1、精選優質文檔-傾情為你奉上核酸擴增熒光檢測實驗和結果分析標準操作程序1目的保證擴增及結果分析的標準化、規范化。2使用范圍使用LightCycler型擴增儀的核酸擴增熒光檢測實驗室。3操作人XXX4標準程序4.1 核酸提取、純化、擴增、產物分析的具體操作見項目SOP文件及儀器使用SOP文件；注：目前，SOP文件的主要依據是生產廠家提供的檢測試劑盒說明書。4.2 核酸提取、純化、加模板在樣本處理區完成；4.3 擴增反應體系的配制、分裝在試劑處理區進行；4.3 制備好的擴增混合液由傳遞窗轉移至擴增區，上機擴增；4.5 擴增程序的編程：日常檢測活動中，操作者必須遵循儀器使用SOP文件規定的路徑。編程或

2、修改路徑參照儀器說明書；4.6 標本標識的傳遞：以標本唯一性標識中的“序列號”作為檢測過程中的“檢驗號”進行傳遞；4.7 工作安排：每一項目每周至少完成一個批次的檢測；4.8 在移取所需體積的血清及痰液后，立即蓋緊原始標本管蓋，將標本繼續保存于-20冰箱；4.8.1原始標本保存一周后丟棄；4.8.2如患者及醫生對標本結果有異議，則需在一周內及時提出意見，以便重新檢測復核結果；4.9結果分析標準程序 對于LightCycler結果曲線的分析，應按以下步驟進行：全部曲線陰性對照陽性對照陽性室內質控品陽性標準品逐個分析（標出陽性標本和可疑標本）調整參數，獲得較好的標準曲線，顯示定量結果登記，發報告。

3、4.9.1整體曲線的觀察將所有曲線選中進行整體觀察a）觀察是否存在污染情況（包括標本污染和試劑污染），特別應注意大量曲線在同一Ct值出現上漲的情況。b）觀察是否有光路傳導阻滯或電壓波動等機器原因形成的異常曲線。4.9.2陰性對照的分析陰性對照：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知陰性標本。作用：用以監測實驗室和前處理過程中是否存在污染。4.9.3陽性對照的分析陽性對照：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知陽性標本。作用：用以監測實驗能否正常檢出陽性標本，避免假陰性的出現。4.9.4陽性室內質控品的分析陽性室內質控品：試劑中加入與待檢標本進行同樣處理的已知或未知濃度的陽性室內質控血清。作用：

4、用以監控日常實驗的精密度。4.9.5陽性標準品的分析a）各梯度曲線的分布是否均勻，若各梯度曲線均未分開，則表明陽模稀釋可能存在問題，提示實驗中存在較大人為誤差。b）觀察各曲線的Ct值是否在平日的正常位置。情況1：若出現低拷貝標準品做不出，而各曲線Ct 值均后移，則判斷是否為試劑擴增效率下降（如試劑過期或保存條件不合格）。情況2：出現低拷貝標準品做不出，而高拷貝曲線Ct值均正常，則提示可能存在低拷貝陽性標準品的降解情況。c）每日必做103標準品，用作以下三方面監控：一是否存在操作誤差，如加樣量過少等原因導致103標準品未能檢出；二是否存在稀釋后的梯度放置過久，低拷貝標準品降解的情況；三是若高拷貝

5、標準品出現Ct值后移，且能排除情況a、b，則判斷是否為試劑靈敏度下降。4.9.6單個曲線的判斷逐個分析每條曲線，判斷曲線的陰陽性或屬可疑曲線。（可疑標本是指曲線在37個Ct值后出現上漲且平臺趨勢不明顯或上漲幅度比較低的標本。可疑標本要第二天重做，兩次結果一致則報陽性，否則結果報陰性。）曲線觀察內容：在基線選擇28時觀察Rn值大小（是否有三期特征）。在基線選擇00時觀察Rn值曲線形狀。4.9.7得出定量結果調節基線和閾值以得到一較好的標準曲線。電腦據此曲線給出陽性結果值。此時應排除某些陰性標本因熒光曲線假性上揚而得出的假陽性結果和某些弱陽性標本因終末熒光值過低而顯示的假陰性。4.9.8發放報告及時登記檢測結果記錄，發放臨床報