1、保健食品中金雀異黃素的測定Determination of genistein in health food2.試劑本標準所用試劑未經指定者，均為分析純（A.R）,水為石英亞沸蒸餾水。3.1甲醇（色譜純）3.2無水乙醚3.3甲醇+水（80+20）3.4金雀異黃素（Genistein） 標準品3.50.050 mol/L 醋酸銨，pH 4.6 :準確稱取 3.85 g 醋酸銨于小燒杯中，適量水溶解，轉移至1000 mL 容量瓶中，加水 500 mL，加入 3.00 mL 冰醋酸，搖勻，加水至容量瓶 刻度，搖勻即可。4. 儀器4.1高效液相色譜儀（二極管陣列檢測器或紫外檢測器）20.0lL 定量管

2、4.2超聲波清洗器4.3離心機 4000 r/min5. 分析步驟5.1 高效液相色譜參考條件5.1.1色譜柱：不銹鋼柱，內徑 4.6mm,長 250mm C18柱，填料粒徑 10m。5.1.2流動相：甲醇 +0.05 mol/L 乙酸銨,pH 4.6（46+54 ,v/v）5.1.3流量：1.2mL/min。5.1.4進樣量：20.0 此5.2 試樣制備5.2.1 保健食品：準確稱取 1g 試樣，加 50mL 甲醇水（3.3） 超聲提取 30min，上清液抽濾，殘渣用（3.3）甲醇水洗，洗 液一并抽濾，定容至 100.0mL，過 0.45lm 濾膜，測定。5.2.2豆奶粉類食品：準確稱取磨碎

3、的豆粉或奶粉類試樣5-10 g，用 60mL-100 mL 乙醚分三次脫脂，棄取乙醚層，加 50mL甲醇水（3.3）超聲提取 30min，上清液抽濾，殘渣用（3.3 ）甲醇水洗，洗滌液一并抽濾，定容后過0.45濾膜，測定。5.2.3 各種豆腐：準確稱取試樣 10g,用玻棒攪勻后用 60mL 乙醚分三次脫脂，加 50mL 甲醇水（3.3）超聲提取 30 min， 過濾，測量體積后過 0.45 m 濾膜，測定。5.2.4 豆腐絲、豆腐干：準確稱取試樣10g，加無水硫酸鈉研磨，轉入具塞三角瓶中，加 50mL 甲醇水（3.3）超聲提取30 min，過濾，定容后過 0.45lm 濾膜，測定。5.2.5金

4、雀異黃素儲備液：精密稱取金雀異黃素標準品10.00mg，用甲醇溶解并定容至 10.00mL。此液為1.000mg/mL。5.2.6 金雀異黃素應用液：分別取金雀異黃素儲備液0.0100、0.0500、 0.100、 0.300、 0.500、 1.25mL， 用甲醇定容至 10.0 mL（濃度各為 1.00、5.00、10.0、30.0、50.0、1251g/mL ）。在上述色譜條件下注入標準溶液和試樣溶液，以保留時間 定性，峰面積定量，外標法計算6. 分析結果的表述 6.1 計算ACiVXKX=-Aim式中：X:試樣中金雀異黃素的含量mg/kgA:試樣的峰面積或峰咼Ci:金雀異黃素標準溶液的

5、濃度,g/mLAi:標準溶液的峰面積或峰高m:試樣質量，gV:試樣定谷體積，mLK:稀釋因子6.2 結果表示：報告算術平均值的兩位有效數。7.允許差同一實驗室，同時測定或重復測定結果的相對偏差不 得超過 10%o8.準確度將試樣中加入不同濃度的金雀異黃素，做回收率實驗，回收率應在 85%110%范圍內。9.其它1.使用二極管陣列檢測器波長設定范圍210-400 nm;2. 可以建立金雀異黃素標準的吸收光譜譜庫，測定試樣 時試樣吸收光譜與標準的吸收光譜進行比較，可以克服單靠 保留時間定性的不足，增加定性的準確性；3根據色譜峰的峰純度可以判定是否有干擾物質存在。4.在標準儲備液可同時加入黃豆苷(Daidzin),染料木苷(Genistin),黃豆苷原(Daidzein)標準品，黃豆苷，染料木苷，黃豆 苷原不干擾金雀異黃素的測定。1. 范圍本方法規定了用高效液相色譜法測定保健食品和普通食 品中金雀異黃素的含量。本方法適用于保健食品和普通食品中金雀異黃素的測定。最低檢出限量為：0.1Jg;本方法最佳線性范圍：1.00125g/mL。2.方法提要試樣經乙醚脫脂，棄取乙醚后用甲醇水( 80+20, v/v ) 聲提取