阻色譜排阻色譜 水水 分配色譜分配色譜(同系物同系物) 各種各種 吸附色譜吸附色譜(異構物異構物) 各種各種 不溶不溶 排阻色譜排阻色譜(分子大小分子大小) 各種各種 反相液液色譜反相液液色譜 各種各種 可溶但不解離可溶但

27、不解離 排阻色譜排阻色譜 水水 陽離子交換色譜陽離子交換色譜(堿堿) 緩沖液緩沖液 可溶且不解離可溶且不解離 陰離子交換色譜陰離子交換色譜(酸酸) 緩沖液緩沖液 3時時, 形成雙電層，在高電場形成雙電層，在高電場的作用下，雙電層中的水合陽離子引起毛細管中的溶液整體的作用下，雙電層中的水合陽離子引起毛細管中的溶液整體向負極移動，速度向負極移動，速度電滲流電滲流413、分離過程：、分離過程：424 4、分離類型、分離類型 毛細管區帶電泳（毛細管區帶電泳（CZE）：最普遍、最基本的一種分：最普遍、最基本的一種分離模式。離模式。43毛細管凝膠電泳（毛細管凝膠電泳（CGE）：）：將聚丙烯酰胺在毛細管柱內

28、交聯生成凝膠。其具有多孔性，類將聚丙烯酰胺在毛細管柱內交聯生成凝膠。其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分擴似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠有效減小組分擴散，所得峰型尖銳，分離效率高。可分離測定蛋白質、散，所得峰型尖銳，分離效率高。可分離測定蛋白質、DNA等。等。44 毛細管膠束電動力學色譜（毛細管膠束電動力學色譜（MECC）：）： 用來分離中性物質，擴展了高效毛細管電泳的應用范圍。用來分離中性物質，擴展了高效毛細管電泳的應用范圍。 45二、儀器裝置二、儀器裝置46 電壓：電壓：030KV。 分離柱不涂敷任何固定液；分離柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光誘導

29、熒光檢測器（紫外或激光誘導熒光檢測器（10-1910-21 mol/L）47三、主要特點和應用三、主要特點和應用高分辨率高分辨率：理論：理論n高達數百萬塊，甚至數千萬塊；高達數百萬塊，甚至數千萬塊；高靈敏度高靈敏度：可檢測出低至：可檢測出低至10-21 mol/L濃度的物質；濃度的物質；高分析速度高分析速度：可在：可在3分鐘內分離分鐘內分離30種陰離子；種陰離子；1.7分分鐘分離鐘分離19種陽離子；種陽離子；4分鐘可分離分鐘可分離10種蛋白質；種蛋白質；試樣用量少試樣用量少：僅需幾：僅需幾nL（10-9 L）的試樣；）的試樣；儀器儀器簡單簡單，操作，操作成本低成本低：分析一個試樣僅需幾毫升：分析一個試樣僅需幾毫升流動液。流動液。48不足之處：不足之處： 進樣不夠方便。應用范圍相對較窄。進樣不夠方便。應用范圍相對較窄。 分析陰離子時，由陰極進樣，在陽極檢測。但分析陰離子時，由陰極進