1、禽流感和SARS免疫應答和致病機理Andrew McMichaelMRC Human Immunology Unit Weatherall Institute of Molecular Medicine University of Oxfored.提綱n呼吸道病毒疾病n禽流感nSARSnHIU的研究成果.呼吸道病毒疾病 n普通的，比如感冒，在成人和兒童中均可出現n在全部急性呼吸系統(tǒng)感染中的比例超過90%n大多數都比較輕微，呈自限性并且只局限在上呼吸道（URT）。但是在嬰兒和兒童中，上呼吸道感染可能會傳染到下呼吸道（LRT)，并且造成更為嚴重的感染，甚至死亡。n病毒能夠通過相對密切的接觸，以鼻和

2、嘴呼吸道小滴的形式傳播。在流行期（通常是季節(jié)性的），病毒具有較強的傳染性，別并且能夠在整個社會中傳播.呼吸道病毒疾病n流感n冠狀病毒（SARS)n腺病毒n副流感病毒n呼吸道合孢病毒n鼻病毒n其他（柯薩奇病毒，型皰疹，EBV,CMV）.流感病毒有8個RNA節(jié)段A、B、C三型：NP、M1蛋白亞型：HA或NA蛋白.A型流感病毒亞型根據表面糖蛋白（HA、NA）對流感病毒進行分型.流感病毒在自然界的循環(huán).流感病毒的抗原性變異n抗原漂移 病毒長時間微小改變的積累會導致不能被人體免疫系統(tǒng)識別的新毒株出現。這就是為什么我們每年都要開展新的研究以緊跟流感病毒循環(huán)毒株的改變。n抗原轉換 A性流感病毒突然出現大的改

3、變導致能感染人類的新HA蛋白和（或）新的HA和NA蛋白出現，即一種新亞型的出現。當抗原轉換發(fā)生的時候，大多數人對新毒株都只有較少的或者完全沒有免疫力。抗原轉換發(fā)生幾率較小。.A型流感病毒在人類中的傳播.H5N1n是A性流感病毒的一種亞型，能導致乃哦雷出現呼吸道疾病和全身疾病n高致病性H5N1也能夠感染人類和哺乳動物n人類感染H5N1的死亡率很高（60%）n與被感染的禽類接觸是一個重要的危險因素n傳播途徑（吸入、口腔、環(huán)境）目前還不是很清楚n潛在大流行.H5N1臨床特點n潛伏期：從起病開始14天n傳染期：從起病開始13天n癥狀：發(fā)燒、下呼吸道疾病、淋巴細胞減少、肺炎以及進展為急性呼吸窘迫綜合癥（

4、ARDS)n其他并發(fā)癥包括腹瀉、腎病和心臟衰竭.H5N1感染中的病毒載量.H5N1流行病學n季節(jié)性趨勢（冬季到春季）n發(fā)生：散發(fā)nH5N1侵襲年輕的人群n年齡的中位數：20歲（3個月到70歲）n男性：女性（）.H5N1流行病學n死亡率：56%n高危組：年輕人群n從騎兵到死亡的時間：平均為9天n危險因素：暴露于禽類 WHO WER 2006.H5N1的實驗室診斷n病毒分離（MDCK細胞，雞胚）n抗原檢測：血凝反應（HA）n抗體檢測：血凝抑制實驗（HI)、ELISA、免疫熒光法、微量中和實驗n核酸檢測：RT-PCR real-time PCRn核苷酸測序.診斷標準（WHO指導意見）n符合一是病理和

5、可能病例標準以及在一個H5N1實驗結果能夠被WHO承認的國家、地區(qū)或全球流感實驗室得到下列陽性結果之一A.分離到H5N1病毒；B.使用兩種不同的PCR引物（例如甲型流感病毒通用引物和H5特意的引物）檢測，均得到H5的陽性結果；C.病例恢復期血清較急性期血清（發(fā)病后7天或7天內）H5N1中和抗體滴度呈4倍或以上增高，同事恢復期中和抗體滴度必須為1:80或以上；D.在發(fā)病后14天或以后采集的單份血清，MN實驗檢測H5N1中和抗體滴度為1:80或以上，同事使用不同的血清學檢測方法也出現陽性結果，例如馬血球HI實驗抗體滴度為1:160或以上，或者H5特異性蛋白印跡實驗陽性。.免疫特性和發(fā)病機理n病毒復

6、制增高，時間延長n細胞激素風暴（1997：IL6、TNF-、IFN-、soluble IL-2R；2004-6：IP-10、MIG、MCP-1、IL-6、IL-8)n抗體應答：在幸存者起病10 14天后檢測到中和抗體nT細胞：還不清楚.H5N1病毒HA蛋白的結構.流感大流行n出現新HA或者NAn人群中缺乏基礎免疫n有效的人傳人傳播機制.預防和控制n控制禽類中的H5N1傳染源n健康教育、個人衛(wèi)生習慣n隔離和檢疫n大流行準備（WHO指導意見）nH5N1疫苗n治療措施：奧司他韋（達菲）（起病后48小時以內）.HA重配株的H5N1流感疫苗反向遺傳學示意圖.H5N1疫苗試驗n滅活疫苗（rgA/VN/12

7、03/2004xA/PR8/34)2劑次90 g能被接受并且可以在50%的接種者（n=450，Age：18-64）中導致Nab（1:40)(Treaner et al.、NEJM、2006）.n加氫氧化鋁佐劑的滅活疫苗（rgA/VN/1194/2004xA/PR8/34)2劑次10g能被接受并且可以在78%的接種者（n=120、Age：18-60）中導致Nab（1:40）(Lin et al.、Lancet、2006）.n加氫氧化鋁佐劑的滅活疫苗（rgA/VN/1194/2004xA/PR8/34)2劑次30g能被接受并且可以在68%的接種者（n=300、Age：18-40）出現HI血清轉化現

8、象 (Bressan et al.、Lancet、2006）.如果劑量較小，佐劑不會改善免疫應答。氫氧化鋁是長期使用的一種佐劑，通過強化刺激Th2型免疫反應從而加強免疫應答。、2006).SARSn嚴重急性呼吸道綜合征n新發(fā)現的一種由冠狀病毒（SARS-CoV)導致的傳染性疾病n癥狀：類似于流感、38的發(fā)熱、呼吸急促、肺炎、非增殖性感染、咳嗽、腹瀉、進展為ARDS.n在2002/2003出現爆發(fā)，波及29個國家，病例數8000，死亡率為10%n潛伏期：210天n傳染期：起病后7天n通過人和人的密切接觸和呼吸道小滴傳播。傳播效率與情況嚴重和病情快速惡化的病人相關.微生物形態(tài).SARS感染的結局暴

9、露于SARS病毒發(fā)燒、肺實變反復發(fā)燒出現腹瀉血氧飽和度下降肺部陰影增加對治療措施的反應ARDS第1階段(第1周）第2階段（第2周）第3階段(第3周）沒有證據顯示存在無癥狀的感染.快速診斷n重要性：潛伏期（平均為56天）不具有傳染性。再被感染的早期（潛伏期）進行診斷能夠有效的防止繼發(fā)傳染n方法：n病毒檢測：PT-PCR和Real-time PCRn病毒分離(Vero E6或者FRhk-4細胞）n抗體檢測：在第10天出現血清轉化現象。間接的免疫熒光法和病毒中和實驗。.SARA診斷起病后天數起病后天數目標目標方法方法標本標本早期5天到10天抗原、IgM、IgG、Nab、病毒核酸PCR、ELISA、I

10、FA、NT血清、鼻咽分泌物、糞便.中國SARS病歷的分布.SARS的流行病學n全球流行（2002年11月2003年6月）n26個國家向WHO報告了8096例可能病例n53%為女性，21%為醫(yī)務人員n被感染的年齡組（0 100歲，年齡的中位數為42歲）n病死率為9.6%（根據年齡組和地區(qū)的不同，變化范圍為0 50%）nSARS相關死亡率提示器危險因素可能包括：年齡60歲、乳酸脫氫酶活力增高、患有糖尿病或者心臟病.2003年SARS在中國的爆發(fā)廣州BJ01、BJ02、BJO3、BJ04北京初始爆發(fā)繼發(fā)爆發(fā)GZ50、ZSA、ZSB、ZSCG21、HKU-43849FebMarAprilMay2003

11、.病理學彌漫性肺泡損傷（DAD）： 肺泡出血炎性細胞滲透、水腫、透明膜形成.SARS感染后的免疫應答先天免疫n病人中出現趨化激素（IL-B、MVP-1和IP-10）和炎性細胞因子（IL-1、IL-6和IL-12）增高n感染后最初10天病毒載量逐漸降低提示先天免疫的逃避。這一點也被1型干擾素的低水平所證實（Cheung et al.JV 05）適應性免疫n在SARS急性感染中，隨著CD4和CD8 T細胞的急劇減少出現的淋巴細胞減少是很常見的，并且與“不良結局”相關。對于恢復期的患者，能觀察到T細胞的快速修復（Wong et al.BMJ 03;Li et al.JID 04)n用spike蛋白和

12、核殼體蛋白作為抗原中和抗體.n免疫病理學：我們的經驗.SARS疫苗研究進展抗原抗原基因基因實驗動物實驗動物中和抗體中和抗體CTLCTL減少減少保護作用保護作用文獻文獻滅活SARS-CoV小鼠/兔子YESTang et al(04).He et al(04)DNA小鼠YESYESYESHe et al(04)DNA小鼠YESYESYESWang et al(04)重組細胞（MVA）小鼠YESYESYESBisht et al (04)重組細胞（MVA）小鼠/兔子YESYESChen et al(04)副流感病毒倉鼠YESYESBchoholz et al(04)副流感病毒猴子YESYESBchoholz et al(04)腺病毒大鼠YESLiu et al(05)腺病毒小鼠YESYESYESZakhartchouk et al(05).SARS疫苗的安全性1.接種表達spike蛋白全長的重組細胞（MVA）的受感染雪貂，其肝臟損傷加重（Weingartl et a