1、人參水提物實驗樣品的制備人蠢.作為我國的傳統名貴中藥.C有兩T余年的應用歷史囚制備傳統中商湯劑般采用煎批法°煎盤法是以水為提取洛Sb將藥材1W熱盍沸一定的時間而獲樹盍出液.并重復進存若干Si，以提取Hff效成廿的一種傳竦方法.又稱煮提取或煎屜法a氷是強極性溶SW，具仃價愿、熱、詫用安亍的特點。本ift丈利用中醫學傳址的煎蠱法,提取人勢的臺效成分.符合中醫伎絨用藥習flb能夠提取相對較夢的冇效城分.操作簡便，捉取效率島口人替小禽冇移種化學成爪如】人參電成*人卷婁朝h抒發油*蚩白質.核輙夢肽類、氨坯戰、維粧素和蟻量元素尊國。人參氷提物中主要含仃務締*寡楮和巳忒答活性誡分B人少爭紳繪人咎的

2、上要活性咗分由茹找的醉戍刖類物質綃命而戰*述可能含有氮基、St醴棊、織戰慕或磷繼站等親水基HL是極性較大的人分產化存物，妳水貞捉的方式柑對溫和*隧夠較人程度的保持塞K原有的結構特征創卜因此巧采用木提的方式矣中提取婁抽"本論文忡先采用熱水盍提的方法提取人參報小的水溶性提取物，熾后利用乙諄機譴法分離出人螯根水提物的多楮戚分再利用大扎吸附鞫腑將乙醉加淀上清夜*1啲人釦己就和寡犧成分分離(E2.1材料與方法市皆的人(ParHKginseiigC.AMay)嚴地*山林抗松.2AA賓驗材料2.1.1.1試劑乙橇天母天秦犧細化學品有限公可正1醉天律天霍桔細化學品有限公聞天津天攜精細化學品有覘公司魁

3、買化鐘北京化工廠氣缸化鈉北慮化工廠氯化鈉北京化TJ'比木乙醉北京化工廠北京化工廠濃猛酸北慮化工廠五緘化二謙北就化匚廠RE-52AA轉蒸發儀TDL-5A低速離心機DGSY-III電熱恒溫水浴禍BA-T電動磁力攪樣器DT-500電子天平單道可調微毘移液器723可見分光光度計HY-4調速多用加蕩器上海亞榮生化儀器廠上海菲恰爾分析儀器有限公司北京市盤成科技開發公司金壇國華儀器廠江蘇常熟雙杰測試儀器廠ThennoElecnonCoipaiationIII東烏密彩虹分析儀器仃限公nj金壇市榮華儀器制造仃限公訶實驗方法人參水提物的制備MZ5OOgI：燥的人參根，加入7L蒸飴水.浸泡過夜，100X：提

4、取4h,120II尼龍布過濾。濾洽取父捉取2次，毎次4h將三次所紂濾液介并，60T水浴S-T1L.4500ipm.15min.'iA'l-J門；伏：上分離人參多楮根據本實驗室已經建立的實驗方法進行人鑫夢抽的提取和分離小。將人鑫水提物離心（4500rpn,15min）除去雜質，離心帀S慢攪并上瀛同時加入無水乙粹至終濃度為80%沉淀過夜。離心（4500ipm15min>,收集沉淀，并依次川95%乙購、無水乙醇、乙魅脫水洗滌。將沉淀豪于真空干燥器中I燥24h,得深褐色粉末狀人參粗多糖.將Sevag試劑（三氯甲烷:正丁醉=4:1,vAr）加入E抽溶液中.劇烈振蕩2小時，靜置分層后

5、離心云除游離蛋白產4：的凝膠狀沉淀.取上沽.重復進行5次。上沽液減爪濃縮.除去冇機游劑，加入4倍休枳的無水乙醇，沉淀過夜，離心，收集沉淀，常規I：燥，得公蛋門人參篡抽WGP,離子交換柱層析分離人鑫務抽：丿、蛋白人畚多WlTOP溶蒸飭水.利用DEAE-纖維索離/交換衣析11（8.0x20cm.Cl樂）進行分離沆速12.5mlAnin.毎試管收集50mL洗脫液，兀酚.硫酸法檢測洗脫液的糖含童間脛基聯苯法測定洗脫液的抽矗酸含量。首先用蒸惴水洗脫，得人參中件（W3PNX再用0.5MNaCl水溶液洗脫.炭惴水透析除鹽后.得人參果膠（W3PA）.人參寡糖和皂慮的分離制備將乙醇醉沉所得上活部分進行旋轉蒸發冋

6、收乙醉，jJCjX空冷凍T燥.御到III人參皂歡、人參寡橢，少量色素與其他雜質組成的混介物。稱取20g人孔樹脂沖先用蒸惴水洗滌.90%乙醉浸泡過夜，450nm下叱色測定,證明無苯類物質方可使用.然后采用濕法裝入層析柱,蒸傭水洗至無乙竹:妝1g人參根水提物除丿、多諂后的混介物的凍樣品，蒸惴水溶解，然后上樣人幾樹脂柱.靜置過夜.使皂昔盡雖完全吸附在大孔樹脂上P）用蒸飾水洗脫人參寡抽部分同時TLC檢測毎瓶所收集的成分。所用的展開劑為正丁醉：甲酸：水=4：6：1（v/v/v，上層）.鉉色劑為5%硫酸乙醉，/HlOOr烘箱中放置1-2min色,點到無寡箱為止。將收集的寡糖部分60C水浴濃縮，5012冷凍

7、干燥，得到淡黃色的人參靠糖。以10、30、50、70和90%梯度濃度乙醉各100ml,對樹脂上吸附的人參皂忒進行洗脫.同時進行TLC檢測（展層劑為：正丁醉：甲酸：水=4：6：1<v/v）>.I'L至樣晶點不再顯色，則證明洗脫完畢。將收集的皂仔部分進行旋轉蒸發.609水浴濃縮50匸冷凍T燥，得到淺黃色的人參皂試2.2結果與討論人參多抽的分離和提取按照木實驗審張旭彎人建工的人參多軸的分離純化方法嘰500g人參煤根，經過1009熱水提取.共223g人參水提物。將人參水提物經80%乙醉沉淀，常規干燥，得60.8g人參爹WiWGP,收率為12.2%,人兮匕的經DEAE-汀維杠煨析分離

8、得到人費淀粉樣中H.E抽W3PN和人歩果膠WGPA的收率分別為60.5%和17.1%人整務抽齊級分的細成分析結果見衣21,VIDPN含仃95%窗萄«f,是淀粉樣簡聚糖WGPA的半孔抽廉酸占44.2%,是果膠類酸性多糖。所得到的結果本實驗室張尬等人的結果相同。人參多W!提取匚藝流程見圖21。人參根1001：熱水提取II殘流人參水提物80%乙醇沉淀10-90%乙的10-90%乙的上消大孔樹脂人夢琛糖人參皂貳0.5MNaCI人參粗女他Sevag法脫蛋白人參多糊（WGP）DEAE-纖維親柱層析蒸餉水|人參中性多樹（WGPN）人參果膠（WGP2圖21人參多朗、寡楮和皂昔的提取過程?<2-

9、1人參篡抽成分分析旳SampleProteinCaibolrdiateUroiiicacid(%Monosaccliaiidecomposition(mol%)(%)(%>GalGlcAiaManRhaGalAGlcAWGP0.757.110.06.877.94.61.01.18.7-WGPN0.162.80.83.395.31.3譏GPA0.927.334.0118.018.515.52.5人參靠抽和人參總皂仟的分離人參燥根水提物除去人參姜抽后，利用人孔吸附樹脂法繼續對剩余醉沉I：ii'nlff分離，共得到93.7g人夠寡抽兒分離勺;"1S7%./、.為23.9g.其分離得率為4.8%綜上所述.I燥人參根經熱水提取，分離得到12.2%人參務軸，18.7%人參廉納和4.8%的人參皂忒.與文獻比較,木方法從人參根中分離人參總皂忒E和人111的訂彳X、及人鑫多WWGP經DEAE-纖維林析分離得到人參淀粉樣中性姜抽隊GPN和人參果膠VIGPA.英中認GPN上要為95.3%的匍匍鞘構成.而隊GPA的半乳抽廉酸占總駅的44.2%o