1、精選課件第九章維生素類(lèi)藥物的分析第九章維生素類(lèi)藥物的分析The Analysis of Vitamines概概 述述 維生素是維持人體正常生理機(jī)能所必需的生物維生素是維持人體正常生理機(jī)能所必需的生物活性物質(zhì)。活性物質(zhì)。 如果人體缺少某種維生素，就會(huì)引起維生素缺如果人體缺少某種維生素，就會(huì)引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機(jī)能。乏癥，而影響人體的正常生理機(jī)能。 例如例如: VA 缺乏缺乏夜盲癥夜盲癥 VB1缺乏缺乏腳氣病腳氣病脂溶性：脂溶性： VA、VD、VE、VK等等B族（族（VB1、VB2等）、等）、VC 、煙酸、煙酸、 葉酸、泛酸等葉酸、泛酸等按溶解性分類(lèi)按溶解性分類(lèi)精選課件9.19.

2、1 維生素維生素A的分析的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)VA含有共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已稀含有共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已稀(有多種異構(gòu)體有多種異構(gòu)體)CH2OR654321987654321R=H VA醇醇 VA1R= COCH3 VA醋酸酯醋酸酯R= COC15H31 VA棕櫚酸酯棕櫚酸酯VA為油狀物為油狀物,存在于魚(yú)肝臟中存在于魚(yú)肝臟中,稱(chēng)魚(yú)肝油稱(chēng)魚(yú)肝油,不溶于水不溶于水. 有人工合成的有人工合成的. 精選課件國(guó)際單位國(guó)際單位IU=0.344微克維生素醋酸酯；微克維生素醋酸酯；IU0.300微克維生素醇微克維生素醇換算：換算：1g維生素醋酸酯相當(dāng)于：維生素醋酸酯相當(dāng)于：61 1029070000.

3、344/gIUg IU1g維生素醇相當(dāng)于：維生素醇相當(dāng)于：61 1033300000.300/gIUg IU精選課件CH2OHCH2OR654321987654321CH2VA1:VA2:(去氫去氫VA)VA3:(去水去水VA)精選課件二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)1、三氯化銻反應(yīng)、三氯化銻反應(yīng) VA在飽和無(wú)水三氯化銻的無(wú)醇三氯甲烷溶在飽和無(wú)水三氯化銻的無(wú)醇三氯甲烷溶液中顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。（液中顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。（P245）注意注意:在水中三氯化銻水解在水中三氯化銻水解,必須在絕對(duì)無(wú)水中進(jìn)行必須在絕對(duì)無(wú)水中進(jìn)行!2、紫外吸收光譜、紫外吸收光譜 VA的無(wú)水乙醇溶液在的無(wú)水乙醇溶液在326nm有

4、最大吸收。有最大吸收。VA(5個(gè)共軛雙鍵個(gè)共軛雙鍵)在鹽酸中加熱在鹽酸中加熱,生成生成6個(gè)共軛雙鍵的個(gè)共軛雙鍵的去水去水VA VA在在326nm有一個(gè)吸收峰有一個(gè)吸收峰 去水去水VA在在350-390nm有三個(gè)吸收峰（有三個(gè)吸收峰（P247）精選課件3、TLC： 確認(rèn)醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，確認(rèn)醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，例：例：VA和其標(biāo)準(zhǔn)品用環(huán)己烷溶解和其標(biāo)準(zhǔn)品用環(huán)己烷溶解 展開(kāi)劑：環(huán)己烷展開(kāi)劑：環(huán)己烷乙醚（乙醚（80：20） 板：硅膠板：硅膠G 顯色：磷鉬酸為顯色劑顯色：磷鉬酸為顯色劑 Rf： VA 醇醇 0. VA 醋酸酯醋酸酯 0.4 VA棕櫚酸酯棕櫚酸酯 0.7精選課件三含量測(cè)

5、定三含量測(cè)定維生素中含有稀釋用油和其它雜質(zhì)，所測(cè)得的維生素中含有稀釋用油和其它雜質(zhì)，所測(cè)得的吸光度不是維生素獨(dú)有的吸收對(duì)測(cè)定有影響。吸光度不是維生素獨(dú)有的吸收對(duì)測(cè)定有影響。即在三個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度，進(jìn)行校正后再計(jì)算。即在三個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度，進(jìn)行校正后再計(jì)算。稱(chēng)為三點(diǎn)校正法稱(chēng)為三點(diǎn)校正法原理：吸光度是維生素原理：吸光度是維生素A和雜質(zhì)吸收之和，測(cè)得和雜質(zhì)吸收之和，測(cè)得A值需校正。（最大吸收為值需校正。（最大吸收為328nm)紫外分光光度法三點(diǎn)校正法紫外分光光度法三點(diǎn)校正法精選課件測(cè)定測(cè)定波長(zhǎng)波長(zhǎng)吸光吸光度度吸光度比值吸光度比值吸光度比吸光度比值差值差計(jì)算計(jì)算值值規(guī)定規(guī)定值值300 0.555

6、316 0.907 (326) 328 1.000 (329) 340 0.811 360 0.299 精選課件方法方法:(1)分別測(cè)分別測(cè)300、316、328、340、360nm吸光度，吸光度，求出各波長(zhǎng)吸光度與求出各波長(zhǎng)吸光度與328nm吸光度比值，吸光度比值，各比值與各比值與P249表中數(shù)據(jù)對(duì)比；表中數(shù)據(jù)對(duì)比；(2)若比值不超過(guò)若比值不超過(guò)0.02可直接用測(cè)得可直接用測(cè)得A值；值；(3)若比值超出若比值超出0.02則則A需校正：需校正： A（校正）（校正）=3.52(2A328-A316-A340)(4)計(jì)算：計(jì)算：1%1100cmAECLA:吸光度吸光度;C:濃度濃度(g/mL);L

7、:溶液厚度溶液厚度(cm);精選課件求效價(jià)：每求效價(jià)：每g供試呂中所含維生素供試呂中所含維生素A的國(guó)際單位的國(guó)際單位1%1/1900cmIU gE求百分含量：求百分含量：1900%100%100A D WWL標(biāo)示量標(biāo)示量A：吸光度（校正后的吸光度）：吸光度（校正后的吸光度）D：稀釋倍數(shù)；：稀釋倍數(shù)；1900：以環(huán)已烷為溶劑時(shí)的換算因子；：以環(huán)已烷為溶劑時(shí)的換算因子；L：比色池厚度；：比色池厚度；W：取樣量；：取樣量；精選課件9.29.2維生素維生素B1的分析的分析一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)維生素維生素B1:氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過(guò)亞甲基連接成的氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)通過(guò)亞甲基連接成的季銨類(lèi)

8、化合物季銨類(lèi)化合物. 白色結(jié)晶白色結(jié)晶,溶于水溶于水,顯酸性顯酸性.學(xué)名學(xué)名: 氯化氯化4-甲基甲基-3-（2-甲基甲基-4-氨基氨基-5-嘧啶基）嘧啶基）甲基甲基-5-（2-羥乙基）噻唑的鹽酸鹽羥乙基）噻唑的鹽酸鹽 俗名俗名:鹽酸硫胺鹽酸硫胺精選課件二二. 鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)1. 硫色素?zé)晒夥磻?yīng)：硫色素?zé)晒夥磻?yīng)： 維生素維生素B1在堿性溶液中，與鐵氰化鉀氧化成硫色在堿性溶液中，與鐵氰化鉀氧化成硫色素，在正丁醇中顯藍(lán)色熒光素，在正丁醇中顯藍(lán)色熒光VB1專(zhuān)屬反應(yīng)，用于鑒別和含量測(cè)定。專(zhuān)屬反應(yīng)，用于鑒別和含量測(cè)定。精選課件 2、沉淀反應(yīng)、沉淀反應(yīng)： 碘化汞鉀碘化汞鉀-淡黃色沉淀淡黃色沉淀 碘碘-紅色

9、沉淀紅色沉淀VB1 硅鎢酸硅鎢酸-白色沉淀白色沉淀 苦味酸苦味酸-扇形白色結(jié)晶扇形白色結(jié)晶 精選課件三三. 含量測(cè)定含量測(cè)定1、非水溶液滴定法、非水溶液滴定法：（：（Ch.P收錄）收錄） VB1分子中含有已成鹽的伯胺和季銨基團(tuán)，在非分子中含有已成鹽的伯胺和季銨基團(tuán)，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。溶劑：冰醋酸溶劑：冰醋酸 / 醋酸汞醋酸汞 指示劑：喹哪定紅指示劑：喹哪定紅- 亞甲藍(lán)混合指示液亞甲藍(lán)混合指示液 滴定劑：高氯酸（滴定劑：高氯酸（0.1mol/L) 終點(diǎn)：天藍(lán)色終點(diǎn)：天藍(lán)色 摩爾比：摩爾比：VB1：高氯酸：高氯酸=1：2 V

10、B1摩爾質(zhì)量摩爾質(zhì)量=337.27 滴定度滴定度T=0.1(1/2) 337.27=16.86mg/ml精選課件2、紫外、紫外UV（中國(guó)藥典）（中國(guó)藥典）VB1片：方法與片劑含量測(cè)定相同片：方法與片劑含量測(cè)定相同(246nm)VB1注射液：與液劑相同。（注射液：與液劑相同。（246nm)1%1100%100cmA D WEW標(biāo)示量1%1%100%100cmA DEV標(biāo)示量標(biāo)示量精選課件9.39.3 維生素維生素C的分析的分析一、化學(xué)結(jié)構(gòu)一、化學(xué)結(jié)構(gòu) OCOHHCH2OHOOHOH123456*1、 具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。 堿性下可水解。堿性下可水解。2、 具有烯二醇基。具有烯二醇基。 還

11、原性，能夠被氧化成去氫還原性，能夠被氧化成去氫抗壞血酸。抗壞血酸。3、結(jié)構(gòu)與糖類(lèi)相似，具有糖性質(zhì)。結(jié)構(gòu)與糖類(lèi)相似，具有糖性質(zhì)。 溶于水，酸性，旋光性。溶于水，酸性，旋光性。精選課件OO HOH OHCC H2O HHO HOO HO HCHOO HC H2O HHOO HOH OHCC H2O HHH OOO HO HCHOC H2O HH OHD(-)-異抗壞血酸L(+)-異抗壞血酸L(+)-抗壞血酸D(-)-抗壞血酸4、具有、具有4種光學(xué)異構(gòu)體。其中生理活性最強(qiáng)的是種光學(xué)異構(gòu)體。其中生理活性最強(qiáng)的是L（+）-抗壞血酸抗壞血酸精選課件 二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn) 1、硝酸銀反應(yīng)（中國(guó)藥典）、硝

12、酸銀反應(yīng)（中國(guó)藥典） 烯二醇基具有還原性，可被硝酸銀氧化成去烯二醇基具有還原性，可被硝酸銀氧化成去氫抗血酸，同時(shí)生成黑色的銀。氫抗血酸，同時(shí)生成黑色的銀。OHOH OOO（黑色）AgAgNOVC32、與、與2，6-二氯靛酚（染料）反應(yīng)二氯靛酚（染料）反應(yīng) VC被還原為無(wú)色的酚亞胺被還原為無(wú)色的酚亞胺精選課件3. 糖的性質(zhì)糖的性質(zhì) VC的結(jié)構(gòu)很象糖結(jié)構(gòu)，具有糖的性質(zhì)的結(jié)構(gòu)很象糖結(jié)構(gòu)，具有糖的性質(zhì)VC + 三氯化醋酸或鹽酸三氯化醋酸或鹽酸-水解水解-脫羧脫羧-戊糖戊糖-失水失水-糠醛糠醛-（加吡咯，加熱）（加吡咯，加熱）-藍(lán)色藍(lán)色4、紫外分光光度法（英國(guó)藥典）、紫外分光光度法（英國(guó)藥典）VC在鹽酸

13、溶液中，在鹽酸溶液中，243nm最大吸收。最大吸收。精選課件OCOHHCH2OHOOHOHHI2OC OHHCH2OHOOOHI2三三含量測(cè)定含量測(cè)定 1. 碘量法（碘量法（Ch.P收錄）收錄）VC在醋酸條件下，被碘定量氧化。在醋酸條件下，被碘定量氧化。 加入淀粉指示劑，藍(lán)色不褪為碘過(guò)量（加入淀粉指示劑，藍(lán)色不褪為碘過(guò)量（30S內(nèi)）。內(nèi)）。由消耗碘量計(jì)算含量。由消耗碘量計(jì)算含量。精選課件 操作：（操作：（P265） 樣品 新沸放冷的水，稀HAc 淀粉 0.1mol/L 碘 終點(diǎn)顏色：無(wú)色終點(diǎn)顏色：無(wú)色藍(lán)色藍(lán)色 1ml 0.1mol/L碘液，碘液，1ml 8.806mg C6H8O6加入新沸放冷

14、的水為了減少水中溶解氧的影響。加入新沸放冷的水為了減少水中溶解氧的影響。酸性：使酸性：使VC在空氣中氧化速度減慢。在空氣中氧化速度減慢。VC注射液中常加有亞硫酸鹽如注射液中常加有亞硫酸鹽如NaHSO3作為抗氧劑作為抗氧劑.精選課件OCOHHCH2OHOOHOHO HC lC lNO HOC OHHCH2OHOOOO HC lC lN HO H終點(diǎn)的顏色是溶液由無(wú)色變?yōu)榧t色。終點(diǎn)的顏色是溶液由無(wú)色變?yōu)榧t色。氧化型（紅色）氧化型（紅色）還原型（無(wú)色）還原型（無(wú)色）+2、 2,6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 酸性下直接用酸性下直接用2,6-二氯靛酚滴定，用滴定劑二氯靛酚滴定，用滴定劑自身的顏色變化

15、指示終點(diǎn)，不需要另外的指示劑。自身的顏色變化指示終點(diǎn)，不需要另外的指示劑。精選課件3、高效液相色譜法、高效液相色譜法 HPLC P276 精選課件9.4 9.4 維生素維生素D D VD VD是一類(lèi)抗佝僂病維生素的總稱(chēng)是一類(lèi)抗佝僂病維生素的總稱(chēng), ,有片劑有片劑, ,注射劑注射劑, ,膠囊等膠囊等. .一、結(jié)構(gòu)（一、結(jié)構(gòu)（P268P268） 開(kāi)環(huán)麥角甾烯醇，又稱(chēng)麥角骨化酸。開(kāi)環(huán)麥角甾烯醇，又稱(chēng)麥角骨化酸。VD2VD2，VD3VD3 無(wú)色針狀結(jié)晶，旋光性，不溶于水。無(wú)色針狀結(jié)晶，旋光性，不溶于水。精選課件二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)1、顯色反應(yīng)、顯色反應(yīng) 2、維生素、維生素D2和和D3的區(qū)分的區(qū)分精

16、選課件三、含量測(cè)定三、含量測(cè)定 高效液相色譜法，藥典收錄。高效液相色譜法，藥典收錄。精選課件OCH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3H3COCH3CO1458名稱(chēng)：消旋名稱(chēng)：消旋-生育酚醋酸酯（生育酚醋酸酯（ -異構(gòu)體生理活性異構(gòu)體生理活性最強(qiáng)）最強(qiáng)）母核：苯駢二氫吡喃衍生物，苯環(huán)上有一乙酰化的母核：苯駢二氫吡喃衍生物，苯環(huán)上有一乙酰化的酚羥基酚羥基側(cè)鏈：脂肪烷烴側(cè)鏈：脂肪烷烴性質(zhì)：不溶于水，油狀，微黃色液體。性質(zhì)：不溶于水，油狀，微黃色液體。9.5 維生素維生素E（稱(chēng)為生育酚）（稱(chēng)為生育酚）一、結(jié)構(gòu)：苯并二氫吡喃醇衍生物，一、結(jié)構(gòu)：苯并二氫吡喃醇衍生物，精選課件二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)1

17、、硝酸反應(yīng)：（藥典收錄）、硝酸反應(yīng)：（藥典收錄）VE在硝酸條件下在硝酸條件下,水解生水解生成生育酚成生育酚.生育酚被硝酸氧化為鄰醌結(jié)構(gòu)的生育紅生育酚被硝酸氧化為鄰醌結(jié)構(gòu)的生育紅. VE + HNO3 -水解生成生育酚水解生成生育酚-生育紅（橙紅色）生育紅（橙紅色）2、水解后氧化反應(yīng)：、水解后氧化反應(yīng)： VE在堿性條件下水解，得在堿性條件下水解，得生育酚，在聯(lián)吡啶生育酚，在聯(lián)吡啶和三氯化鐵試液的作用下，反應(yīng)產(chǎn)生血紅色配離子和三氯化鐵試液的作用下，反應(yīng)產(chǎn)生血紅色配離子。VE+KOH 生育酚（加入三氯化鐵）生育酚（加入三氯化鐵）-生育醌生育醌 + 鐵配合物鐵配合物 （血紅色）精選課件3、UV吸收：吸

18、收：VE的的0.01%無(wú)水乙醇液：無(wú)水乙醇液： max=284nmmin=254nm4、紅外光譜（中國(guó)藥典）、紅外光譜（中國(guó)藥典）三、雜質(zhì)檢查三、雜質(zhì)檢查檢查游離生育酚檢查游離生育酚: ChP2005: ChP2005鈰量法：用鈰量法：用Ce(SOCe(SO4 4) )2 2(0.01mol/L)(0.01mol/L)滴定，滴定， 指示劑：二苯胺指示劑：二苯胺終點(diǎn)：亮黃終點(diǎn)：亮黃灰紫灰紫 消耗消耗Ce(SOCe(SO4 4) )2 2液不得超過(guò)液不得超過(guò)1.0ml1.0ml。精選課件 1、鈰量法（中國(guó)藥典）、鈰量法（中國(guó)藥典）原理：原理：VE用硫酸加熱回流，水解成生育酚，用硫酸用硫酸加熱回流，

19、水解成生育酚，用硫酸鈰定量地氧化為對(duì)一生育醌，過(guò)量的硫酸鈰氧化二鈰定量地氧化為對(duì)一生育醌，過(guò)量的硫酸鈰氧化二苯胺指示劑而指示滴定終點(diǎn)。苯胺指示劑而指示滴定終點(diǎn)。 終點(diǎn)：亮黃終點(diǎn)：亮黃灰紫灰紫 ，需作空白試驗(yàn)。，需作空白試驗(yàn)。四、含量測(cè)定四、含量測(cè)定2、氣相色譜法：、氣相色譜法：Chp20053、高效液相色譜法、高效液相色譜法 日本藥局方（日本藥局方（JP13）精選課件練習(xí)題：維生素練習(xí)題：維生素AD膠丸中維生素膠丸中維生素A的含量測(cè)定的含量測(cè)定已知：平均膠丸重為已知：平均膠丸重為0.0815g維生素維生素A的標(biāo)示量為的標(biāo)示量為10000IU/丸丸取樣：取樣：ml25ml2ml100g1279. 0精選課件%1cm1E首先要求樣品的首先要求樣品的 。精選課件計(jì)算吸收度比值和吸收度比值差。（填于上表）計(jì)算吸收度比值和吸收度比值差。（填于上表）655. 0)534. 0584. 0652. 02(52. 3A328（校正）%5 .0100652.0652.0655.0由此可知，應(yīng)該用測(cè)得的由此可知，應(yīng)該用測(cè)得的328nm處的吸收度計(jì)算。處的吸收度計(jì)算。然后計(jì)算校正吸收度與未校正吸收度相差的百分?jǐn)?shù)然后計(jì)算校正吸收度與