1、衰老進程中機體免疫器官和免疫細胞因子變化及健脾補腎中藥的干預研究        【摘要】     目的 觀察衰老進程中白細胞介素-2(IL-2)、白細胞介素-6(IL-6)水平和胸腺、脾臟指數的變化及健脾補腎中藥干預的效應。方法 將大鼠隨機分為空白對照組,模型組,健脾補腎中藥大、中、小治療組,陽性對照組,每組8只。除空白對照組外,其余大鼠以D-半乳糖0.125 g/(kg?d)連續40 d皮下注射建立亞急性衰老大鼠模型,造模成功后健脾補腎中藥組采用不同劑量健脾補腎中

2、藥干預,陽性對照組予桂附地黃丸干預。40 d后測定各組大鼠血清IL-2、IL-6水平和胸腺、脾臟指數。結果 模型組大鼠血清IL-2和胸腺、脾臟指數顯著降低(P<0.05),血清IL-6顯著升高(P<0.05);健脾補腎中藥組大鼠血清IL-2和胸腺、脾臟指數增高(P<0.05),血清IL-6顯著降低(P<0.05)。結論 健脾補腎中藥具有調節衰老機體細胞因子失衡、抑制免疫器官退化和萎縮的作用。     【關鍵詞】  衰老;白細胞介素-2;白細胞介素-6;胸腺指數;脾臟指數;健脾補腎;大鼠   

3、 Abstract：Objective To investigate the variation of IL-2 and IL-6 in serum and thymus and spleen index of aging, and effect of Chinese medicine with spleen-strengthening and kidney-tonifying on them. Methods Rats were randomly divided into control group, model group, treatment group of differen

4、t dose Jianpi Bushen herbs and positive control group, 8 rats in each. The subacutely aging model rats were made by subcutaneous injecting D-galactose 0.125 g/(kg?d) continually for 40 days. After treatment with different dose Jianpi Bushen herbs for 40 days, levels of IL-2 and IL-6 in serum and thy

5、mus and spleen index were evaluated. Results The level of IL-2 in serum, thymus and spleen index in model group were downregulated (P<0.05), level of IL-6 in serum was increased significantly (P<0.05). After treated with spleen- strengthening and kidney-tonifying medicine, the level of IL-2 in

6、 serum, thymus and spleen index were upregulated (P<0.05), level of IL-6 in serum was reduced significantly (P<0.05). Conclusion Chinese medicine with spleen-strengthening and kidney-tonifying can adjust and recover the unbalance of cytokines, and also has good effect on immune organs and func

7、tions in aging process.Key words：aging;IL-2;IL-6;thymus index;spleen index;spleen-strengthening and kidney-tonifying;rats免疫功能衰退是免疫系統全方位多系統的受基因嚴格控制的循序遞減的自然過程。故人體全身衰老與免疫防御的健全狀態密切相關。研究表明免疫系統在細胞和分子水平上的適度調節可以延緩衰老1。細胞因子是指由機體的免疫細胞和非免疫細胞合成和分泌的能調節細胞功能的小分子多肽,在免疫應答過程中,細胞因子對于細胞間相互作用、細胞的生長和分化有重要的調節作用,具有介導和調節免疫細胞

8、應答的多種生理功能,其中白細胞介素(IL)水平可反映機體免疫能力是否正常。近年來研究表明,中醫“脾腎”實質與機體衰老、免疫功能紊亂密切相關2-4。為進一步觀察衰老進程中機體免疫器官、免疫細胞因子變化以及健脾補腎中藥的干預作用,本課題以D-半乳糖所致亞急性衰老大鼠為模型,測定了衰老進程中IL-2、IL-6水平和胸腺、脾臟指數的變化及健脾補腎中藥干預的效應,從而探討健脾補腎中藥干預衰老的活性和作用機制。1 材料與方法1.1 動物采用SPF級Wistar大鼠,雌雄各半,3月齡,體質量(180±20)g,甘肅中醫學院醫學實驗中心提供,SPF級動物合格證號：SCXK(甘)2004-0006-0

9、000201;SPF級實驗設施合格證：SYXK(甘)2004-006-000092。1.2 藥物與試劑敦煌石室大寶膠囊由熟地黃、黃芪、當歸、茯苓、大黃等藥物按特定比例經過提取、分離而成;甘肅中醫學院附屬醫院院內制劑,批號070612);桂附地黃丸,蘭州佛慈制藥廠生產,批號2007013,市售。IL-2(批號20071027)、IL-6(批號20071030)放射免疫分析藥盒,均購自北京科美東雅生物技術有限公司。1.3 主要儀器DF110型電子分析天平;XYJ80-2離心機;FT-630 g微機多探頭計數器;KDC-2044低速冷凍離心機。1.4 造模參考文獻5方法,除空白對照組大鼠每日皮下注射

10、等量生理鹽水外,其余受試動物頸部皮下注射D-半乳糖注射液(0.125 g/kg),每日1次,連續40 d,進行亞急性衰老造模。D-半乳糖注射液每周配制1次。1.5 分組與給藥造模成功后將亞急性衰老模型動物按體質量編號,用隨機數字表法6分為模型組,健脾補腎中藥大劑量組、中劑量組、小劑量組,陽性對照組,每組8只,雌雄各半分籠飼養,并灌胃給藥治療?？瞻讓φ战M、模型組給予同體積蒸餾水灌胃;健脾補腎中藥大、中、小劑量組分別予0.8、0.4、0.16 g/(kg?d)健脾補腎中藥灌胃(相當于60 kg成人一日劑量的10、5、2倍);陽性對照組給予0.4 g/(kg?d)桂附地黃丸藥劑灌胃(相當于60 kg

11、成人一日劑量的5倍),等效劑量按人與動物體型系數折算7,給藥容積均為1 mL/100 g。各組均以蒸餾水、標準飼料喂養,連續灌胃40 d。1.6 標本采集各組動物最后1次灌胃,禁食不禁水24 h后全部殺檢。血清標本制備：大鼠股動脈采血5 mL,37 水中放置30 min,以3 000 r/min離心10 min,分離血清4 冰箱保存,待測。采血結束后斷頭處死,剝離出大鼠胸腺及脾臟后分別稱重,并分別除以大鼠體質量,得到胸腺指數(100×胸腺質量/體質量)及脾指數(100×脾臟質量/體質量)。1.7 統計學方法所有數據均輸入計算機,采用SPSS13.0統計軟件處理,數據以x&#

12、177;s表示,組間樣本均數差異的比較選用F檢驗,在F檢驗有統計學意義時,進一步用q檢驗進行兩兩比較。P<0.05為差異有統計學意義。2 結果(見表1、表2)表1 各組大鼠血清IL-2、IL-6水平比較表2 各組大鼠胸腺指數、脾臟指數比較3 討論目前有關衰老機制的研究主要有神經免疫學說、自由基損傷學說、基因突變學說、免疫衰退學說和端粒學說等,但在所有的器官或系統的衰老進程中,以免疫系統的衰老出現最早,對機體影響最大,與疾病關系最密切,并從根本上參與了機體老化的全過程,因此,研究免疫系統在衰老過程中的變化具有重要的理論和實際意義。1977年Basedovsky首次提出“免疫-神經-內分泌網

13、絡”學說;1988年Meites提出,免疫-神經-內分泌網絡在衰老過程中起著重要作用;許多研究也表明,由于機體免疫功能隨增齡下降,導致自身免疫疾病以及癌癥發生的增多。雖然機體細胞免疫和體液免疫功能均隨著年齡增長發生變化,但老年機體免疫功能下降主要與T細胞變化有關8。有研究發現,T細胞功能的降低與胸腺退化密切相關9。衰老時隨著胸腺形態和功能變化,胸腺上皮細胞MHC分子表達下降,導致T細胞總數減少及抗原特異性T細胞免疫功能下降。IL-2主要由活化的T細胞產生,在調節免疫應答、抗腫瘤等方面發揮重要作用,是反映機體免疫功能強弱的重要指標,IL-2產生減少可加速機體衰老進程10。IL-6主要由單核巨噬細

14、胞、T細胞、B細胞等產生,不僅在免疫系統中具有重要作用,還可作用于神經內分泌系統,從而影響全身各功能系統的活動。在衰老和許多老年疾病發生時,IL-6水平均不同程度升高,可導致一系列免疫功能和內分泌功能紊亂,從而加速機體衰老進程11。同時研究表明,機體的衰老與免疫功能降低程度為平行關系12。機體在性成熟后其免疫功能隨年齡增長而下降,首先表現為免疫器官如骨髓、脾臟、淋巴結,尤其是免疫中心器官胸腺退變。在機體免疫衰老過程中,胸腺衰老起主導作用。胸腺衰老可直接影響細胞免疫,間接影響體液免疫,出現繼發性免疫缺陷。因而胸腺衰老被看作為在免疫衰老過程中最重要的事件,成為研究的熱點之一。健脾補腎中藥敦煌石室大

15、寶膠囊由熟地黃、黃芪、當歸、茯苓、大黃等藥物經過提取、分離而成,具有強腎填精、健脾益氣、滌痰祛瘀、安和五臟功效?，F代藥理研究表明,熟地黃、黃芪、當歸、茯苓、大黃的有效成分有延緩衰老和調節免疫功能作用13-16。本實驗結果表明,衰老模型大鼠胸腺、脾臟指數及血清IL-2計數水平顯著下降(P<0.05),血清IL-6水平升高(P<0.05);健脾補腎中藥可顯著升高衰老大鼠胸腺、脾臟指數和血清IL-2水平(P<0.05),降低血清IL-6水平(P<0.05),說明其具有保護免疫器官、維持并調節免疫功能作用。    【參考文獻】 

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