1、中藥槐角中染料木素提取新工藝的開發研究項目可行性報告一、項目摘要 染料木素廣泛存在于豆科植物及槐角中，具有防治腫瘤、骨質疏松癥、心血管疾病、美容，減肥等多方面的藥理作用，使得染料木素原料其相關醫藥產品已成為近年來人們研究與開發的熱點，在國內外已有染料木素保健品上市。特別是對骨質疏松癥的預防和治療，已開發為國家中藥一類新藥進入期臨床試驗。染料木素的潛在性市場需求量越來越大。然而，令人遺憾的是目前國內還沒有一家具有染料木素原料合格的產業化廠家來滿足市場的需求；對于生產廠家來說，關鍵是沒有一個能大量生產高純度的染料木素的生產工藝提供給他們，使其廣泛應用由于染料木素原料生產成本過高而受到明顯的限制。最

2、近報道的從槐角中提取染料木素的專利工藝為染料木素的大量應用提供了新的渠道，但是，由于其工藝采取醇提取和有機溶劑脫脂的方法，一方面增加了成本，另一方面易造成環境污染。這就迫切要求開發一種符合環保、簡單可行、成本低廉的生產工藝，大量生產染料木素,而本項目的實施就能解決這個難點問題。本項目采用水性助溶劑替代醇提取并省去有機溶劑脫脂的方法，將使生產成本由每公斤1400元降到800元以下，且染料木素純度99%，收率1.2%，年產量可達10噸。使染料木素制備達到高效、環保、高純度、低成本。通過本項目的研發，擬建立染料木素提取新工藝、制定質量標準和規范化操作規程，形成行業或國家標準，取得技術創新專利。本項目

3、的實施，需購槐角1000噸，可以直接增加農民收益400萬。可以推動我省藥材種植業和陜西區域經濟的的發展，變資源優勢為經濟優勢。隨著我公司低成本染料木素原料藥的大量生產，其相關醫藥產品開發研究將越來越多，使得染料木素原料、相關制劑及系列化新產品適應當前消費者追求健康和提高生活質量的目標要求，因此具有良好的市場發展前景，將產生良好的經濟效益和社會效益。二、項目的意義和必要性1、項目相關技術國內外發展現狀、趨勢染料木素(Genistein)又叫金雀異黃素，化學名為5,7,4-三羥基異黃酮。它廣泛存在于豆科植物和廣豆根、國槐、高麗槐木的果實中，因其結構與雌激素相似，故稱之為植物雌激素（phytestr

4、ogens）。研究表明，染料木素具有重要生理功能15，如：抗腫瘤作用，特別是對激素依賴性腫瘤如乳腺癌、前列腺癌、結腸癌、子宮內膜癌和卵巢癌。植物雌激素染料木素與雌二醇競爭性地結合雌激素受體，從而抑制雌二醇對腫瘤細胞的促有絲分裂，抑制腫瘤的生長。預防和治療骨質疏松癥。預防和治療心血管疾病。它還具有減少女性的熱潮紅與絕經期綜合證、美容以及減肥等多方面的藥理作用，在國內外已開發成保健品上市。由于染料木素有如此重要的生理功能，成了近年來人們研究與開發的熱點，特別是對骨質疏松癥的預防和治療，國內已有單位將其開發為預防和治療骨質疏松癥的國家中藥一類新藥進入期臨床試驗6。雖然染料木素具有廣泛而重要的生理功能

5、，然而，令人遺憾的是染料木素原料藥的提取研究卻遠遠落后于它的生理作用和功能研究，使其廣泛應用由于染料木素原料藥生產成本過高而受到明顯的限制。國內外對染料木素提取、制備的研究一直在進行，起初，染料木素的制備大多從植物中提取，劉大川等7用正交實驗和單因素實驗確定了從大豆胚牙中大豆異黃酮甙的最佳提取工藝，收率為1.4%。閆祥華等8采用多種溶劑浸提法，從大豆中提取染料木素，純度為95%（HPLC法），人們用不同的方法如生物反應器培養、超濾法、液相色譜法、萃取法等從大豆中提取染料木素8-12。曲麗萍等4最新報道從淡豆豉中制備出染料木素。雖然從大豆中提取染料木素研究報道較多，但是，可能是由于大豆含植物蛋白

6、和油脂太多的緣故，使提取工藝復雜，得到純品（純度98%）相當困難，造成其生產成本高、價格昂貴，到目前尚未見其純品的批量生產上市。也有從其它植物中提取、制備染料木素的報道13-15。如以紅車軸草、山葵葉柄(日本產植物萮菜)為原料制備染料木素。Sturtz, M等16建立了從大豆、紅車軸草(紅三葉草)中用色譜法分離、純化異黃酮工藝，并用核磁共振光譜確證了異黃酮的結構。Weber J等17公告了一種染料木素的制備工藝，用堿性有機溶劑從以大豆為培養物的百金花屬聚多糖孢子體發酵菌液中提取染料木素。也有從植物蛋白乳清、豆科蔬菜蛋白提取物中提取染料木素的報道18-21 。從紅車軸草、日本萮菜等原料或植物提取

7、物中雖然也能夠得到染料木素，但其工藝中多采用有機溶劑提取和脫色，并用復雜方法純化，而且產品純度不高，成本加大，限制了染料木素的大量應用。從槐角中提取槐屬甙(俗名槐角甙)和染料木素早在80年代就有人報道22，23，但只是簡單提取、純化、結構分析等實驗室研究。以后也陸續有這方面的報道24，25，徐任生等人曾將槐屬甙經酸解去糖制備苷元26 ，但至今尚未見工業生產的報道。最近幾年對槐樹及其產物中的染料木素及相關成分研究的報道越來越多。Tang YP等27研究了從槐樹果皮中獲得了sophorophenolone和染料木素等13個已知化合物。田中民等28。29建立了實驗室提取、純化染料木素4葡萄糖苷的方法

8、，獲得了結晶。他們認為超聲波提取方法和回流法相比具有省時、操作簡便等優點。Park Youngki等30從日本槐樹皮中提取和鑒定了染料木素等四種化合物的。劉曉華31的專利涉及一種含槐實、葡萄籽、皮提取物的組合物及其制備方法。周佳32發明一種從槐角中提取染料木素的方法，它主要包括醇提、水沉、回流、加熱水解、結晶等步驟，染料木素的產率在1.0%以上，純度大于95%，遠遠高于大豆染料木素的收率。王四旺、王增祿等人33發明了從槐角中提取槐屬甙，再將槐屬甙酸解成染料木素的制備工藝，獲得純度達到藥用級的染料木素單體。其工藝收率為0.54%，每克成本小于10元，使染料木素作為藥品原料應用成為可能33,34。

9、現已將其開發成預防和治療骨質疏松癥的國家中藥一類新藥而進入期臨床試驗研究。中國食品報2004年08月曾以“臨床研究獲批染料木素新成果破異黃酮市場僵局”為題進行報道6 。雖然該工藝為染料木素的大量應用提供了新的渠道，但是，由于其工藝采取醇提取和有機溶劑脫脂的方法，一方面增加了成本，另一方面易造成環境污染。目前，我們經過多年研究的從中藥槐角中提取染料木素新工藝,獲得初步的結果，解決了以往工藝不能解決的問題，新工藝將使染料木素的制備做到高效、環保、高純度、低成本。我們初步探索的從中藥槐角中用水性助溶劑提取染料木素的新工藝,其主要步驟為：水性助溶劑提取洗滌酸解結晶收集結晶干燥成品（原料藥）檢驗。該工藝

10、的初步研究結果表明，其產品染料木素純度達到99%（HPLC歸一化法），已符合國家新藥單體藥物的純度要求，收率達到1.2%以上。染料木素水性助溶劑提取法的成本大大小于采取醇提取和有機溶劑脫脂法的成本。本法提取工藝簡單易行、穩定、收率高、環保，使染料木素的廣泛應用成為可能。陜西省科學技術信息研究所查新中心“用水性助溶劑，從中藥槐角中經浸提、沉淀、洗滌、酸水解、水洗后結晶，制備染料木素和染料木素的生產規范化操作規程”進行檢索，分析比較：“除國內相關文獻28、32、33、35提及制備工藝中酸水解一個步驟和文獻49對染料木素原料藥及其膠囊制劑進行了質量標準研究外，其它國內相關文獻未見與查新項目“中藥槐角

11、中染料木素提取新工藝的開發研究”查新點內容相同的報道。在外文文獻中未見提及與查新項目“中藥槐角中染料木素提取新工藝的開發研究”查新點內容相同的報道。隨著染料木素生產及相關新產品研究的進展，國內外對染料木素應用市場也在不斷擴大，呈現良好的發展前景。國外染料木素研究越來越熱，僅在PubMed網上輸入genistein一搜即可搜到7千余篇與染料木素有關的研究論文。此項研究之熱，由此可見一斑。作為試劑級的染料木素，國外早于國內。Sigma公司出售的來源于大豆的染料木素（純度為98%），2000年價格為35美元/5mg/1個包裝，2006年為44.2美元/5mg/1個包裝。化學合成品的價格為為22.7美

12、元/5mg/1個包裝（見sigma試劑目錄）。北京中醫藥大學生化室已從大豆中提取染料木素，純度為98%，已作為純品試劑出售，40元（RMB）/mg。我國近年大豆異黃酮及染料木素的開發速度甚快，山東三維、石家莊華北制藥、哈高科豆企食品公司、清華大學生物科學和技術系等幾十家企業生產大豆異黃酮。估計生產能力達200噸，并有部分出口。產品純度一般在1040，高的達95。其中大豆苷50，染料木苷40。低純度產品市場價1500元kg。高純度的染料木素主要由中間體生產廠家進行進出口貿易。目前上市商品主要是經衛生部批準的多種功能性保健品如金轉停膠囊（每粒為100mg，內含genistein 1418mg，15

13、元/粒）、安睡美膠囊、天雌素大豆異黃酮營養片、天能中年寶片等產品，其主要成分均是染料木素或富含染料木素的原料6，36。中國藥網（）報道美國的大豆異黃酮（含染料木素）的功能性食品已達30余種，如Genistein form soy tabs， 7.92美元/60片。美國國際著名的玉米深加工企業CARGILL推出了大豆異黃酮的飲料和口嚼片。隨著科學技術的發展，新技術的不斷出現和染料木素需求的大量增加，必將促進染料木素制備工藝向環保、簡單、易行、穩定、收率高的方向發展。總之，染料木素提取工藝技術已取得進展，制備工藝在不斷完善，其成本亦越來越低，質量越來越好，隨著我公司低成本染料木素原料藥的大量上市，

14、其相關醫藥產品開發研究將越來越多，相信在不遠的將來將產生巨大的經濟和社會效益，同時它將對陜西區域經濟的發展起到促進作用。2、項目的目的、意義（1） 現有的染料木素生產工藝限制了染料木素的廣泛應用，急需建立一套高效、低成本的現代化生產工藝；它將促進中藥提取向規范化、標準化、高技術、現代化、產業化方向發展經國內外大量研究證實，染料木素具有廣泛和重要的生理功能，如防治骨質疏松癥、心血管疾患病，抗腫瘤，減少女性的熱潮紅與絕經期綜合癥，美容，減肥等，使得染料木素原料、相關制劑及系列化新產品適應了當前消費者追求健康和提高生活質量的目標要求，因此具有良好的市場發展前景。但是由于染料木素制備工藝的限制，使得染

15、料木素始終無法大量生產，且生產成本居高不下，為此有必要開發出一種符合環保、簡單可行、成本低廉的生產工藝，來大量生產染料木素,為藥品和功能性食品的開發提供條件。而本項目的目的就是為了解決這個難點問題。本項目采用的水性助溶劑提取工藝替代原有的有機溶劑提取工藝，大大減少了原來有機溶劑造成的環境污染的可能。我們擬對從槐角中用水性助溶劑提取染料木素的新工藝進行系統研究，然后進行中試放大研究，按照中藥原料藥的要求建立質量標準，按照GMP和相關企業規定建立規范化操作規程，并進行連續三批中試進行驗證，合格后進行工業化大生產，并建立一個完整的、有效的質量保證體系，使每批都能生產出合格產品。建立染料木素制備的最佳

16、工藝，為公司將來申報和生產染料木素原料藥以及開發相關新產品奠定基礎，滿足市場對染料木素的需求，并能促進中藥提取向規范化、標準化、高技術、現代化、產業化發展（2）本項目成功實施，將帶動陜西區域經濟的發展，變資源優勢為經濟優勢，促進社會和諧發展本公司研究后發現，陜西地區槐角中染料木素的含量較高，且槐角自然資源豐富，具有很好的開發利用價值。我國西部地區屬于半干旱地區，槐樹耐干旱、易生長，是很好的木材資源，因此種植面積大，槐角產量大，但目前槐角尚無深加工產品。本項目是從中藥槐角中提取染料木素，其槐角產于資源豐富的陜西廣大農村地區。初步概算，需要年收購槐角近1000噸，可以直接增加農民收益近400萬元，

17、相當于農民種植小麥近萬畝的收入。該項目的有效實施，充分利用當地的資源優勢，進行深加工，能提高農產品附加值，有利于農民增加收益，脫貧致富，調動農民的積極性，可以推動我省藥材種植業的發展，變資源優勢為經濟優勢，帶動陜西區域經濟的發展，促進社會和諧發展3、項目的必要性經國內外大量研究證實，染料木素具有廣泛和重要的生理功能，引起人們的普遍關注，染料木素在藥品、功能性食品、化妝品的研究與開發方興未艾，染料木素的潛在性市場需求量越來越大，但目前國內還沒有一家具有染料木素原料藥合格的產業化廠家來滿足市場的需求；對于生產廠家來說，關鍵是沒有一個能大量生產高純度的染料木素的生產工藝提供給他們，這就迫切要求對現有

18、的粗放性的生產工藝進行改良和優化，或者有必要開發一種符合環保、簡單可行、成本低廉的生產工藝，大量生產染料木素,為藥品和功能性食品的開發提供條件。 而本項目的目的就是為了解決這個難點問題。擬采用水性助溶劑提取新工藝取代了原有的有機溶劑提取工藝，減少有機溶劑可能造成的環境污染。按照中藥原料藥的要求建立質量標準，按照GMP和相關企業規定建立規范化操作規程，建立染料木素制備的最佳工藝，并進行連續三批中試進行驗證，合格后進行工業化大生產。為公司將來申報和生產染料木素原料藥以及開發相關新產品奠定基礎，并滿足市場對染料木素的需求。參考文獻:1）謝明杰,高爽,鄒翠霞,劉長江,金鳳燮.大豆異黃酮生理功能的研究進

19、展J.食品與發酵工業,2004;30(5):94-982）王多寧,王增祿,王四旺.染料木素及其生物活性J.中草藥,2003;34增刊：309-3113) Masayoshi,Yamaguchi,Shizuok,(Japan).Composition for stimulating osteogesis and prevnting reduction of bone salt P.US:5935996 10/19994）曲麗萍，宓鶴鳴，范國榮，位華,孫亮.高速逆流色譜法分離制備淡豆豉中大豆素和染料木素J.中草藥，2006;37(3):375-3775）唐傳核,彭志英.大豆異黃酮的開發與應用前景J

20、. 西部糧油科技, 2000;25(4):35-396）謝玲.臨床研究獲批,染料木素新成果破異黃酮市場僵局. 來源：中國食品報2004年08月13日7）劉大川,汪海波. 大豆胚牙中大豆皂甙、異黃酮的提取工藝研究J. 食品科學, 2000;21(10):28-318）閆祥華，劉大星，何傳民.大豆異黃酮的提取工藝及其對血凝調節的影響J. 食品科學, 2001;22(5):70-739）Robert Mark Wenneth,Kenneth C.Sink,Tyler T.Ames et al.Method and apparatus for growing plant cellsP.US:58858

21、26.3/199910）Eric T. Gugger, Daniel G. Dueppen. Production of isoflavone enriched fractions from soy protein extractsP. US: 5792503 .11/1998 .11）Bolin cheng, John A Yegge, David T. Bailey, Jamesl. Sullivan. Process for the isolation and purification of isolavonesP. US: 5679806. 10/1997 .12） .染料木素的制法P

22、.Japan:特開平10-99089.10/199813）楊振萍,魏莎莎,邊清泉. 微波法提取紅車軸草中染料木素工藝的研究J.西南科技大學學報,2005;20(2):67-69 14）薛存寬.一種從紅車軸草制備紅車軸草異黃酮的制備工藝P.CN1693306 11/2005 15）Sturtz,M.,Lander,V.,Schmid,W.,Winterhalter,P. Preparative isolation of isoflavones from soy and red cloverJ. Molecular Nutrition & Food Research, 2006;50 (4

23、/5):356-361 16）Suzuki T, Yamaguchi M. Purification of active component in wasabi leafstalk (Wasabia japonica MATSUM.) extract in stimulating bone calcification in vitroJ. Journal of health science,2004;50(5): 483-490 17）Weber J Mark,Constantinou Andreas, Hessler Paul E. A Process of preparing genist

24、ein. P WO9706273 2/199718）J.申 M.A.魯西,B.A. 布賴恩,M.C. 奧示雷德. 蛋白質技術國際公司. 富含配基異黃酮的植物蛋白乳清及其生產方法P.CN:1214871A.4/199919）Barbara A. Beryan, Margann C. Allred Mark A Roussey. Two-step conversion of vegetable protein isoflavone conjugates to agluconesP. US: 5827682.10/1998 20）B.A. 布賴恩. M.C. 奧爾雷德. 富含配基異黃酮的植物蛋白提取

25、物和蛋白物質, 高染料木黃酮和黃豆苷原含量的物質及其制備方法P. CN :CN1183475A. 6/199821）Dobbins Thomas A. Process for isolating genistin from mixtures of soy isoflavonesP. WO:03082888 10/2003 22）劉嘉森,丁建彌,黃梅芬.槐角有效成分的研究J 中草藥,1980; 11(4):145-14623）何興林,徐去翔,薛慧中,王文華,周志仁,程培元,樊梅芳. 槐角的避孕成分研究J. I. 生殖與避孕, 1982;2(2):23-2724）季宇彬主編.中藥有效成分藥理與應用

26、M.第一版. 哈爾濱: 黑龍江科學技術出版,1995:149-150, 207-20825）黃文哲, 段金廒, 李正亮. 懷槐的化學成份研究IJ.中國藥科大學學報, 2000;31(1):8-1026）徐任生,陳仲良主編.中草藥有效成分提取與分離M.第二版.上海:上海科學技術出版社,1983:111.224.32527）Tang YP, Hu J, Wang JH, Lou FC A new coumaronochromone from Sophora japonicaJ. Journal of asian natural products research, 2002;4 (1): 1-5

27、28）田中民,萬明習.中藥槐角中槐角苷超聲提取工藝的研究J. 中國藥學雜志. 2003,38(5).-351-353 29）Tian, Zhongmin; Wan, Mingxi; Wang, Zenglu; Wang, Bo.The preparation of genistein and LC-MS/MS on-line analysisJ.Drug Development Research, 2004; 61(1):6-1230）Park Youngki; Lee HakJu; Choi DonHa; Kwon YeongHan; Oh JungSoo Extractives from

28、the bark of Sophora japonicaJ. Mokchae Konghak = Journal of the Korean Wood Science and Technology, 2002;30 (3): 42-47 31）劉曉華.一種含槐實、葡萄籽、皮提取物的組合物及其制備方法P.CN1634359 7/200532）周佳.染料木素的提取方法P.CN1465571 1/200433）王四旺,王增祿,王建波.染料木素制備工藝P. CN :ZL02123450 7/200534）王四旺,王增祿.中藥新原料藥一類-染料木素申報資料2002（內部資料）35）索志榮.槐角中染料木素

29、的提取、改性和三種中藥的色譜分析。西北大學化學、分析化學專業碩士論文，2003.36）henny1284 (優優-櫻桃仙)。植物提取物市場分析。來源：醫藥資源。小優優醫藥化工資源網 37）中藥提取物：急需產業化的調控和規范38）楊學武.國槐扦插育苗技術研究J.甘肅林業科技，1996，2；34-3539）需朗然，傅坤俊，何善寶.黃土高原豆科植物區系的研究J.西北植物學報，1992;12（2）：149-15340） 鄭占虎, 董浙宏, 佘靖主編. 中藥現代研究開發與應用M. 第5卷.第一版. 北京: 學苑出版社, 1999:4465-447441）國家醫藥管理局中華本草編委會.中華本草(4) M.

30、 第一版. 上海:上海科學技術出版社, 1999: 4.646-4.64943）中華人民共和國藥典M. 槐角A.一部.2000版.29244）袁昌齊主編.天然藥物資源開發與利用M.第一版. 南京:江蘇科學技術出版社,2000: 0435-043945）植物提取物產業前景分析2006年10月20日 18:56 報告在線.46）陜西特產-秦川國槐.特色特產網47）五泰信息咨詢有限公司.染料木素市場調研報告.48）五洲咨詢網.染料木素市場調研報告49）成果名稱：染料木素原料藥及其膠囊制劑 R977 R965 完成單位：第四軍醫大學；出處：中國科技成果數據庫 項目年度編號：04012700202、攻關

31、研究成功后對促進行業、產業發展的作用（1）建立了一套高效、低成本的現代化染料木素生產新工藝,使染料木素的廣泛應用成為可能，促進中藥發展經國內外大量研究證實，染料木素具有廣泛和重要的生理功能，如防治骨質疏松癥、心血管疾患病，抗腫瘤，減少女性的熱潮紅與絕經期綜合癥，美容，減肥等，使得染料木素原料、相關制劑及系列化新產品適應了當前消費者追求健康和提高生活質量的目標要求，因此具有良好的市場發展前景。但是由于染料木素制備工藝的限制，使得染料木素始終無法大量生產，且生產成本居高不下，為此有必要開發出一種符合環保、簡單可行、成本低廉的生產工藝，來大量生產染料木素,為藥品和功能性食品的開發提供條件。而本項目的

32、目的就是為了解決這個難點問題。本項目采用的水性助溶劑提取工藝替代原有的有機溶劑提取工藝，大大減少了原來有機溶劑造成的環境污染的可能。項目完成預計染料木素年產量10噸，生產成本為800元/公斤，市場價格為1500元/公斤，年銷售額為1500萬元，其中年創匯約120萬美元。染料木素國外主要用戶為大型制藥公司、保健品生產廠，年需求量約4050噸，并且保持20%的年增長速度。預計到2010年，該類產品的國外原料市場容量將達到1.5-2億美元。主要銷往法國、美國、日本、韓國、印度等國。國內市場也隨著染料木素相關制劑的研究開發不斷擴大。本項目的實施，將未申報和生產染料木素原料藥以及開發相關新產品奠定基礎，

33、滿足市場對染料木素的需求，造福于人類。（2）促進中藥提取向規范化、標準化、高技術、現代化、產業化發展在由中國醫藥保健品進出口商會組織召開的“植物提取物產業國際化報告會”上45，中國醫藥保健品進出口商會植物提取物分會副秘書長張中朋介紹說，我國植物提取物產業的發展現狀是：產業發展迅速，產品出口增長快；生產經營企業多，市場競爭激烈；產業技術裝備水平參差不齊，高新技術企業和作坊式工廠并存；部分企業走向國際市場，產業發展前景看好。中藥提取物是從中藥產業中分化出來的新興領域，目前我國中藥提取物經數年的發展，已具備一定的產業規模，專業生產企業有200家以上，不少中成藥、精細化工等生產企業也生產提取物，經營企

34、業有200-300家，出口比例已超過中藥，并呈現上升趨勢。但經營規范普遍較小，最大不超過千萬美元。一方面，更多的小企業由于資金、人才、信息的缺乏，技術和裝備較為落后，加之中藥提取物是從中藥產業中分化出來的特點，以及中藥提取物質量研究和技術標準的建立是一個持續的、需要不斷完善的過程，技術成熟往往滯后于市場的要求特征，另一方面，提取物研制、生產、流通等各個環節，從宏觀到微觀尚缺乏必要的管理規范，產品品種多、規格雜、生產企業多而小、經營渠道雜、經營秩序混亂、產品質量良莠不齊，造成目前絕大多數的植物提取物沒有國家標準或行業標準37，企業多以合同中的質量條款作為產品交付的依據，產品質量的檢測方法較為混亂

35、，給生產經營帶來了障礙，同時給產業的發展提出了挑戰。因此，中藥提取急需向規范化、標準化、高技術、現代化、產業化方向發展，這也是本項研究的目的之一。課題的目的旨在按照GMP和相關企業規定建立規范化操作規程，建立一個完整的、有效的質量保證體系。在研究中建立的質量標準和規范化操作規程首先制定企業標準，然后不斷完善，最終形成行業或國家標準。為行業中生產實現技術現代化、工藝工程化、質量標準化起到一個有益的帶頭作用，保證和提高產品質量，規范行業經營管理秩序，對于進一步擴大出口，促進行業的健康發展，中藥現代化都有重要意義。（3）本項目成功實施，將帶動陜西區域經濟的發展，變資源優勢為經濟優勢，促進社會和諧發展

36、自主開發的從槐角中提取染料木素項目，其槐角產于資源豐富的陜西廣大農村地區。該項目的有效實施，是充分利用當地的資源優勢，進行深加工，提高農產品附加值，有利于農民增加收益，脫貧致富，調動農民的積極性，可以推動我省藥材種植業的發展，變資源優勢為經濟優勢。初步概算，本項目的實施，需要收購槐角近1000噸，可以直接增加農民收益近400萬元，相當于農民種植小麥近萬畝的收入。槐樹本身的生態效應和長期的經濟收益也是非常顯著的。本項目不但是國家和地方的重點支持項目，而且具有良好的出口創匯前景，同時對于帶動區域經濟的發展具有較大的推動作用，從而會產生良好的經濟效益和社會效益。三、項目的基礎條件1、已經取得的與本項

37、目相關的階段性技術成果經過大量的實驗研究，已初步完成了從中藥槐角中提取染料木素的初步實驗室研究和中試實驗（研究資料見附件中染料木素中試實驗部分步驟HPLC檢測圖譜），建立了初步的染料木素提取工藝并設計了本項目擬進行的工藝流程：原料篩選、去雜烘烤、干燥粉碎水性助溶劑提取，過濾 濾液 濾渣棄去 濃縮液 酸水解液靜置分層沉淀 上清棄去加水洗滌沉淀至中性，離心收集結晶染料木素粗品乙醇重結晶，離心收集結晶染料木素結晶烘干，粉碎，過篩染料木素（HPLC檢測，含量98%以上） 2、實施本項目的工作保障條件，相關的基本建設、技術改造、技術引進、國際合作等落實情況，其它必要的支撐和配套條件，如基地、示范點、技術

38、或工程依托等落實情況課題申請單位澤慧公司是一家電子研發和生產的高新技術企業，他還具有豐富的投資經驗和項目管理經驗。公司正在轉投生物醫學和中醫藥的研發，引進人才和項目。其中包括投資本項目和引進王增祿的研究團隊。該團隊主要從事染料木素制備工藝及其質量標準的研究工作。發明了一種由槐角中提取染料木素的制備工藝，經該工藝制備的染料木素符合國家中藥新藥一類單體藥物的標準。他們完成的染料木素制備工藝試驗的新藥申報資料和第四軍醫大學染料木素新藥申報資料申報國家中藥一類新藥已獲得一期臨床試驗批文(原料批件號2004L01547，膠囊批件號2004L01548)，現正在進行二期臨床試驗。該項成果已獲得國家專利（專

39、利號CN1465570）（見附件一）。發表與染料木素有關的第一作者中英文學術論文4篇。該團隊對正在研究一種高效、環保、高純度、低成本的從中藥槐角中用水性助溶劑提取染料木素的新工藝,經過大量的實驗研究，已初步完成了從中藥槐角中提取染料木素新工藝的初步實驗室研究和中試研究（研究資料見附件中染料木素中試實驗部分步驟HPLC檢測圖譜 ），建立了初步的染料木素制備工藝（見技術路線圖部分）。本課題的協作研究單位西安醫學院科研中心，該中心是全校科學研究的平臺，目前建有藥物研究室、細胞培養室、動物實驗室、分子生物學實驗室。具有藥學藥學研究的基本儀器設備和條件，如中藥粉碎機、不銹鋼提取濃縮設備、冷凍干燥機、旋轉

40、蒸發儀、超聲提取儀、離心機、WATERS高效液相色譜儀、島津紫外分光光度計等。課題組成員具有多年的中草藥研究基礎，曾承擔和參與多項國家自然科學研究基金項目和省廳級科研項目的研究。本課題的合作研究單位西安邦澤醫藥科技有限公司，從事新藥相關項目的開發研究、項目管理，具有豐富的管理經驗，在本項目中主要進行項目管理和協調。課題申請單位澤慧公司已準備了相應的配套自籌資金（詳見附件自籌資金證明）。3、技術研究隊伍組織情況，包括產、學、研結合，組建項目聯合體等情況（1）技術研究隊伍的組成：本項目研發的技術研究隊伍由公司與西安醫學院聯合組成，其中博士2人，碩士3人，高級職稱6人，詳見下表。如此組成強有力的科研

41、隊伍以保證課題的順利完成。（2）項目主要負責人簡介王增祿 男，1957年生，為澤慧有限公司科研部染料木素研究課題負責人，原第四軍醫大學藥學系生物技術中心高級實驗師，負責課題的總體設計和實驗指導。2006.9-現在 澤慧有限公司科研部染料木素研究課題負責人，西安邦澤醫藥科技有限公司技術顧問。主要從事從中藥槐角中染料木素制備工藝及功能研究工作。2005.9-2006.9:第四軍醫大學藥學系生物技術中心高級實驗師，主要從事可溶性腺苷酸環化酶的研究和染料木素研究工作。20029-20058：美國德州大學西南醫學中心訪問學者。在德州大學西南醫學中心腎內科、水鹽代謝和臨床研究中心等實驗室進行可溶性腺苷酸環

42、化酶的研究，在美國生理雜志上發表論文一篇。2001.2-2005.12西安交通大學生命科學與技術學院攻讀醫學生物工程專業博士學位，完成了人源可溶性腺苷酸環化酶的克隆、表達、純化及其功能研究的博士論文并獲得博士學位。19997-20028第四軍醫大學藥學系生物技術中心，高級實驗師。主要從事染料木素制備工藝及其質量標準的研究。發明了由槐角中提取染料木素的制備工藝，撰寫了染料木素原料藥申報資料5“染料木素制備工藝及其研究資料”附件1“染料木素化學結果的確證及文獻資料”；參加染料木素原料藥和膠囊“骨克欣”申報資料中14份資料的撰寫和實驗工作。現已作為國家中藥一類新藥而進入二期臨床試驗(原料批件號200

43、4L01547，膠囊批件號2004L01548)。該項成果已獲得國家專利（專利號CN1465570）（見附件一）。發表第一作者科研論文2篇。19982-19992：美國德州大學西南醫學中心進修肌肉收縮蛋白輕鏈激酶的制備和純化，訪問學者1993.9-1998.1：第四軍醫大學藥學系生物技術中心，實驗師、高級實驗師。1）參加總后八五攻關課題（91C041-0156）：重組改構人突變型腫瘤壞死因子(rhmTNF)的實驗研制。該藥于2003年3月取得國家生物制品類一類新藥證書和生產證書，獲得陜西省科技進步一等獎（署名第四）；2） 完成了國家八五科技攻關項目豬胰臟多酶聯產(NO.85-08-05-02)

44、的實驗研究課題。該項目96年初已通過國家科委的驗收。共發表30余篇，其中與該課題相關的論文6篇。1999-2002陜西省生化學會兼職業務秘書。近期發表論文及與本課題有關的論文：（1）Z.L. Wanga, , , J.Y. Sun, D.N. Wang, Y.H. Xie, S.W. Wang, W.M. Zhao.Pharmacological studies of the large-scaled purified genistein from Huaijiao (Sophora japonica Leguminosae) on anti-osteoporosisPhytomedicine

45、.2006,13（9-10）：718-723（2）Geng WD, Wang ZL, Zhang JN, Reed BY, Pak CY, Moe OW. Cloning and Characterization of the Human Soluble Adenylyl Cyclase (hsAC). Am J Physiol Cell Physiol. 2005, 288:C1305-1316（3）Xue X, Wang ZL, Yan Z, Shi J, Han W and Zhang Y. Production and purification of recombinant human

46、 BLyS mutant from inclusion bodies. Protein Expr Purif. 2005,42(1):194-199（4）王增祿，孫紀元，王多寧，王劍波，謝艷華，王四旺，趙文明.槐角染料木素的結構鑒定及預防骨質疏松癥的藥理研究. 中國藥理學通報, 2004, 20(5):580-584（5）王增祿，王多寧，王劍波，孫 剛，趙小兵，王四旺，趙文明. 槐屬苷的紫外分光光度法檢測. 第四軍醫大學學報, 2003,24(14):1320.（6）王增祿，王多寧，王劍波，趙小兵，孫剛，王四旺，趙文明. 槐屬苷和染料木素的高效液相色譜法檢測.中華現代臨床醫學雜志, 2004,

47、 2:1926-1928（7）Tian, Zhongmin, Wan, Mingxi, Wang, Zenglu;,Wang, Bo.The preparation of genistein and LC-MS/MS on-line analysis. Drug Development Research. 2004, 61(1):6-12（8）王多寧,王增祿,王四旺.染料木素及其生物活性.中草藥,2003,34增刊：309-311（9）Wang ZL，Zhang YQ，Lu J, Ru BG, Zhao WM. Simultaneous extraction and purification

48、of eight diverse enzymes and trypsin- inhibitor from porcine pancreas. J Fourth Mil Med Univ.2001, 22(19):1729-1734.王多寧，男，1956年生，西安醫學院科研中心主任，高級實驗師。第四軍醫大學醫學實驗技術專業本科畢業。長期從事于天然產物及抗氧化劑藥物研究，曾承擔和完成了3項國家自然科學基金項目和1項軍隊85攻關課題分課題研究，主持和完成一項衛生廳科研課題。獲軍隊科技進步二等獎1項，陜西省科技進步二等獎1項，陜西科技進步三等獎1項，陜西省教育廳高等學校科學技術獎三等獎1項，獲國家發明

49、專利1項。發表與本課題有關的論文有：（1）王多寧,王增祿,王四旺.染料木素及其生物學作用.中草藥,2003,34(增刊):309-311（2）王增祿,王多寧,王劍波,孫 剛,趙小兵,王四旺,趙文明.槐屬苷的紫外分光光度法檢測. 第四軍醫大學學報,2003,24(14):1320（3）王多寧,張小莉,楊 穎 等.百合多糖對羥自由基的清除作用.陜西中醫學院學報，2006,29(4):53-55（4）Z.L. Wanga, , , J.Y. Sun, D.N. Wang, Y.H. Xie, S.W. Wang, W.M. Zhao.Pharmacological studies of the la

50、rge-scaled purified genistein from Huaijiao (Sophora japonica Leguminosae) on anti-osteoporosisPhytomedicine.2006,13（9-10）：718-723（5）王增祿,孫紀元,王多寧 等.槐角染料木素的結構鑒定及抗骨質疏松的藥理研究中國藥理學通報，2004,20(5):580-584（6）王增祿,王多寧,等. 槐角苷和染料木素的高效液相色譜法檢測.中華現代臨床醫學雜志,2004,2(12):1926-1928（3）組織實施本項目由澤慧負責，與西安邦澤醫藥科技有限公司和西安醫學院（科研中心）

51、共同組織實施，分工協作。具體組織實施如下：1）項目協作分工：999999 西安醫學院（科研中心）（協作單位）負責實驗室研究西安邦澤醫藥科技有限公司（合作單位）負責項目管理與協調西安澤慧電子技術有限公司項目負責（2）項目研究、生產組織及勞動定員：項目實施及勞動定員實驗室研究6人中試8人生產10人研究資料管理辦公室1人項目管理報批 1人4、完成項目所需自籌資金、銀行貸款等項資金落實情況完成項目所需自籌資金由項目申請單位澤慧公司負責。該單位已準備了相應的配套自籌資金（詳見附件自籌資金證明）。本項目暫不需要銀行貸款。四、項目攻關總體目標，實施年限，具體的考核指標（含主要技術經濟指標）及年度計劃安排1、

52、項目攻關總體目標通過本項目攻關研究，建立優化的染料木素制備新工藝；制定染料木素質量標準；制定染料木素技術標準操作規程，最終實現染料木素的生產達到環保、高技術、高質量、低成本、規范化，產生良好的經濟和社會效益。本項目預期將獲得國內專利1-2項2、實施年限本項目計劃實施年限為兩年，2008年1月-2009年12月。3、具體的考核指標（含主要技術經濟指標）（1）主要技術指標：本課題研究主要技術指標：獲得1.優化的染料木素提取新工藝；2.染料木素質量標準；3.染料木素技術標準操作規程；4.染料木素生產新工藝的相關專利。（2）主要經濟指標：本項目研究實施過程中，在使項目技術得到大量改進的同時，也將產生一

53、定的經濟效益。項目研究實施過程經濟效益預測如下表所示。經濟效益預測表標 單位：萬元 經濟效益新增銷售額新增稅金新增利潤創匯(萬美元)2009年5075125552010年300457540合計35052587545.54、年度計劃安排本項目計劃二年完成，計劃進度與考核指標如下：第一階段：2008.12008.12目 標：完成染料木素實驗室研究（優化工藝條件，建立工藝）并總結，擬中試方案并進行中試；建立染料木素檢測方案。考核指標：染料木素實驗室新工藝和檢測方法的建立；制備出小量高純度（99%，HPLC法）的染料木素第二階段：2009.12009.12目 標：初步完成中試，并總結獲得最佳中試生產工

54、藝條件，建立中試新工藝；建立中試生產質量標準和操作規范；驗證中試工藝和質量標準及操作規程；工業生產，并對課題進行總結；申報相關專利。考核指標：染料木素提取新工藝的建立；染料木素質量標準的制定；染料木素技術標準操作規程；申報染料木素生產新工藝專利；發表論文2-3篇；每批能制備出幾十公斤的高純度（99%HPLC法）染料木素。五、項目的主要研究內容，課題設置方案及與其他單位合作方案落實情況1、主要研究內容本項目主要研究內容有：染料木素提取新工藝的實驗室優化研究； 染料木素中試研究；染料木素質量標準研究；制定染料木素技術標準操作規程；申報創新專利。通過本研究，使染料木素的生產達到環保、先進、低成本、高

55、質量的高科技生產水平，形成行業和國家標準，同時產生良好的經濟和社會效益。2、課題設置方案本課題設置方案擬分為以下部分1）、研究初步擬定技術路線為：課題研究的基本流程：實驗室工藝優化研究中試放大研究建立質量標準建立規范化操作規程連續三批中試進行驗證工業化生產申報新工藝專利。染料木素制備工藝研究路線擬定如下：染料木素制備工藝流程圖：原料篩選、去雜烘烤、干燥粉碎水性助溶劑提取，過濾 濾液 濾渣棄去 濃縮液 酸水解液靜置分層沉淀 上清棄去加水洗滌沉淀至中性，離心收集結晶染料木素粗品乙醇重結晶，離心收集結晶染料木素結晶烘干，粉碎，過篩染料木素（HPLC檢測，含量98%以上） 2）、在研究中制定質量標準和技術規范化標準操作規程，制定企業標準，然后不斷完善，最終形成行業或國家標準。3）、在實驗室和中試研究的同時，對已形成的工藝進行自主創新專利申請，力爭早日獲得知識產權保護。3、與其他單位合作方案落實情況項目申請單位澤慧公司與合作單位邦澤醫藥科技公司、西安醫學院在申報之前已簽訂合作研究協議，詳見合作協議