1、具有檸檬味的西紅柿具有檸檬味的西紅柿一、創設情境一、創設情境 導入新課導入新課二、認真探究二、認真探究 掌握規律掌握規律（一）請閱讀課本第（一）請閱讀課本第8 8頁和第頁和第9 9頁第一段，頁第一段，找出以下問題：找出以下問題：1 1、基因工程中的目的基因指的是什么？、基因工程中的目的基因指的是什么？2 2、獲取目的基因常用的方法有哪些？、獲取目的基因常用的方法有哪些？要求：記憶并舉手復述，要求：記憶并舉手復述，有不同意見可有不同意見可 補充補充（二）閱讀課本第（二）閱讀課本第9頁選段：從基因文庫中頁選段：從基因文庫中 獲取目的基因，回答以下問題：獲取目的基因，回答以下問題：1、記憶基因文庫的

2、概念和種類、記憶基因文庫的概念和種類2、部分基因文庫就是部分基因文庫就是cDNA文庫？文庫？3、如何從基因文庫中得到所需要的基因？如何從基因文庫中得到所需要的基因？要求：獨立思考，然后舉手復述，有不同要求：獨立思考，然后舉手復述，有不同 意見可補充意見可補充（三）閱讀課本第三）閱讀課本第1010頁：生物技術資料，頁：生物技術資料，思考并回答以下問題：思考并回答以下問題：1 1、如何構建基因組文庫？構建過程需要、如何構建基因組文庫？構建過程需要 哪些酶？哪些酶？2 2、如何構建、如何構建cDNAcDNA文庫？該過程需要哪些文庫？該過程需要哪些 酶？酶？3 3、找出、找出cDNAcDNA文庫和基因

3、組文庫的區別，文庫和基因組文庫的區別， 記憶并用自己的語言復述記憶并用自己的語言復述要求：先獨立思考，然后舉手發言，有不要求：先獨立思考，然后舉手發言，有不同意見可補充同意見可補充（四）閱讀課本：利用四）閱讀課本：利用PCRPCR技術擴增目的基因，并技術擴增目的基因，并 完成以下問題完成以下問題1 1、概念：、概念：PCRPCR全稱為全稱為_，是一項，是一項 在生物在生物_復制復制_的核酸合成技術的核酸合成技術 2 2、原理：、原理：_3 3、方式：、方式：以以_方式擴增，即方式擴增，即_（n n為擴增循環的為擴增循環的次數）次數）4 4、結果：、結果：使目的基因的片段在短時間內成百萬倍地擴使

4、目的基因的片段在短時間內成百萬倍地擴增增聚合酶鏈式反應聚合酶鏈式反應體外體外特定特定DNADNA片段片段DNADNA復制復制指數指數2 2n n要求：獨立思考，然后舉手發言要求：獨立思考，然后舉手發言PCRPCR技術擴增的條件：技術擴增的條件：_、 _、_ _ （前提前提）、）、 _已知基因的核苷酸序列已知基因的核苷酸序列特定特定DNADNA片段片段DNADNA聚合酶聚合酶一對引物一對引物（四）請認真觀看以下動畫，并結合課四）請認真觀看以下動畫，并結合課本完成以下內容：本完成以下內容：要求要求:先獨立思考，再小組討論，然后舉手先獨立思考，再小組討論，然后舉手發言發言逆轉錄法逆轉錄法目的基因的信

5、使目的基因的信使RNARNA 雙鏈雙鏈DNADNA（目的基因（目的基因) )化學合成法化學合成法蛋白質的氨基酸序列蛋白質的氨基酸序列信使信使RNARNA序列序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因人工合成人工合成逆轉錄酶逆轉錄酶3 3、人工合成目的基因、人工合成目的基因推測推測推測推測單鏈單鏈DNADNADNADNA聚合酶聚合酶適用條件：目的基因小，已知目的基因的核苷酸序列適用條件：目的基因小，已知目的基因的核苷酸序列三、課堂鞏固三、課堂鞏固 拓展延伸拓展延伸1 1、下列屬于獲取目的基因的方法的是、下列屬于獲取目的基因的方法的是( )( )利用利用mRNAmRNA反轉錄形成反轉錄形

6、成 從基因組文庫中從基因組文庫中提取提取從受體細胞中提取從受體細胞中提取 利用利用PCRPCR技術技術 利用利用DNADNA轉錄轉錄 人工合成人工合成A.A. B. B. C. C.D.D.D D2、目的基因可從基因文庫中獲得，下列有、目的基因可從基因文庫中獲得，下列有關基因文庫的描述正確的是（關基因文庫的描述正確的是（ ）A、某生物的全套基因就是一個基因文庫、某生物的全套基因就是一個基因文庫B、將含有某種生物不同的許多、將含有某種生物不同的許多DNA片段，片段，導入某個導入某個 生物生物 體內，則這個生物就是一體內，則這個生物就是一個基因文庫個基因文庫C、含有一種生物所有基因的基因文庫叫、含

7、有一種生物所有基因的基因文庫叫做基因組文庫做基因組文庫D、含有一種生物的一部分基因的基因文、含有一種生物的一部分基因的基因文庫叫庫叫cDNA文庫文庫C3 3、比較、比較 PCRPCR擴增技術和生物體內合成目的擴增技術和生物體內合成目的基因的異同點基因的異同點【不同點】：【不同點】： 1. 1. 都以都以DNADNA為模板為模板2. 2. 都以四種脫氧核苷酸為底物都以四種脫氧核苷酸為底物3. 3. 都要都要DNADNA聚合酶聚合酶4 4. . 都需要解開雙鏈為都需要解開雙鏈為2 2條單鏈條單鏈【不同點】：【不同點】：1.PCR1.PCR是是DNADNA復制的體外擴增技術復制的體外擴增技術2.2.

8、體內體內DNADNA復制半不連續復制，體外復制半不連續復制，體外PCRPCR連續復制連續復制3.3.體內體內DNADNA復制的聚合酶在高溫時會變性，復制的聚合酶在高溫時會變性，PCRPCR需需要耐熱的要耐熱的DNADNA聚合酶（常用聚合酶（常用TaqDNATaqDNA聚合酶）。聚合酶）。4.PCR4.PCR需要經歷三十次循環使特定需要經歷三十次循環使特定DNADNA片段放大數片段放大數百萬倍。百萬倍。5.DNA5.DNA復制需要校對以保證忠實性，復制需要校對以保證忠實性，PCRPCR不需要校不需要校對。對。6.6.引物不同：體內引物不同：體內DNADNA復制需要復制需要RNARNA，而且體內引

9、，而且體內引物要除去，物要除去，PCRPCR需要兩個人工合成的需要兩個人工合成的DNADNA引物，不引物，不需要切除。需要切除。利用利用PCRPCR技術擴增技術擴增某生物體內某生物體內全部全部DNADNA 許多許多DNADNA片段片段受體菌群體受體菌群體基因組文庫的構建基因組文庫的構建限制酶限制酶與運載體與運載體 連接導入連接導入基因組文庫基因組文庫某種生物某個時期的某種生物某個時期的mRNAmRNAcDNAcDNA反轉錄酶反轉錄酶受體菌群體受體菌群體與運載體與運載體 連接導入連接導入部分基因文庫部分基因文庫（cDNA文庫）文庫）cDNA文庫的構建文庫的構建DNA聚合酶聚合酶雙鏈雙鏈DNA基因

10、表達載體的作用：基因表達載體的作用：a、使目的基因在受體細胞中穩定存在并遺傳給子代、使目的基因在受體細胞中穩定存在并遺傳給子代b、同時使目的基因能表達和發揮作用、同時使目的基因能表達和發揮作用思考：思考：作為基因工程表達載體，只需含有目的基因就可作為基因工程表達載體，只需含有目的基因就可以完成任務嗎？為什么？以完成任務嗎？為什么？二、基因表達載體的構建二、基因表達載體的構建核心核心不可以。因為目的基因在表達載體中得到表達并發揮作用，不可以。因為目的基因在表達載體中得到表達并發揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標記基因等。還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標記基因等。必須構建

11、上述元件的主要理由是：必須構建上述元件的主要理由是：（1） 生物之間進行基因交流，只有使用生物之間進行基因交流，只有使用受體生物自身基因受體生物自身基因的啟動子才能比較有利于基因的表達；的啟動子才能比較有利于基因的表達；（2） 通過通過cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導入受體生物中無法轉錄；序列導入受體生物中無法轉錄；（3） 目的基因是否導入受體生物中需要有篩選標記；目的基因是否導入受體生物中需要有篩選標記；（4） 為了增強目的基因的表達水平，往往還要增加一些其為了增強目的基因的表達水平，往往還要增加一些其他調控元件，如增強子等；他調控元

12、件，如增強子等；（5） 有時需要確定目的基因表達的產物存在于細胞的什么有時需要確定目的基因表達的產物存在于細胞的什么部位，往往要加上可以標識存在部位的基因（或做成目的基部位，往往要加上可以標識存在部位的基因（或做成目的基因與標識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。因與標識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。請閱讀課本請閱讀課本11頁：基因表達載體的構建，思頁：基因表達載體的構建，思考并回答以下問題：考并回答以下問題：1、基因表達載體包括幾部分？、基因表達載體包括幾部分？2、各部分的作用分別是什么？、各部分的作用分別是什么？3、回憶必修二基因表達載體的構建過程，、回憶必修二基因表達載體的

13、構建過程，并用自己的語言復述并用自己的語言復述要求：獨立思考，用自己的語言歸納復述，要求：獨立思考，用自己的語言歸納復述，然后小組討論并舉手發言，有不同意見可補然后小組討論并舉手發言，有不同意見可補充充（1 1）用一定的）用一定的_切切割質粒，使其出現一個切口，割質粒，使其出現一個切口，露出露出_。（2 2）用）用_切斷目切斷目 的基因，使其產生的基因，使其產生_ _ _。（3 3）將切下的目的基因片段插入質粒的）將切下的目的基因片段插入質粒的_處，再加入適量處，再加入適量_，形成了一個重組，形成了一個重組 DNADNA分子（重組質粒）分子（重組質粒）限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一種限制酶同

14、一種限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA連接酶連接酶相同相同2 2、過程、過程: :請閱讀課本請閱讀課本1212頁頁1313頁：將目的基因導入受頁：將目的基因導入受體細胞部分，思考并回答以下問題：體細胞部分，思考并回答以下問題：1 1、將目地基因導入植物細胞的方法有哪些？、將目地基因導入植物細胞的方法有哪些？2 2、農桿菌轉化法中利用的是農桿菌的那些特、農桿菌轉化法中利用的是農桿菌的那些特點？點？3 3、理解記憶圖、理解記憶圖111111：復述農桿菌轉化法的：復述農桿菌轉化法的 過程；將目的基因插入到過程；將目的基因插入到T-DNAT-DNA的哪部分？的哪部分？4 4、基因槍法適用于

15、哪類受體細胞？、基因槍法適用于哪類受體細胞？要求要求: :獨立思考，然后舉手發言獨立思考，然后舉手發言( (三三) )將目的基因導入受體細胞將目的基因導入受體細胞轉化轉化目的基因進入目的基因進入_內，并且在內，并且在 受體細胞內維持受體細胞內維持_和和_的過程的過程受體細胞受體細胞穩定穩定表達表達方法方法導入植物細胞導入植物細胞導入動物細胞導入動物細胞導入微生物細胞導入微生物細胞農桿菌轉化法農桿菌轉化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微注射法 感受態細胞吸收感受態細胞吸收DNADNA分子分子( (三三) )將目的基因導入受體細胞將目的基因導入受體細胞1、將目的基因導入植物細

16、胞將目的基因導入植物細胞（1）農桿菌）農桿菌轉化法轉化法特點特點:能感染能感染雙子葉植物雙子葉植物和和祼子植祼子植物物,對單子葉植物無感染能力對單子葉植物無感染能力Ti質粒質粒的的TDNA可轉移至受可轉移至受體細胞并整合到其染色體上體細胞并整合到其染色體上轉化過程轉化過程:Ti質粒質粒目的基因目的基因構建構建表表達達載載體體導入導入植植物物細細胞胞插入插入植物細胞植物細胞染色染色DNA表達表達新新性性狀狀轉入轉入農農桿桿菌菌請閱讀課本請閱讀課本13頁，思考并回答以下問題：頁，思考并回答以下問題：1、歸納將目的基因導入動物細胞的步驟、歸納將目的基因導入動物細胞的步驟2、找出并記憶大腸桿菌細胞的轉

17、化方法、找出并記憶大腸桿菌細胞的轉化方法要求：獨立思考，快速記憶，然后舉手要求：獨立思考，快速記憶，然后舉手發言發言2 2、將目的基因導入動物細胞、將目的基因導入動物細胞方法：顯微注射法方法：顯微注射法程序：程序：目的基因表達載體提純目的基因表達載體提純 取卵（受精卵）取卵（受精卵） 顯微注射顯微注射 受精卵受精卵 新性狀動物新性狀動物3、將目的基因導入微生物細胞將目的基因導入微生物細胞常用法常用法：Ca2+處理處理常用菌常用菌：大腸桿菌：大腸桿菌微生物作受體細胞原因：微生物作受體細胞原因：繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對少繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對少過程：過程：Ca2+處理處理大腸桿菌

18、大腸桿菌感受態感受態細胞細胞表達載體表達載體與感受態與感受態細胞混合細胞混合感受態細感受態細胞吸收胞吸收DNA請閱讀課本請閱讀課本14頁和頁和15頁，思考并回答以頁，思考并回答以下問題：下問題：目的基因的檢測包括幾個步驟，以及每目的基因的檢測包括幾個步驟，以及每個檢測步驟所用的方法分別是什么？個檢測步驟所用的方法分別是什么？要求：認真閱讀課本，獨立思考，然后要求：認真閱讀課本，獨立思考，然后小組發言小組發言( (四四) )目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定檢測檢測導入檢測：目的基因是否導入受體細胞導入檢測：目的基因是否導入受體細胞方法方法 DNADNA分子雜交分子雜交表達檢測表達檢測轉錄檢測轉錄檢測分子雜交分子雜