1、第第4 4章章 胚胎培養胚胎培養 大大 家家 好好 ！植物組織培養植物組織培養第第4 4章章 胚胎培養胚胎培養(3學時學時)胚胎培養胚胎培養是指將植物的胚胎與母體分離，培是指將植物的胚胎與母體分離，培養在人工的培養基上形成幼苗的過程，包括養在人工的培養基上形成幼苗的過程，包括幼胚培養、成熟胚培養、胚乳培養、胚珠培幼胚培養、成熟胚培養、胚乳培養、胚珠培養以及子房培養。養以及子房培養。第第4章章 胚胎培養胚胎培養胚培養胚培養胚乳培養胚乳培養胚珠和子房培養胚珠和子房培養本章內容本章內容l(1)掌握胚培養和胚乳培養的操作步驟；掌握胚培養和胚乳培養的操作步驟；l(2)了解胚珠培養和子房培養的操作步驟。了

2、解胚珠培養和子房培養的操作步驟。本章教學目的與要求本章教學目的與要求第第4章章 胚胎培養胚胎培養 克服遠緣雜種的不育性，克服遠緣雜種的不育性， 使胚胎發育不完全的植株獲得后代，使胚胎發育不完全的植株獲得后代， 縮短育種年限，提高育種效率。縮短育種年限，提高育種效率。第第4章章 胚胎培養胚胎培養胚胎培養的意義：胚胎培養的意義：種子的結構種子的結構胚的發育胚的發育第第4章章 胚胎培養胚胎培養第一節、胚培養胚培養：胚培養：采用人工的方法將胚從種子、子房或胚珠采用人工的方法將胚從種子、子房或胚珠中分離出來，再放在無菌的條件下，讓其進一步中分離出來，再放在無菌的條件下，讓其進一步生長發育，以至形成幼苗的

3、過程。生長發育，以至形成幼苗的過程。第第4章章 胚胎培養胚胎培養一、培養類型一、培養類型1 1、幼胚培養、幼胚培養2 2、成熟胚培養、成熟胚培養二、培養過程：二、培養過程： 1、幼胚培養過程：、幼胚培養過程：l取子房取子房l常規表面消毒常規表面消毒l解剖鏡下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。解剖鏡下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。l固體培養固體培養l幼胚的發育方式：幼胚的發育方式：l 1）胚性發育；胚性發育；l 2）早熟發育；早熟發育；l 3）產生愈傷組織產生愈傷組織第一節、胚培養第一節、胚培養2、成熟胚培養過程、成熟胚培養過程-以玉米成熟胚培養為例以玉米成熟胚培養為例1）玉米種子消毒）玉米種子

4、消毒2）在黑暗條件下，將種子放在無菌濕潤的含濾紙的）在黑暗條件下，將種子放在無菌濕潤的含濾紙的培養皿中培育培養皿中培育6hr。3）將吸漲的種子在無菌培養皿內將胚分離出來將吸漲的種子在無菌培養皿內將胚分離出來4）無菌水沖洗）無菌水沖洗3次次5）在）在MS培養基中暗培養。培養基中暗培養。6）觀察：）觀察：2d出現胚根，出現胚根，3-4 d出現胚芽，出現胚芽，10d長成長成幼苗。幼苗。玉米成熟胚的培養玉米成熟胚的培養第一節、胚培養第一節、胚培養三、培養基與培養條件三、培養基與培養條件1、培養基、培養基2、培養條件：培養條件： 1 1）糖類：）糖類： 2 2）附加成分）附加成分 3 3）光照）光照 4

5、 4）培養方式：）培養方式：l 幼胚培養適于液體培養，幼胚培養適于液體培養，l 成熟胚適于固體培養成熟胚適于固體培養 第一節、胚培養第一節、胚培養四、胚培養的應用四、胚培養的應用1)1)在遠緣雜交育種中在遠緣雜交育種中: :克服雜種胚不能正常發育克服雜種胚不能正常發育2)2)克服珠心胚的干擾克服珠心胚的干擾, ,提高育種效率提高育種效率3)3)縮短育種周期縮短育種周期4)4)測定休眠種子的萌發率測定休眠種子的萌發率5)5)理論研究中的應用理論研究中的應用第一節、胚培養第一節、胚培養胚乳培養胚乳培養是指將胚乳從母體上是指將胚乳從母體上分離出來，在無菌的環境條件分離出來，在無菌的環境條件下培養，使

6、其生長發育形成幼下培養，使其生長發育形成幼苗的過程。苗的過程。第二節、胚乳培養第二節、胚乳培養第第4章章 胚胎培養胚胎培養n胚乳外植體制備胚乳外植體制備:種子消毒種子消毒-取出胚乳取出胚乳n培養培養:WhiteWhite或或MSMS誘導培養基誘導培養基-25-2725-27- -暗或弱暗或弱光光n發育發育:誘導形成愈傷組織誘導形成愈傷組織-再分化形成胚狀體或再分化形成胚狀體或不定芽不定芽-生根培養生根培養-植株。植株。一、胚乳培養過程一、胚乳培養過程 胚乳培養過程胚乳培養過程胚乳胚乳胚狀體發育成苗胚狀體發育成苗不定芽苗不定芽苗愈傷組織愈傷組織形態發生形態發生胚乳植株染色體數目的檢查胚乳植株染色

7、體數目的檢查l取根尖、幼葉或愈傷組織取根尖、幼葉或愈傷組織l0.2%-0.5%秋水仙素堿溶液在秋水仙素堿溶液在25浸泡浸泡4-8hrl流水沖洗流水沖洗5-10minl卡諾氏液或卡諾氏液或FAA液固定液固定l1mol鹽酸，鹽酸，60 水浴水浴8-10minl染色、壓片、鏡檢、計數染色、壓片、鏡檢、計數二、培養基與培養條件二、培養基與培養條件培養基培養基培養條件培養條件三、胚乳再生植株的染色體倍數三、胚乳再生植株的染色體倍數l穩定型：穩定型：三倍體三倍體l畸變型：畸變型：除少數是三倍體，多數是由多種倍性除少數是三倍體，多數是由多種倍性細胞組成的嵌合體細胞組成的嵌合體四、胚乳培養的應用四、胚乳培養的

8、應用1 1、胚乳培養胚乳培養可得到三倍體植株，產生無籽果可得到三倍體植株，產生無籽果實。或加倍形成六倍體植株進行育種。實。或加倍形成六倍體植株進行育種。2 2、胚乳培養胚乳培養可得到倍性不同的愈傷組織，可可得到倍性不同的愈傷組織，可分離和篩選各種類型的非整倍體植株。分離和篩選各種類型的非整倍體植株。第三節第三節 胚珠和子房培養胚珠和子房培養一、胚珠培養一、胚珠培養定義：是指將胚珠從母體上定義：是指將胚珠從母體上分離出來，在無菌的人工環分離出來，在無菌的人工環境條件下培養，使其生長發境條件下培養，使其生長發育形成幼苗的過程。育形成幼苗的過程。倒生胚珠倒生胚珠胚珠培養類型：胚珠培養類型：1、受精胚

9、珠的培養、受精胚珠的培養2、未受精胚珠的培養、未受精胚珠的培養示胚珠的位置示胚珠的位置（二）、培養基：（二）、培養基：White,Nitsch,MSWhite,Nitsch,MS（三）、胚珠的發育：三）、胚珠的發育：A A 受精胚珠：一是形成種子；二是形成愈傷組織受精胚珠：一是形成種子；二是形成愈傷組織B B 未受精胚珠：形成單倍體植株。未受精胚珠：形成單倍體植株。（一）、胚珠培養的基本過程：（一）、胚珠培養的基本過程：雌蕊與子房的類型雌蕊與子房的類型二、子房培養二、子房培養定義定義：子房培養是指將子房從子房培養是指將子房從母體上分離出來，在無菌的母體上分離出來，在無菌的人工環境條件下培養，使

10、其人工環境條件下培養，使其生長發育形成幼苗的過程。生長發育形成幼苗的過程。類型類型授粉子房的培養授粉子房的培養未授粉子房的培養未授粉子房的培養（一）子房培養的培養過程（一）子房培養的培養過程l1 1、制備外植體、制備外植體：在開花前后適宜時期取子房：在開花前后適宜時期取子房或幼花，消毒或幼花，消毒l2 2、子房培養、子房培養：固體或液體培養均可：固體或液體培養均可（二）培養基（二）培養基:N6,MSp性細胞（卵細胞、助細胞、極核、反足細性細胞（卵細胞、助細胞、極核、反足細胞）胞）-胚狀體或愈傷組織胚狀體或愈傷組織-單倍體植株；單倍體植株；p體細胞（珠被、子房壁）體細胞（珠被、子房壁）-胚狀體或

11、愈傷胚狀體或愈傷組織組織-二倍體植株；二倍體植株；（三）培養子房的發育：（三）培養子房的發育：三、胚珠和子房培養的應用三、胚珠和子房培養的應用（二）子房培養的應用（二）子房培養的應用l1 1、授粉子房培養目的授粉子房培養目的：挽救雜種胚：挽救雜種胚l2 2、未授粉子房培養目的未授粉子房培養目的：獲得單倍體植株。：獲得單倍體植株。（一）胚珠培養的應用（一）胚珠培養的應用l 1 1、受精胚珠培養目的受精胚珠培養目的： 一是打破種子的休眠；一是打破種子的休眠； 二是挽救胚的發育，以獲得雜交種。二是挽救胚的發育，以獲得雜交種。l 2 2、未受精胚珠培養目的未受精胚珠培養目的：獲得單倍體植株。：獲得單倍體植株。l(1)胚胎培養包括：幼胚培養、成熟胚培養、胚珠培養、胚胎培養包括：幼胚培養、成熟胚培養、胚珠培養、子房培養和胚乳培養等。子房培養和胚乳培養等。l(2)胚胎培養的意義。胚胎培養的意義。l(3)離體胚培養方法：成熟胚和幼胚培養。離體胚培養方法：成熟胚和幼胚培養。l(4)未成熟胚培養，三種不同的生長方式，