1、 實驗項目實驗項目 蛋白質(zhì)變性與沉淀蛋白質(zhì)變性與沉淀 2學(xué)時學(xué)時 蛋白質(zhì)變性蛋白質(zhì)變性 蛋白質(zhì)受某些物理或化學(xué)因蛋白質(zhì)受某些物理或化學(xué)因素的影響，素的影響，空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，生物活性喪失。稱為蛋白質(zhì)變性。生物活性喪失。稱為蛋白質(zhì)變性。 蛋白質(zhì)沉淀：蛋白質(zhì)沉淀： 使蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象。使蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象。1 1、鹽析、鹽析2 2、重金屬鹽沉淀、重金屬鹽沉淀3 3、有機酸試劑沉淀法、有機酸試劑沉淀法4 4、有機溶劑沉淀法、有機溶劑沉淀法 維持蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素：維持蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素： 1.1.水化膜水化膜 2.2.顆粒表面電荷顆粒表面電荷去除上述穩(wěn)定因素可使

2、蛋白質(zhì)沉淀析出。去除上述穩(wěn)定因素可使蛋白質(zhì)沉淀析出。一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康?1. 1.掌握蛋白質(zhì)變性與沉淀兩者掌握蛋白質(zhì)變性與沉淀兩者 的關(guān)系；的關(guān)系； 2.2.熟悉刻度吸量管的正確使用；熟悉刻度吸量管的正確使用； 3.3.了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的原了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的原 理及各種沉淀方法。理及各種沉淀方法。二、實驗儀器與試劑二、實驗儀器與試劑 1.1.儀器儀器試管、刻度吸量管、洗耳球等。試管、刻度吸量管、洗耳球等。 2. 試劑試劑 5蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)溶液、溶液、 2.5蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)溶液、溶液、 10ZnSO4溶液、溶液、 0.1mol/LNaOH、 1三氯醋酸、無水乙醇、三氯醋酸、無水乙醇、N

3、aCl（固體）（固體）三、實驗內(nèi)容原理及操作步驟三、實驗內(nèi)容原理及操作步驟1.1.重金屬鹽及某些酸類沉淀蛋白質(zhì)重金屬鹽及某些酸類沉淀蛋白質(zhì)2.2.乙醇沉淀蛋白質(zhì)乙醇沉淀蛋白質(zhì)（一）實驗內(nèi)容（一）實驗內(nèi)容1.1.重金屬鹽及某些酸類沉淀蛋白質(zhì)重金屬鹽及某些酸類沉淀蛋白質(zhì)1 1）實驗原理）實驗原理COO-NH3+POH-H+重金屬離子M+酸根X-COO-NH2PCOOHNH3+PCOO-M+NH2PCOOHNH3+X-P（二）操作步驟及原理（二）操作步驟及原理2 2）操作步驟）操作步驟試劑（滴）試劑（滴）試管試管1試管試管2試管試管35% 蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液2滴滴2滴滴2滴滴0.1mol/L Na

4、OH2滴滴10% ZnSO420滴滴20滴滴1% 三氯醋酸三氯醋酸20滴滴現(xiàn)象現(xiàn)象3 3）觀察、記錄實驗現(xiàn)象，并解釋之。）觀察、記錄實驗現(xiàn)象，并解釋之。結(jié)果記錄結(jié)果記錄試劑（滴）試劑（滴）試管試管1試管試管2試管試管35% 蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液2滴滴2滴滴2滴滴0.1mol/L NaOH2滴滴10% ZnSO420滴滴20滴滴1% 三氯醋酸三氯醋酸20滴滴現(xiàn)象現(xiàn)象 沉淀沉淀 沉淀沉淀 澄清澄清實驗現(xiàn)象分析實驗現(xiàn)象分析n試管試管1 1中蛋白液在氫氧化鈉調(diào)節(jié)下，其中蛋白液在氫氧化鈉調(diào)節(jié)下，其pHpIpHpI，蛋蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，加入，加入ZnSOZnSO4 4 ，ZnZn2+2+

5、與帶有負(fù)與帶有負(fù)電荷的蛋白質(zhì)分子結(jié)合生成不溶于水的鹽沉淀電荷的蛋白質(zhì)分子結(jié)合生成不溶于水的鹽沉淀。n試管試管2 2中蛋白液加有三氯醋酸，其中蛋白液加有三氯醋酸，其pHpIpHpI，蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)分子帶正電荷，三氯醋酸根與帶有正電荷的蛋白分子帶正電荷，三氯醋酸根與帶有正電荷的蛋白質(zhì)分子結(jié)合成不溶于水的鹽沉淀。質(zhì)分子結(jié)合成不溶于水的鹽沉淀。n試管試管3 3中只加有蛋白液和中只加有蛋白液和ZnSOZnSO4 4，蛋白質(zhì)分子因不蛋白質(zhì)分子因不帶電荷或帶較少的正、負(fù)電荷，與帶電荷或帶較少的正、負(fù)電荷，與ZnZn2+2+不反應(yīng)。不反應(yīng)。2.2.乙醇沉淀蛋白質(zhì)乙醇沉淀蛋白質(zhì)1 1）實驗原理）實驗原理 乙醇乙醇

6、溶解于水，溶解于水，破壞破壞蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)分子的分子的水化膜水化膜，加入少量，加入少量中性鹽中性鹽抑制蛋白質(zhì)的解離，抑制蛋白質(zhì)的解離，使電荷減少使電荷減少，沉淀更完全。沉淀更完全。2）操作步驟）操作步驟試劑（試劑（mL）試管試管1試管試管22.5%蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液0.5 mL0.5 mL結(jié)晶結(jié)晶NaCl數(shù)粒（適量）數(shù)粒（適量）無水乙醇無水乙醇1mL1mL現(xiàn)象現(xiàn)象3）觀察、記錄實驗現(xiàn)象，并解釋之。）觀察、記錄實驗現(xiàn)象，并解釋之。結(jié)果記錄結(jié)果記錄試劑試劑試管試管1試管試管22.5%蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)溶液溶液0.5 mL0.5 mL結(jié)晶結(jié)晶NaCl數(shù)粒（適量）數(shù)粒（適量）無水乙醇無水乙醇1mL1mL現(xiàn)象

7、現(xiàn)象 沉淀沉淀沉淀充分沉淀充分實驗現(xiàn)象分析實驗現(xiàn)象分析 試管試管1中加入無水乙醇，無水乙醇破壞蛋中加入無水乙醇，無水乙醇破壞蛋白質(zhì)分子表面的水化膜，使蛋白質(zhì)沉淀。白質(zhì)分子表面的水化膜，使蛋白質(zhì)沉淀。 試管試管2中加入無水乙醇，無水乙醇破壞蛋中加入無水乙醇，無水乙醇破壞蛋白質(zhì)分子表面的水化膜，使蛋白質(zhì)沉淀。白質(zhì)分子表面的水化膜，使蛋白質(zhì)沉淀。又加入少量的氯化鈉中性鹽，使蛋白質(zhì)分又加入少量的氯化鈉中性鹽，使蛋白質(zhì)分子表面的電荷減少，沉淀更充分。子表面的電荷減少，沉淀更充分。 五、注意事項五、注意事項1.1.試劑滴管不能交叉使用試劑滴管不能交叉使用，防污染試劑，防污染試劑2.2.刻度吸量管不能交叉使用刻度吸量管不能交叉使用，否則污染，否則污染 試劑，影響反應(yīng)現(xiàn)象。試劑，影響反應(yīng)現(xiàn)象。3.3.做完實驗把做完實驗把試管和試管架洗干凈試管和試管架洗干凈， 桌面擦干凈，桌面擦干凈，登記簽名登記簽名。4.4.值日生聽老師安排，認(rèn)真打掃，值日生聽老師安排，認(rèn)真打掃，經(jīng)老經(jīng)老 師批準(zhǔn)才能離開實驗室?guī)熍鷾?zhǔn)才能離開實驗室。 六、思考題六、思考題 為什么臨床搶救重金屬中毒患者用為什么臨床搶救重金屬中毒患者用雞