1、轉(zhuǎn)基因成分實時熒光定性PCR檢測實驗室設(shè)計目錄目錄PCR實驗室各區(qū)域規(guī)劃實驗室各區(qū)域規(guī)劃各區(qū)域功能性及要求各區(qū)域功能性及要求人員及環(huán)境注意事項人員及環(huán)境注意事項轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)基因食品、實時熒光食品、實時熒光PCR技術(shù)技術(shù)轉(zhuǎn)基因食品及熒光轉(zhuǎn)基因食品及熒光定性定性PCR技術(shù)技術(shù)轉(zhuǎn)基因食品：轉(zhuǎn)基因生物是指通過轉(zhuǎn)基因食品：轉(zhuǎn)基因生物是指通過轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)基因技術(shù)改變基因組構(gòu)技術(shù)改變基因組構(gòu)成的生物，轉(zhuǎn)基因食品即是以轉(zhuǎn)基因生物為原料制作加工而成的生物，轉(zhuǎn)基因食品即是以轉(zhuǎn)基因生物為原料制作加工而成的食品。成的食品。轉(zhuǎn)基因檢測 技 術(shù)實時熒光PCR靈敏度低、易被污染、耗時長、試劑毒性大靈敏度高、抗污染能力強、耗時短、試

2、劑毒性小傳統(tǒng)熒光PCRPCR實驗室各區(qū)域規(guī)劃實驗室各區(qū)域規(guī)劃實驗室設(shè)計依據(jù)實驗室設(shè)計依據(jù)在由中華人民共和國衛(wèi)生部辦公廳于2002年1月14日下發(fā)的臨床基因擴臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法增檢驗實驗室管理暫行辦法衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號文)附件臨床基因擴增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)要求：要求：PCR擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)。實驗室設(shè)計實驗室設(shè)計標(biāo)本制備區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)擴增反應(yīng)混

3、合物配制和擴增區(qū)試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)實驗室平面圖工作流向?qū)Ｓ米呃犬a(chǎn)物分析區(qū)擴增區(qū)標(biāo)本制備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)緩沖區(qū)物品傳遞窗各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進行實驗室采用三十萬級條件建設(shè)（條件允許）氣 壓負 壓氣 壓正 壓氣 壓負 壓氣 壓正 壓各區(qū)域功能性及要求各區(qū)域功能性及要求試劑準(zhǔn)備區(qū)該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。標(biāo)本制備區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)

4、提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。擴增區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。產(chǎn)物分析區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。 本區(qū)是最主要的

5、擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。各區(qū)域功能性及要求各區(qū)域功能性及要求試劑準(zhǔn)備試劑準(zhǔn)備區(qū)配置設(shè)備區(qū)配置設(shè)備超凈工作臺或試劑配置箱試劑冰箱 可調(diào)移液器一套（四支）， 配有帶濾芯（防止氣溶膠）及無RNase酶的吸嘴 無粉的乳膠手套 渦旋器 無菌離心管 微量加樣器 天平 專用工作服標(biāo)本制備標(biāo)本制備區(qū)配置設(shè)備區(qū)配置設(shè)備 生物安全柜 樣本冰箱 可調(diào)移液器一套（四支）， 帶濾芯（防止氣溶膠）及無RNase酶的吸嘴 高速冷凍離心機 臺式高速離心機 渦旋器 恒溫設(shè)備 DNA提取試劑盒 無菌離心管 試管架 無粉的乳膠手套 專用工作服標(biāo)本標(biāo)本

6、制備制備區(qū)區(qū)設(shè)備設(shè)備配置配置(供供參考）參考）擴增擴增區(qū)配置設(shè)備區(qū)配置設(shè)備 熒光定量PCR儀 PCR擴增儀 二級生物安全柜（可根據(jù)需要） 微量加樣器 專用工作服擴增區(qū)設(shè)備配置擴增區(qū)設(shè)備配置(供參考供參考)產(chǎn)物分析產(chǎn)物分析區(qū)配置設(shè)備區(qū)配置設(shè)備 孵箱 洗板機 酶標(biāo)儀 電腦及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 專用工作服產(chǎn)物產(chǎn)物分析分析區(qū)區(qū)設(shè)備設(shè)備配置配置(供參考供參考)人員、環(huán)境及其他注人員、環(huán)境及其他注意意事項事項規(guī)范的規(guī)范的操作操作（人員）（人員）（1 1）擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須是分子生物學(xué)專業(yè)或從事過分子生物學(xué)實驗的技術(shù)人員；（2）在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換，穿防護服。此外，操作中使用一次性帽子有效地防止污染；（3）擴增產(chǎn)物分析區(qū)會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護。ABC工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分（1）各個實驗區(qū)域設(shè)置合理；（2）各個實驗區(qū)域要有明顯的標(biāo)記（如醒目的門牌或不同的地面顏色等）以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。合理的系統(tǒng)設(shè)置合理的系統(tǒng)設(shè)置（1）合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；（2）嚴(yán)格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。注意事項注意事項D