1、基因工程隨堂作業(yè)題 目：離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)簡(jiǎn)介 院（系）：專業(yè)：班級(jí)：姓名：學(xué)號(hào)：成績(jī)：完成日期：離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)簡(jiǎn)介在植物轉(zhuǎn)基因方法中,人們總是在全力尋找那些更為簡(jiǎn)單、有效而又通用的手段,以便繞過(guò)復(fù)雜的原生質(zhì)體培養(yǎng)過(guò)程,實(shí)現(xiàn)帶壁細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移。于是,便開(kāi)始了應(yīng)用物理方法進(jìn)行植物轉(zhuǎn)基因的嘗試,并獲得了很大進(jìn)展。其中較為成功的方法有電激法、基因槍或微彈轟擊法、注射法、激光穿孔法和超聲波法。這些方法就其本質(zhì)來(lái)說(shuō),都是使細(xì)胞壁穿孔而又不傷害細(xì)胞,提供外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞的通道。20世紀(jì)80年代末,由于受到離子注入金屬、半導(dǎo)體等材料進(jìn)行表面改性、摻雜等研究的啟示,中國(guó)科學(xué)院等離子體物理研究所余增

2、亮等人,率先嘗試將離子注入技術(shù)應(yīng)用與生物材料,進(jìn)行農(nóng)作物品種的改良,并于1986年首次獲得成功。至此,一個(gè)新興的交叉學(xué)科離子束生物工程學(xué)問(wèn)世,并日益受到國(guó)內(nèi)外專家的關(guān)注。1991年余增亮等提出了離子束介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)移的設(shè)想,隨后成功獲得了水稻轉(zhuǎn)基因植株。離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)打破了傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因法( PEG法、電擊法、脂質(zhì)體法等)操作繁瑣,轉(zhuǎn)化率低,重復(fù)性差,基因型依賴性強(qiáng)的限制,是一種較簡(jiǎn)單易行的轉(zhuǎn)基因方法。1. 離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理植物細(xì)胞表面存在細(xì)胞壁,是外源基因轉(zhuǎn)移的天然屏障。所有的轉(zhuǎn)基因方法都是通過(guò)打破這一屏障,或以易于外源基因?qū)氲募?xì)胞或組織(如原生質(zhì)體、萌發(fā)胚、子房和幼穗等)作

3、為受體而實(shí)現(xiàn)的。離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因的原理主要包括了3個(gè)方面,即通道作用、吸引作用和整合作用。首先,一定能量和劑量的離子束對(duì)植物細(xì)胞壁的濺射作用破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu),結(jié)果在局部產(chǎn)生刻蝕和穿孔,為外源遺傳物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞提供微通道,這就是離子束對(duì)生物體的通道作用。其次,用于注入的荷電正離子降低了細(xì)胞表面的負(fù)電性(沉積作用) ,從而減弱了對(duì)帶負(fù)電的外源DNA 的靜電斥力,從而促進(jìn)了外源DAN的吸附和進(jìn)入,即產(chǎn)生吸引作用。再者,離子束的直接和間接作用打斷細(xì)胞內(nèi)的染色體DNA結(jié)構(gòu),有利于外源遺傳物質(zhì)整合到受體基因組中,即整合作用。2離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因方法2. 1注入離子類型離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)目前所用的元素

4、離子種類主要有2種: N+和Ar+。安徽省開(kāi)展離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因較早,多用Ar+作為注入離子。他們認(rèn)為Ar+是一種惰性元素,不會(huì)與生物靶組織發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而沉積下來(lái),最終以氬氣的形式逸出靶面。卞坡等進(jìn)一步研究表明,在相同的能量和劑量下,Ar+的刻蝕效果優(yōu)于N+。但是,吳麗芳等研究認(rèn)為,用相同劑量、相同能量的N+和Ar+處理小麥成熟胚,結(jié)果兩種離子對(duì)小麥成熟胚出愈率的影響差異不顯著。河南省在進(jìn)行外源大分子DNA轉(zhuǎn)移時(shí),多用N+注入,其變異效果和三代的穩(wěn)定情況并不比用Ar+ 的差。看來(lái),拓寬離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因所用的注入元素離子的種類,仍是今后研究的重點(diǎn)。2. 2注入離子的能量和劑量注入離子的能量、劑量和

5、脈沖劑量直接關(guān)系到離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的效果。吳麗芳等研究認(rèn)為,用離體小麥成熟胚為受體,以GUS基因(GFP基因)為供體,選用的離子注入能量在2025 keV時(shí),介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因效果較好。在能量為25 keV,脈沖劑量為2.6×1015 N+ /cm2 條件下,對(duì)小麥成熟胚進(jìn)行處理,發(fā)現(xiàn)低劑量處理未導(dǎo)致出愈率降低,反而略有升高。然而,當(dāng)劑量大于5 ×1016 ions/ cm2 時(shí),會(huì)導(dǎo)致出愈率急劇下降。他們認(rèn)為,選用4. 68 ×1016 ions/ cm2 作為離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因的注入劑量較為合適。吳麗芳等在以外源大分子裸露DNA為供體,成熟種子胚為受體(不是離體胚)時(shí),所

6、用的照射能量為30 keV,劑量為7 ×1016 Ar+ /cm2。萇收偉等用俄羅斯制造的TITAN 全元素注入機(jī),進(jìn)行離子束輔助外源DNA轉(zhuǎn)移時(shí),所用的照射能量為30 keV,束流200mA,脈寬400ms,頻率25 Hz,劑量為2 ×1017 N + / cm2。看來(lái),不同的離子注入機(jī)在進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作時(shí),要摸索合適的參數(shù)條件。3.離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因程序3. 1受體前的處理挑選成熟種子,進(jìn)行消毒。首先用70%的乙醇表面消毒1 min,用無(wú)菌雙蒸水沖洗干凈,接著用0. 1%升汞浸泡15 min (或用20%次氯酸鈉處理30 min) ,然后用無(wú)菌雙蒸水沖洗干凈, 用滅菌濾紙吸

7、干水液。3. 2離子束注入處理將滅菌后的種子,在無(wú)菌操作臺(tái)上用手術(shù)刀將胚切下,胚朝上均勻擺放在平皿中。將無(wú)菌微環(huán)境靶室用酒精滅菌,放入平皿,種胚朝離子束方向,打開(kāi)直通閥,接收離子束的刻蝕,待處理完后立即將種胚侵入含供體DNA (50g/ml)的SSC導(dǎo)入介質(zhì)中,溫育1 h左右,取出種胚用SSC溶液反復(fù)沖洗3次,無(wú)菌濾紙吸干殘存水液,接種到MS誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基上。同時(shí)設(shè)2個(gè)對(duì)照,一個(gè)是種胚只放置在離子束注入的環(huán)境中,但不接受離子束注入處理,同樣浸入含DNA的SSC介質(zhì)中;另一對(duì)照是種子胚接受和處理相同的離子束處理,不含DNA的SSC溶液溫育,兩個(gè)對(duì)照的其它操作均相同。3. 3抗愈傷組織的篩選及植株

8、再生處理和兩個(gè)對(duì)照在MS誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)2天后,轉(zhuǎn)入含潮酶素40 mg/L的相同培養(yǎng)基上,培養(yǎng)20天后將產(chǎn)生的小愈傷連同母體轉(zhuǎn)入含潮酶素50mg/L的MS繼代培養(yǎng)基上繼續(xù)篩選,每2 周繼代一次,約40天后,將得到的穩(wěn)定抗50 mg/L 潮酶素的愈傷組織塊,轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)上進(jìn)行植株再生。3. 4再生植株的分子檢測(cè)目前所報(bào)道的離子束介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因植物,是用PCR和Southern來(lái)檢測(cè)證明受體基因組是否含有目的基因片斷。取再生植株的正常葉片,按盧揚(yáng)江等介紹的方法提取并純化植物DNA,以用作PCR分析。反應(yīng)結(jié)束后,取擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳。通過(guò)比較得到的擴(kuò)增帶和預(yù)期的片段的大小來(lái)證明供體基因是否存

9、在于被測(cè)細(xì)胞中。取少量轉(zhuǎn)基因植株的DNA酶切消化,然后在瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳分離,按Southern的方法轉(zhuǎn)移到尼龍膜上,用缺口轉(zhuǎn)移法對(duì)酶切消化后分離得到的供體質(zhì)粒DNA進(jìn)行放射性同位素標(biāo)記,并作為探針對(duì)轉(zhuǎn)移的基因組DNA進(jìn)行雜交和放射自顯影分析。3. 5遺傳學(xué)分析將轉(zhuǎn)基因植株連同對(duì)照(種子萌發(fā)苗)栽插到田間。種子分別收獲脫粒后,取自交結(jié)實(shí)的轉(zhuǎn)基因植物種子進(jìn)行表面消毒后,在含潮酶素的MSO ( 50 mg/L)培養(yǎng)基上發(fā)芽,對(duì)照組在50 mg/L的培養(yǎng)基上完全受到抑制,且很快死亡。而轉(zhuǎn)基因植株所獲得的潮酶素抗性性狀能夠通過(guò)種子進(jìn)行后代遺傳。4. 離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的突出優(yōu)點(diǎn)第一,刻蝕和濺射作

10、用。荷能離子對(duì)生物材料具有極強(qiáng)的刻蝕和濺射作用,使細(xì)胞形成利于外源基因進(jìn)入的可修復(fù)的微通道。第二,射程的可控性和集束性。利于精確控制被處理組織細(xì)胞的刻蝕程度、損傷范圍。第三,靜電作用。帶正電離子注入細(xì)胞后,電荷交換使微通道積累正電荷,便于吸收帶負(fù)電的外源DNA 主動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞。第四,離子注入造成靶細(xì)胞DNA鏈的損傷,受體細(xì)胞對(duì)損傷的DNA 的修復(fù),利于外源DNA 與受體DNA的重組與整合。第五,利用成熟種子的胚和愈傷組織作為外植體,便于取材和批量操作,同時(shí)也省去了原生質(zhì)體制備和再生植株的麻煩,既方便又有效。5.離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)在農(nóng)作物育種上的應(yīng)用水稻:離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因這一技術(shù)首先在以水稻為受

11、體的研究中得到了證實(shí)。余增亮等首次用離子束介導(dǎo)的方法將報(bào)告基因GUS和CAT導(dǎo)入水稻成熟胚和懸浮細(xì)胞。楊劍波等將攜帶有報(bào)告基因hph(潮酶素抗性基因)的質(zhì)粒pBI222和GUS(2葡萄苷酸酶基因)的pBI221分別導(dǎo)入水稻成熟胚和胚性懸浮細(xì)胞系中,獲得了轉(zhuǎn)基因水稻植株。在轉(zhuǎn)化的懸浮細(xì)胞中,組織化學(xué)染色法檢測(cè)到GUS的表達(dá);而處理的成熟胚經(jīng)潮霉素篩選得到3個(gè)穩(wěn)定的抗性細(xì)胞系,并分化再生出32 株綠苗,其中移栽成活25 株,PCR擴(kuò)增檢測(cè)均得到與預(yù)期大小相同的350bp的擴(kuò)增片段,進(jìn)一步的Southern blot證實(shí), hph基因整合到受體基因組中并穩(wěn)定遺傳。李紅將水稻幾丁質(zhì)酶基因RCH8用此法

12、轉(zhuǎn)入多個(gè)水稻品種中,獲得一批經(jīng)PCR和Southern blot檢測(cè)的轉(zhuǎn)基因植株,轉(zhuǎn)基因植株葉片的細(xì)胞粗提液表現(xiàn)出抑制被孢霉生長(zhǎng)的作用。最近,安徽省農(nóng)科院抗菌肽shiva基因?qū)胨净謴?fù)系明恢63熟胚中,經(jīng)愈傷誘導(dǎo)和綠苗再生, PCR檢測(cè)分析證明,外源基因已整合到再生植株的基因組中。通過(guò)離子束介導(dǎo)法將紫玉米的總DNA導(dǎo)入水稻品種早秈213,經(jīng)連續(xù)6年12代的選育,獲得了一批穩(wěn)定遺傳的變異株系,不僅根系發(fā)達(dá),而且在莖干等部位表現(xiàn)出供體玉米的紫色性狀。測(cè)定了其中農(nóng)藝性狀較好的8個(gè)株系的光合速率,平均比早秈213提高84%。用40個(gè)隨機(jī)引物對(duì)上述8個(gè)玉米稻株系以及早秈213和紫玉米的基因組DNA 進(jìn)

13、行RAPD 分析,玉米稻DNA的RAPD擴(kuò)增帶和早秈213的相似性很高,但存在明顯差異,出現(xiàn)來(lái)自玉米DNA的“目的帶”,提示玉米DNA可能已經(jīng)整合到受體的基因組中。小麥:吳麗芳將水稻幾丁質(zhì)酶基因在氬離子介導(dǎo)下注入小麥,得到高效表達(dá)幾丁質(zhì)酶的小麥植株。在此基礎(chǔ)上,將改良的綠色熒光蛋白基因(mGFP4)導(dǎo)入小麥栽培品種皖9210和皖麥32的成熟胚細(xì)胞。在含有100120mg/L巴龍霉素培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)后,獲得了一批抗性愈傷組織。經(jīng)過(guò)分化培養(yǎng),獲得再生苗。對(duì)再生苗進(jìn)行PCR 檢測(cè),均擴(kuò)增出600bp的npt基因片段。取4株長(zhǎng)勢(shì)好的綠苗進(jìn)行Southern雜交分析,結(jié)果表明,這4株綠苗皆為轉(zhuǎn)基因植株。

14、根據(jù)PCR分析結(jié)果統(tǒng)計(jì),皖9210和皖麥32號(hào)的平均植株轉(zhuǎn)化率分別是1.3%和4.1%。用同樣的方法將水稻幾丁質(zhì)酶基因RCH8轉(zhuǎn)入小麥品種皖9219和皖麥32的成熟胚中,經(jīng)抗性篩選的再生植株當(dāng)代(R0)及R1代均擴(kuò)增出預(yù)期大小的DNA片段,Southern雜交證實(shí)外源基因已經(jīng)整合到小麥基因組中；R1代葉片的細(xì)胞粗提液對(duì)小麥赤霉病菌株F 0和F15有明顯的抑制作用,說(shuō)明外源基因在受體中穩(wěn)定遺傳。其他作物:日本原子能研究所于1998年用碳離子(大氣環(huán)境中)介導(dǎo)將PCH基因轉(zhuǎn)入干的花粉細(xì)胞。將基因轉(zhuǎn)入花粉比轉(zhuǎn)入裸露的細(xì)胞更加困難,因?yàn)榛ǚ奂?xì)胞為雙層壁結(jié)構(gòu)。同時(shí),本實(shí)驗(yàn)首次嘗試將束流引入室外,在大氣環(huán)

15、境中對(duì)生物材料進(jìn)行注入。此后,科學(xué)家們進(jìn)一步深入研究,轉(zhuǎn)移的外源基因也從以前的報(bào)告基因最終轉(zhuǎn)向目的基因。卞坡等利用30KeV的離子束在1.5×1017ions/cm2的注入劑量下介導(dǎo)外源甘藍(lán)全DNA導(dǎo)入模式植物擬南芥菜,在94株轉(zhuǎn)化當(dāng)代植株中,有6株表型產(chǎn)生變異。宋道軍等以氯化鈣制備感受態(tài)受體細(xì)胞轉(zhuǎn)移法為對(duì)照,用離子束介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移技術(shù),將具有高效DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)的耐輻射異常球菌(D.radiodurans)的基因組DNA片段轉(zhuǎn)入對(duì)紫外(UV)輻照敏感的大腸桿菌中。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)入DNA后的菌株對(duì)UV輻射的抗性不僅高于其對(duì)應(yīng)的敏感菌株,而且也高于其對(duì)應(yīng)的敏感菌株的產(chǎn)生菌株,表現(xiàn)為:轉(zhuǎn)入

16、DNA后的菌株受紫外輻照的存活率明顯提高,代表修復(fù)合成的非按期DNA合成(UDS)能力大為增強(qiáng)。中國(guó)科學(xué)院等離子體物理研究所與安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院合作,用粒子束介導(dǎo)法將紫色玉米全DNA轉(zhuǎn)入水稻,獲得了3個(gè)玉米稻新品系,在區(qū)域試驗(yàn)后將大范圍推廣。安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)用比克氏棉和紅麻DNA轉(zhuǎn)化泗棉2號(hào),獲得了高抗枯萎病的棉花新品系。在這些實(shí)驗(yàn)中,轉(zhuǎn)移的外源DNA能夠整合到受體基因組中,并能夠在后代中穩(wěn)定遺傳。宋道軍等將銀杏DNA導(dǎo)入西瓜品種316和SR 221422中,銀杏內(nèi)酯在西瓜品種316和SR221422的轉(zhuǎn)化當(dāng)代葉片中的表達(dá)量分別為17.0756g/g和45.9998g/g;有銀杏內(nèi)酯表達(dá)的兩個(gè)月齡

17、西瓜葉片超氧化物岐化酶活性,也分別比對(duì)照提高了近一倍,表明獲得了供體植物多基因在受體中的表達(dá)。離子束介導(dǎo)外源基因組DNA導(dǎo)入受體,可以篩選到帶有目的性狀的轉(zhuǎn)化后代,為遠(yuǎn)緣和超遠(yuǎn)緣物種間遺傳物質(zhì)交流提供了一種新的有效途徑,且可以實(shí)現(xiàn)多基因的轉(zhuǎn)移和表達(dá),顯示出在農(nóng)作物育種上的美好應(yīng)用前景。6.離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究現(xiàn)狀從目前的研究現(xiàn)狀來(lái)看,在利用低能離子束生物技術(shù)進(jìn)行外源遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)化中,主要包括2個(gè)方面的研究?jī)?nèi)容,即低能離子束介導(dǎo)目的基因的遺傳轉(zhuǎn)化和離子束介導(dǎo)DNA大片段的遺傳轉(zhuǎn)化。大量的研究結(jié)果已經(jīng)證實(shí),低能離子束對(duì)生物體細(xì)胞的超微加工使得細(xì)胞的通透性會(huì)發(fā)生明顯的改變;通過(guò)對(duì)照射劑量進(jìn)行控制

18、,可以在細(xì)胞和組織上形成可修復(fù)的微孔,這為外源遺傳物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞提供了良好的通道。經(jīng)過(guò)近20年的不斷研究和探索,在離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展過(guò)程中,離子束介導(dǎo)作用的異源遺傳物質(zhì)重組效應(yīng)已經(jīng)被越來(lái)越多的試驗(yàn)結(jié)果所證實(shí),其實(shí)用性和普遍性也已經(jīng)被相關(guān)領(lǐng)域的研究者所肯定,一些簡(jiǎn)單的生物學(xué)問(wèn)題已經(jīng)被闡明,一些實(shí)用性技術(shù)體系已經(jīng)建立并不斷得到完善。然而,離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)在今后的發(fā)展中仍然面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn),還有一些更引人注目的問(wèn)題值得研究,今后在該領(lǐng)域內(nèi)的研究難度會(huì)隨著研究的不斷深入而越來(lái)越大。此領(lǐng)域迫切需要建立一個(gè)更加完善的物理技術(shù)平臺(tái),急待形成一個(gè)更加完整的研究體系。有必要借助于其他學(xué)科的新技術(shù)或新工

19、藝形成一個(gè)相互補(bǔ)充的技術(shù)集成體系,更應(yīng)該將離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的實(shí)用性和普遍性的范圍不斷地拓寬。7.問(wèn)題與展望雖然離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因方法在外源遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移方面獲得極大的成功,但這一新興的技術(shù)還有待于進(jìn)一步完善。從近10多年來(lái)離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究結(jié)果來(lái)看,學(xué)科內(nèi)的研究資料尚缺乏系統(tǒng)性和完整性,即研究項(xiàng)目所涉及到的生物種類比較多,但對(duì)每一種生物的研究深度還比較膚淺;對(duì)某些生物物種內(nèi)特定材料研究的比較多,而忽視了統(tǒng)一生物物種的不同基因型對(duì)離子束介導(dǎo)作用會(huì)表現(xiàn)不同的生物學(xué)效應(yīng)；在通過(guò)離子束介導(dǎo)外源遺傳物質(zhì)對(duì)生物受體進(jìn)行遺傳改良的過(guò)程中,對(duì)其后代的表現(xiàn)型效應(yīng)研究的比較多,而對(duì)其細(xì)胞學(xué)機(jī)理、生理生化基

20、礎(chǔ)和分子生物學(xué)機(jī)制的研究比較少。目前的裝置需要在真空下進(jìn)行離子注入,而真空的脫水作用和真空導(dǎo)致的凍害,使注入后細(xì)胞或組織的存活率大大下降。不僅嚴(yán)重影響轉(zhuǎn)化的效率,而且限制了在動(dòng)物和以無(wú)性繁殖為主的果木和蔬菜上的應(yīng)用。對(duì)于不同的物種、不同基因型的材料,還需確定其適宜的轉(zhuǎn)化參數(shù)。此外,國(guó)內(nèi)進(jìn)行離子注入所用的劑量單位是ions/ cm2 ,并非國(guó)際通用的計(jì)量單位,造成這一具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新技術(shù)較難在國(guó)外優(yōu)秀刊物上發(fā)表。改進(jìn)裝置,將離子束流引出真空是解決問(wèn)題的關(guān)鍵,應(yīng)建造一臺(tái)能量更高、能引出外束的新裝置。在目前條件下,為提高轉(zhuǎn)基因效率和擴(kuò)大受體范圍,離子注入前用冷凍保護(hù)劑預(yù)處理是行之有效的方法。由于

21、低能離子束具有質(zhì)荷能協(xié)同作用下的特殊生物學(xué)效應(yīng),它已在生物品種改良、生命起源和進(jìn)化以及環(huán)境輻射生物學(xué)效應(yīng)等多個(gè)理論和應(yīng)用研究領(lǐng)域中獲得長(zhǎng)足發(fā)展。通過(guò)離子束介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)移已獲得了一大批生物優(yōu)良品系,取得了顯著的社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益,應(yīng)用前景十分廣闊。作為一門新的交叉學(xué)科,低能離子生物學(xué)將隨著研究的不斷深入,進(jìn)一步完善其理論體系,拓展其應(yīng)用研究領(lǐng)域,開(kāi)創(chuàng)新的研究局面。可以預(yù)見(jiàn),隨著離子束生物技術(shù)的不斷發(fā)展,離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因技術(shù)將在更多的生物上得到應(yīng)用,在外源基因組DNA轉(zhuǎn)移方面取得突破性進(jìn)展。知識(shí)創(chuàng)新工程為這一領(lǐng)域的發(fā)展提供了極好的機(jī)遇,相信在生物學(xué)家和物理學(xué)家的共同努力下,這一領(lǐng)域的發(fā)展前景將會(huì)更加廣闊。參考文獻(xiàn):1余增亮.離子束與生命科學(xué)一個(gè)新的研究領(lǐng)域J.物理,1997,26(6): 333-338.2Yu Z L,Deng J G, He J J , et al. Mutation breeding by ion im2p lantation J.Nuclear Instruments and Methods in Physics Research,1991,B59 /60: 705 -708.3吳麗芳,李紅,宋道軍. 建立低能離子束介導(dǎo)小麥轉(zhuǎn)基因方法并獲得轉(zhuǎn)GUS基因植株J.遺傳學(xué)報(bào),2000,27(11):982-991.4吳麗芳,李紅,宋道君等.低能氬離