1、09級(jí)分子生物學(xué)考試復(fù)習(xí)題一一、名詞解釋1.轉(zhuǎn)化：主要指將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入宿主細(xì)菌的過(guò)程。通常是先將細(xì)菌細(xì)胞制備成感受態(tài)的菌，然后再進(jìn)行轉(zhuǎn)化。 轉(zhuǎn)化常用的方法有兩種：化學(xué)轉(zhuǎn)化和電轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)染：主要指將噬菌體和病毒轉(zhuǎn)入細(xì)胞的過(guò)程。2.Genome, 基因組就是一個(gè)物種中所有基因的整體組成。genomics即基因組學(xué)，主要是研究一個(gè)物種的基因組的組成，包括DNA堿基的排列順序，基因的分布情況。3.proteome, 蛋白質(zhì)組, 廣義含義:指某種細(xì)胞或組織中基因組所表達(dá)的所有的蛋白質(zhì)。狹義：可以指不同類型細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的變化，如正常細(xì)胞和異常細(xì)胞之間、細(xì)胞用藥或不用藥之間的蛋白質(zhì)水平差異、不同組織細(xì)胞間的蛋白質(zhì)

2、類型的差異。proteomics研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。4.transgene technique（轉(zhuǎn)基因技術(shù)）指的是將一個(gè)物種的特定基因通過(guò)人工的方法轉(zhuǎn)入到另一種生物的細(xì)胞中，并使它獲得了轉(zhuǎn)入基因的特性。5.cDNA library cDNA 文庫(kù)）: 以為mRNA模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化，在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與適當(dāng)?shù)玫妮d體（常用噬菌體或質(zhì)粒載體）連接后轉(zhuǎn)化為受體菌，則每個(gè)細(xì)菌含有一段cDNA，并能繁殖擴(kuò)增，這樣包含著細(xì)胞全部mRNA 信息的cDNA克隆集合稱為該組織細(xì)胞的cDNA文庫(kù)。6.SNP(Single Nucleotide Polymorphisms S

3、NPs）為單核苷酸多態(tài)性，指不同個(gè)體DNA序列中，在基因組內(nèi)特定核苷酸位置上單個(gè)核苷酸的差別（替換），其中最少的一種在群體中的頻率不少于1%。7.STR短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeats ,STR) 又稱微衛(wèi)星DNA，是一類更簡(jiǎn)單的寡核苷酸串聯(lián)重復(fù)序列，是一類廣泛存在于真核生物基因組中的DNA串聯(lián)重復(fù)序列。它由26 bp的核心序列構(gòu)成,重復(fù)次數(shù)通常在1060次,DNA片段長(zhǎng)度小于150bp ,分布于染色體的任何部位。8.RFLP（restriction fragment length polymorphism）限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，亦稱限制性酶譜多態(tài)性。RFLP是利用限制

4、性內(nèi)切酶在特定的核苷酸序列切割雙鏈DNA后凝膠電泳分離開(kāi)不同大小片段，由于不同個(gè)體存在核苷酸序列差異導(dǎo)致限制性酶切位點(diǎn)變化從而使酶切片段呈現(xiàn)多態(tài)現(xiàn)象。RFLP方法在遺傳性疾病診斷、微生物種屬分型、腫瘤發(fā)病及診斷研究等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。9.proteome（蛋白質(zhì)組）蛋白質(zhì)組, 廣義含義:指某種細(xì)胞或組織中基因組所表達(dá)的所有的蛋白質(zhì)。狹義：可以指不同類型細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的變化，如正常細(xì)胞和異常細(xì)胞之間、細(xì)胞用藥或不用藥之間的蛋白質(zhì)水平差異、不同組織細(xì)胞間的蛋白質(zhì)類型的差異.10.hybridization分子雜交：首先要確定檢測(cè)的目標(biāo)，即檢測(cè)的目的核酸片段，這個(gè)片段的序列必須是已知的。根據(jù)此設(shè)計(jì)一個(gè)探針

5、（與檢測(cè)目的核酸互補(bǔ)的序列），并對(duì)其進(jìn)行合成和標(biāo)記。再通過(guò)雜交實(shí)驗(yàn)來(lái)完成探針對(duì)目的核酸的檢測(cè)。11.southern blot：是一項(xiàng)用于檢測(cè)或定量特異性DNA的技術(shù)。原理是：DNA混合物首先按照它們的大小和相對(duì)分子量通過(guò)變性瓊脂糖凝膠電泳加以分離。分離出來(lái)的DNA經(jīng)轉(zhuǎn)移電泳移至硝酸纖維素膜或尼龍膜上。將標(biāo)記的探針與膜上的DNA片段雜交，分析雜交信號(hào)。 northern blot是一項(xiàng)用于檢測(cè)或定量特異性RNA的技術(shù)。原理是：RNA混合物首先按照它們的大小和相對(duì)分子量通過(guò)變性瓊脂糖凝膠電泳加以分離。分離出來(lái)的RNA經(jīng)轉(zhuǎn)移電泳移至硝酸纖維素膜或尼龍膜上。用一個(gè)放射性同位素或酶標(biāo)記的DNA探針與固

6、定的RNA進(jìn)行雜交。雜交RNA的大小和密度可通過(guò)放射自顯影技術(shù)或酶促顏色檢測(cè)來(lái)顯示12.封閉在蛋白印跡(Western blot)中，用封閉液封閉未吸附蛋白的部位，以減少非特異性結(jié)合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清等。13.基因診斷是以DNA或RNA為實(shí)驗(yàn)材料，通過(guò)對(duì)某種特異堿基序列的檢出來(lái)確定某種疾病的發(fā)生或某種病原體的存在。14.基因治療:依靠遺傳物質(zhì)來(lái)治療疾病，包括糾正人自身基因的結(jié)構(gòu)或功能上錯(cuò)亂、阻止病變的進(jìn)展，殺滅病變的細(xì)胞或抑制外源原體遺傳物質(zhì)的復(fù)制，從而達(dá)到治病的目的。二、問(wèn)答題1.人類基因組中DAN多態(tài)性的主要類型有哪些？DNA序列多態(tài)性可分為位點(diǎn)的多態(tài)性和串聯(lián)重復(fù)

7、順序多態(tài)性,前者又可造成限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)。DNA位點(diǎn)多態(tài)性(DNA site polymorphism) DNA位點(diǎn)多態(tài)性 是由于等位基因間在特定位點(diǎn)上DNA序列存在差異造成的。限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP) 由于DNA位點(diǎn)的多態(tài)性可影響限制酶的切割位點(diǎn),造成限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性。重復(fù)順序長(zhǎng)度多態(tài)性: 小衛(wèi)星DNA多態(tài)性很復(fù)雜,個(gè)體之間的差異極高、微衛(wèi)星DNA多態(tài)性,功能不太清楚。DNA位點(diǎn)的多態(tài)性可以作為遺傳標(biāo)記,用于基因診斷或個(gè)體鑒定,其與疾病的相關(guān)研究正在進(jìn)行之中。2.論述基因工程的基本過(guò)程和原理。將兩種不同來(lái)源的DNA即目的DNA和載體DNA提取純化。用限制性內(nèi)切酶處理

8、DNA。用連接酶將切開(kāi)的不同源的DNA連接到一起，構(gòu)成重組DNA。將重組DNA轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中。通過(guò)大量的培養(yǎng)細(xì)菌，以達(dá)到擴(kuò)增目的基因或表達(dá)蛋白的目的。3.基因工程常用的工具酶都有哪些？各有哪些用途？限制酶(restriction enzyme) 全稱限制性核酸內(nèi)切酶、簡(jiǎn)稱限制酶或內(nèi)切酶。用途：具有特定的識(shí)別和切割位點(diǎn)能識(shí)別雙鏈DNA分子內(nèi)部的特異位點(diǎn)并且裂解磷酸二酯鍵。逆轉(zhuǎn)錄酶使RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA。T4DNA連接酶，從噬菌體中提取，用于DNA的連接4堿性磷酸酶可將DNA或RNA5的磷酸去除，可用于制止不希望發(fā)生的連接反應(yīng)進(jìn)行。5末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶用于將已標(biāo)記好的單核苷酸加到DAN的3端上

9、，起到標(biāo)記的作用；有時(shí)也可用于DNA片段的同聚尾的形成。4.基因工程常用的載體都有哪些？各有什么特點(diǎn)？常用的克隆載體：質(zhì)粒plasmid質(zhì)粒的一般特點(diǎn)：細(xì)菌質(zhì)粒是一些雙鏈閉環(huán)的DNA分子，這些質(zhì)粒都是獨(dú)立于染色體之外進(jìn)行復(fù)制和遺傳的輔助性遺傳單位。通常，質(zhì)粒含編碼某些基因的酶，這些酶在一定環(huán)境下對(duì)宿主細(xì)胞有利。由質(zhì)粒產(chǎn)生的表型對(duì)抗生素的抗性、產(chǎn)抗生素、降解復(fù)雜有機(jī)化合物，以及產(chǎn)生大腸桿菌素，及限制酶、修飾酶等。質(zhì)粒的復(fù)制能力。質(zhì)粒都帶有獨(dú)立的復(fù)制子，能獨(dú)立的自我復(fù)制。但在復(fù)制時(shí)必須依賴宿細(xì)菌的酶。質(zhì)粒的不親和性(不相容性)。質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移性 ：多數(shù)質(zhì)粒在自然條件下可以通過(guò)細(xì)菌結(jié)合的作用轉(zhuǎn)移到新的宿

10、細(xì)胞中。然而，由于質(zhì)粒缺少一種轉(zhuǎn)移所必須的mob基因，因此不能獨(dú)立的從一個(gè)細(xì)菌到另一個(gè)細(xì)菌的接合轉(zhuǎn)移。噬菌體：噬菌體作為載體所具有的特征：野生型噬菌體有一個(gè)龐大的基因組，在沒(méi)有改造的情況下， 噬菌體無(wú)法插入較大的外源DNA片段，無(wú)較集中的酶切位點(diǎn)和好的識(shí)別標(biāo)置。 噬菌體主要用于cDNA文庫(kù)的構(gòu)建。粘性質(zhì)粒：粘性質(zhì)粒是一種將噬菌體和質(zhì)粒兩種載體結(jié)合起來(lái)形成的一種人工載體。它具有如下特征：含有質(zhì)粒的抗藥性標(biāo)記。載體帶有噬菌體的cos區(qū)，所以對(duì)其進(jìn)行體包裝是必不可少的。具有多克隆位點(diǎn)。形體本身的體積很小，但容量大，可插入40kb大小的DNA片段。 一般非重組的載體體積小，而無(wú)法進(jìn)行體外包裝，因而無(wú)法

11、轉(zhuǎn)染細(xì)菌，只有包裝了的重組體才能進(jìn)入細(xì)菌，有利于篩選。M13噬菌體 ：M13噬菌體是一種大腸桿菌的噬菌體它在轉(zhuǎn)染大腸桿菌后進(jìn)行一段時(shí)間的復(fù)制后開(kāi)始進(jìn)行不對(duì)稱復(fù)制，而形成大量的單鏈DNA，而后將這些單鏈DNA進(jìn)行包裝病毒顆粒后釋放到細(xì)菌外，利用這一特點(diǎn)，可大量克隆單鏈的DNA分子用于制備核酸探針和DNA測(cè)序的材料。大容量測(cè)序用載體：酵母人工染色體(YAC)和細(xì)菌人工染色體(BAC)，前者可容納100萬(wàn)個(gè)堿基的DNA片段，后者可容納30萬(wàn)個(gè)堿基的DNA片段。常用的表達(dá)載體：大腸桿菌表達(dá)載體：一般具備有細(xì)菌轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子，可人為的進(jìn)行操縱。哺乳動(dòng)物表達(dá)載體：多數(shù)是一些真核細(xì)胞病毒經(jīng)過(guò)改造。5.核酸分子

12、雜交的原理是什么？種類都有哪些？分子雜交的原理：DNA具有變性的特點(diǎn) 變性的DNA還能復(fù)性 分子雜交的概念 分子雜交的原理：用已知的DNA序列制成探針，來(lái)檢測(cè)末知的樣本DNA。首先要確定檢測(cè)的目標(biāo)，即檢測(cè)的目的核酸片段，這個(gè)片段的序列必須是已知的。根據(jù)此設(shè)計(jì)一個(gè)探針（與檢測(cè)目的核酸互補(bǔ)的序列），并對(duì)其進(jìn)行合成和標(biāo)記。再通過(guò)雜交實(shí)驗(yàn)來(lái)完成探針對(duì)目的核酸的檢測(cè)。分子雜交的形式： 液相雜交和固相雜交。核酸分子雜交技術(shù)的演變:斑點(diǎn)雜交 southern blot northern blot 原位雜交 芯片技術(shù)。6.PCR反應(yīng)的基本原理是什么？都有哪些步驟組成？其原理類似于DNA的體內(nèi)復(fù)制，只是在試管中

13、給DNA的體外合成提供一種合適的條件模板DNA ，寡核苷酸引物，DNA聚合酶，合適的緩沖體系，DNA變性、復(fù)性及延伸的溫度與時(shí)間, 合成DNA的原料。步驟是：設(shè)定一個(gè)加樣配方：加樣：?jiǎn)螛颖炯訕?多樣本加樣 加樣的順序 PCR反應(yīng)條件的設(shè)定：預(yù)就性溫度： 94，分變性溫度： 94，30秒 退火溫度：需要反復(fù)調(diào)試 延伸溫度： 72，30秒 總延伸溫度：72，15分。7、在PCR反應(yīng)中，引物的設(shè)計(jì)非常重要，它都有哪些注意事項(xiàng)？引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)

14、增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。引物-3端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)，這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。引物量： 每條引物的濃度0、11umol或10100pmol，以最低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起

15、錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。 8.轉(zhuǎn)基因植物為什么會(huì)帶給人們?nèi)绱舜蟮臓?zhēng)議？轉(zhuǎn)基因植物帶給我們的好處：提高農(nóng)作物的產(chǎn)量，提高植物能量的轉(zhuǎn)化能力；固氮能力的提高；提高植物的生活特性；提高農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量；提高藥用植物有效成分的產(chǎn)量；生產(chǎn)具有特色的經(jīng)濟(jì)作物; 將動(dòng)物基因轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞，使植物獲得動(dòng)物的某些性狀。帶來(lái)的問(wèn)題：與人們傳統(tǒng)的倫理道德相沖突：觀點(diǎn)主要是轉(zhuǎn)基因技術(shù)開(kāi)了一個(gè)不好的頭，使人們可以隨心所欲的改變一個(gè)物種的基因成分，這都是非自然的。有悖倫理。生命學(xué)家的不同聲音：轉(zhuǎn)基因植物將改變自然界物種的遺傳特性，還可能造成“基因污染”。環(huán)保主義者的反對(duì)聲：對(duì)人類健康的潛在危害。9

16、.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)在醫(yī)學(xué)上都有哪些重要的應(yīng)用？在培育新品種中的應(yīng)用。 動(dòng)物生物反應(yīng)器。 抗病育種。 基因治療。 組織器官移植。10.DNA芯片技術(shù)的基本原理和方法是什么？基因芯片（Gene Chip）通常指DNA芯片，其基本原理是將指大量寡核苷酸分子固定于支持物上，然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)的強(qiáng)弱進(jìn)而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。基因芯片集成了探針固相原位合成技術(shù)、照相平板印刷技術(shù)、高分子合成技術(shù)、精密控制技術(shù)和激光共聚焦顯微技術(shù)，使得合成、固定高密度的數(shù)以萬(wàn)計(jì)的探針?lè)肿右约皩?duì)雜交信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)、靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)分析變得切實(shí)可行。基因芯片具有微型化、集約化和標(biāo)準(zhǔn)化的特點(diǎn)。基因芯片的類型。

17、光引導(dǎo)原位合成技術(shù)生產(chǎn)寡聚核苷酸微陣列微電子芯片微量點(diǎn)樣技術(shù)其他技術(shù) 主要是美國(guó)NIH、Caliper公司和Orchidbio公司等，Orchidbio公司研制了一種毛細(xì)管微流泵芯片，在邊長(zhǎng)2英寸的芯片上集成了144個(gè)微室，分別由流入孔、反應(yīng)室、循環(huán)管和廢液流出孔組成，這種芯片不但可以用于基因診斷和分析，還可用于合成化學(xué)，利用芯片的微指結(jié)構(gòu)，Caliper公司的芯片可以用作細(xì)胞分選器，能夠利用血細(xì)胞體積和變形性等特點(diǎn)可以很容易地把紅細(xì)胞和白細(xì)胞分開(kāi)，NIH研制微型芯片反應(yīng)器可以很快地完成一系列生化反應(yīng)。11.常用于基因診斷的分子生物學(xué)技術(shù)都有哪些？舉例說(shuō)明。核酸的分子雜交；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；單鏈

18、構(gòu)像多態(tài)性檢測(cè)；限制性酶譜分析；DNA序列的測(cè)定；DNA芯片技術(shù)。12.人類基因組計(jì)劃（HGP）主要的目的是什么？解碼生命了解生命的起源；了解生命體生長(zhǎng)發(fā)育的規(guī)律；認(rèn)識(shí)種屬之間和個(gè)體之間存在差異的起因；認(rèn)識(shí)疾病產(chǎn)生的機(jī)制以及長(zhǎng)壽與衰老等生命現(xiàn)象；為疾病的診治提供科學(xué)依據(jù)。13.蛋白質(zhì)組學(xué)包括了哪些主要內(nèi)容？蛋白質(zhì)組學(xué)（proteomics)是研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。它在本質(zhì)上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征，包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，翻譯后的修飾，蛋白與蛋白相互作用等，由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生，細(xì)胞代謝等過(guò)程的整體而全面的認(rèn)識(shí)。14.基因治療的主要內(nèi)容和策

19、略是什么？基因標(biāo)記(gene labeling)Neo基因,逆轉(zhuǎn)錄病毒載體；基因置換(基因矯正)定位重組或同源重組糾正缺陷基因或異常序列；基因添加(基因增補(bǔ)) 導(dǎo)入外源基因使靶細(xì)胞表達(dá)其本身不表達(dá)的基因，導(dǎo)入正常的基因補(bǔ)償缺陷基因的功能，導(dǎo)入新的基因,利用表達(dá)產(chǎn)物治療；基因干預(yù)(gene interference)指采用特定的方式抑制某個(gè)基因的表達(dá),或者通過(guò)破壞某個(gè)基因而使之不表達(dá),以達(dá)到治療疾病的目的、導(dǎo)入寡核苷酸抑制內(nèi)源基因的表達(dá) 反義核酸封閉基因表達(dá)核酶裂解特異的靶mRNA。09級(jí)分子生物學(xué)考試復(fù)習(xí)題二一名詞解釋1、genomic基因組學(xué):旨在闡明基因組結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系以及基因與基

20、因之間相互作用的一門學(xué)科。它包括結(jié)構(gòu)基因組學(xué)，功能基因組學(xué)和比較基因組學(xué)。2、cis-acting elements順式作用元件：與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)，能夠被基因調(diào)控蛋白特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列。3、trans-acting elements反式調(diào)控元件;一些可以通過(guò)結(jié)合順式元件而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性的蛋白因子。4、promoter啟動(dòng)子:是DNA分子可以與RNA聚合酶特異性結(jié)合的部位，也就是使轉(zhuǎn)錄開(kāi)始的部位。5、enhancer增強(qiáng)子：位于結(jié)構(gòu)基因附近，能夠增強(qiáng)該基因轉(zhuǎn)錄活性的一段DNA順序稱為增強(qiáng)子6、leading strand前導(dǎo)鏈：在以35方向的母鏈為，模板時(shí)，復(fù)制合成出一條53方

21、向的鏈稱為前導(dǎo)鏈，前導(dǎo)鏈的前進(jìn)方向與復(fù)制叉打開(kāi)方向是一致的，因此前導(dǎo)鏈的合成是連續(xù)進(jìn)行的 7、single strand binding proteins單鏈結(jié)合蛋白SSBP：它與解開(kāi)的單鏈DNA結(jié)合，使其穩(wěn)定不會(huì)再度螺旋化并且避免核酸內(nèi)切酶對(duì)單鏈DNA水解，保證了單鏈DNA作為模板時(shí)的伸展?fàn)顟B(tài)，SSBP可以重復(fù)利用。8、轉(zhuǎn)錄單位:真核生物的一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位就是一個(gè)基因，由一個(gè)結(jié)構(gòu)基因和相應(yīng)的順式調(diào)控元件組成。9、transcriptional factor轉(zhuǎn)錄因子：真核生物在轉(zhuǎn)錄時(shí)往往需要多種蛋白質(zhì)因子的協(xié)助，一般是起正調(diào)控作用的反式作用因子。10、constitutive gene expre

22、ssion組成性基因表達(dá)：是指在個(gè)體發(fā)育的任一階段都能在大多數(shù)細(xì)胞中持續(xù)進(jìn)行的基因表達(dá)。其基因表達(dá)產(chǎn)物通常是對(duì)生命過(guò)程必需的或必不可少的，且較少受環(huán)境因素的影響。這類基因通常被稱為管家基因（housekeeping gene）。 11、leucine zipper亮氨酸拉鏈?zhǔn)怯H脂性的螺旋，包含有許多集中在螺旋一邊的疏水氨基酸，兩條多肽鏈以此形成二聚體。每隔6個(gè)殘基出現(xiàn)一個(gè)亮氨酸。由賴氨酸（Lys）和精氨酸（Arg）組成DNA結(jié)合區(qū)。12、operon操縱子：在原核生物中，若干結(jié)構(gòu)基因可串聯(lián)在一起，其表達(dá)受到同一調(diào)控系統(tǒng)的調(diào)控，這種基因的組織形式稱為操縱子。由調(diào)控區(qū)和信息區(qū)組成，上游是調(diào)控區(qū)，包

23、括啟動(dòng)子和操控元件。13、Silencer 沉默子1) 可以在遠(yuǎn)距離作用于順式連接的啟動(dòng)子(2) 對(duì)基因的阻遏作用沒(méi)有方向的限制，即無(wú)論其位于啟動(dòng)子的上游或下游均可阻遏啟動(dòng)子的表達(dá)14、insulator絕緣子:長(zhǎng)約幾百個(gè)核苷酸對(duì)，是通常位于啟動(dòng)子同正調(diào)控元件(增強(qiáng)子)或負(fù)調(diào)控因子(為異染色質(zhì))之間的一種調(diào)控序列。絕緣子本身對(duì)基因的表達(dá)既沒(méi)有正效應(yīng)，也沒(méi)有負(fù)效應(yīng)，其作用只是不讓其他調(diào)控元件對(duì)基因的活化效應(yīng)或失活效應(yīng)發(fā)生作用。 二、論述題1、增強(qiáng)子的特點(diǎn)及其作用機(jī)理在轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)5或3側(cè)均能起作用；相對(duì)于啟動(dòng)子的任一指向均能起作用；發(fā)揮作用與受控基因的遠(yuǎn)近距離相對(duì)無(wú)關(guān)；對(duì)異源性啟動(dòng)子也能發(fā)揮作用；

24、通常具有一些短的重復(fù)順序。作用機(jī)理：a增強(qiáng)子中有Z-DNA結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)的雙鏈間距離大于B-DNA，與蛋白質(zhì)的親和力更高一些，有利于轉(zhuǎn)錄；b增強(qiáng)子中有DNA水解酶容易切斷的部位，可與一些轉(zhuǎn)錄因子蛋白形成復(fù)合物，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄；c增強(qiáng)子可與核基質(zhì)結(jié)合形成結(jié)構(gòu)體，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄。2、DNA復(fù)制的基本特點(diǎn)復(fù)制的起始點(diǎn)和方向：復(fù)制起始點(diǎn)：復(fù)制是從DNA分子上的特定部位開(kāi)始的，這一部位叫做復(fù)制起始點(diǎn)(origin of replication)常用ori或o表示。復(fù)制起始點(diǎn)：DNA復(fù)制起始點(diǎn)有結(jié)構(gòu)上的特殊性。這些特殊的結(jié)構(gòu)對(duì)于在DNA復(fù)制起始過(guò)程中參與的酶和許多蛋白質(zhì)分子的識(shí)別和結(jié)合都是必須的。DNA復(fù)制的方向：定

25、點(diǎn)開(kāi)始雙向復(fù)制： 定點(diǎn)開(kāi)始單向復(fù)制：兩點(diǎn)開(kāi)始單向復(fù)制;復(fù)制的基本方式DNA的半保留復(fù)制;半不連續(xù)復(fù)制。3、在DNA復(fù)制過(guò)程中怎樣保證遺傳信息傳遞的高度保真性氨酰TRNA的高度專一性及校正功能，從而保證特異的氨基酸只能與相對(duì)應(yīng)的特異性TRNA相結(jié)合；TRNA的反密碼子與MRNA密碼子之間相對(duì)嚴(yán)格的堿基互補(bǔ)，通過(guò)互補(bǔ)識(shí)別，從而使只有MRNA上的密碼子對(duì)應(yīng)的氨基酸才能被攜帶進(jìn)入A位及延長(zhǎng)肽鏈；核糖體對(duì)氨酰TRNA進(jìn)位的校正作用，錯(cuò)誤的氨酰TRNA因反密碼子與密碼子不能配對(duì)，解離系數(shù)就會(huì)變大而迅速解離，直到正確的氨酰TRNA進(jìn)入A位；由于密碼子的兼并性，對(duì)于有多個(gè)密碼子的氨基酸來(lái)說(shuō)，如果密碼子的第三位

26、堿基發(fā)生突變并不影響所翻譯蛋白質(zhì)的序列，對(duì)于維持遺傳的穩(wěn)定性有重要作用。4、在蛋白質(zhì)生物合成過(guò)程中怎樣保證遺傳信息傳遞的高度保真性、SD序列對(duì)翻譯的調(diào)節(jié)：、SD序列的順序?qū)Ψg的影響：核糖體可以直接結(jié)合到mRNA上的任何一個(gè)在AUG前面SD序列，并從其后的AUG開(kāi)始翻譯。不同的SD序列有一定的差異，因而翻譯始效率不同。、SD序列的位置對(duì)翻譯的影響：SD序列與AUG(起始點(diǎn))之間的距離也是影響mRNA翻譯效率的重要因素之一。、mRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)隱蔽SD序列的作用。mRNA的穩(wěn)定性。翻譯產(chǎn)物對(duì)翻譯的調(diào)控。小分子RNA的調(diào)控作用。5、已知人體細(xì)胞中大約有將近25萬(wàn)種蛋白質(zhì)，而人類基因大約只有2、5-3

27、萬(wàn)個(gè)。上述差異對(duì)你有何啟示？在某一特定時(shí)期，只有少數(shù)的基因處于轉(zhuǎn)錄激活狀態(tài)，其余大多數(shù)基因則處于靜息狀態(tài)。一般來(lái)說(shuō)，在大部分情況下，處于轉(zhuǎn)錄激活狀態(tài)的基因僅占5%。請(qǐng)結(jié)合基因表達(dá)調(diào)控原理給予可能的解釋。基因表達(dá)的時(shí)間特異性（二）基因表達(dá)的空間特異性。（答案不全）。6、乳糖操縱子的調(diào)控原理乳糖操縱子由三個(gè)結(jié)構(gòu)基因Z、Y、A,分別編碼b-半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰化酶。其調(diào)控區(qū)由啟動(dòng)子、操縱原件和CAP結(jié)合位點(diǎn)共同構(gòu)成。乳糖操縱子的轉(zhuǎn)錄起始是由CAP和阻遏蛋白兩種調(diào)控因子來(lái)控制的，CAP起正調(diào)控作用。當(dāng)葡萄糖和乳糖的存在與否而有4種不同的組合：都存在時(shí)，乳糖的存在解除了阻遏蛋白對(duì)轉(zhuǎn)錄的抑制作用

28、。但葡萄糖使細(xì)胞內(nèi)cAMP水平降低，cAMP-CAP復(fù)合物不能形成，CAP不能結(jié)合到位點(diǎn)上，轉(zhuǎn)錄不能啟動(dòng)，基因處于關(guān)閉狀態(tài)；僅葡萄糖存在時(shí)，無(wú)誘導(dǎo)劑（半乳糖）存在，阻遏蛋白與DNA結(jié)合。葡萄糖的存在，cCAMP濃度低，CAP仍不能發(fā)揮正調(diào)控作用，基因處于關(guān)閉狀態(tài)；都不存在時(shí)，無(wú)葡萄糖，CAP可發(fā)揮正調(diào)控作用，但無(wú)誘導(dǎo)劑，阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控作用使基因仍處于關(guān)閉狀態(tài)；僅乳糖存在時(shí)，CAP發(fā)揮作用，存在誘導(dǎo)劑，基因被打開(kāi)，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。7、參與DNA復(fù)制的酶和因子有那些？各有何功能？解鏈酶(helicase)：解鏈酶的作用就是打開(kāi)DNA雙鏈之間的氫鍵。引物酶(primase) 它是一種特殊的RNA聚合酶，

29、可催化短片段RNA的合成。DNA聚合酶的53聚合活性, 35外切核酸酶活性, 53外切核酸酶活性,DNA pol并不是DNA復(fù)制過(guò)程中的主要酶，它的作用主要與DNA損傷后的修復(fù)有關(guān)。DNA聚合酶,它具有53聚合活性和35外切活性，而沒(méi)有53外切活性，它的作用可能與DNA損傷修復(fù)有關(guān)。DNA聚合酶, 是在DNA復(fù)制過(guò)程中起主要作用的聚合酶。拓?fù)洚悩?gòu)酶(topoisomerase)是一類改變DNA拓?fù)湫再|(zhì)的酶。拓?fù)洚悩?gòu)酶(Topo)的主要作用在體外可催化DNA的各種拓?fù)洚悩?gòu)化反應(yīng)，而在生物體內(nèi)它們可能參與了DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄。連接酶(ligase)的作用是催化相鄰的DNA片段以3、5磷酸二酯鍵相連接。8、DNA甲基化抑制基因轉(zhuǎn)錄的機(jī)制 1) DNA甲基化直接干擾特異轉(zhuǎn)錄因子與各自啟動(dòng)子識(shí)別位置的結(jié)合：一些轉(zhuǎn)錄因子(如AP2、CMyc/Myn、CAREB、E2F)能識(shí)別含CpG殘基的序列，當(dāng)CpG殘基上的C被甲基化后，結(jié)合作用即被抑制。序列特異性的甲基化DNA結(jié)合蛋白與啟動(dòng)子區(qū)甲基化CpG島結(jié)合，募集組蛋白去乙酰化酶(HDAC)，形成轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合物，阻止轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子區(qū)靶序列的結(jié)合，從而影響基因的轉(zhuǎn)錄。DNA甲基化通過(guò)改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)，抑制基因表達(dá)。染色質(zhì)構(gòu)型的變化伴隨著組蛋白的乙酰化和去乙酰化，以調(diào)控