1、黃芩莖葉總黃酮對A引起癡呆大鼠學習記憶的影響                         作者：葉紅 王瑞婷 左彥珍 關麗華 申興斌   【摘要】   目的觀察黃芩莖葉總黃酮對大鼠雙側海馬注射A2535引起的學習記憶及神經元形態的影響。方法將30只雄性Wistar大鼠隨機分為空白對照組、模型組、總黃酮組。空白對照組灌胃蒸餾水

2、，1次/d，共7 d，第8天，海馬注射生理鹽水，繼續灌胃；模型組第8天海馬注射A2535 5 l含10 g，其它同對照組；給藥組50 mg/kg總黃酮每天灌胃1次，共7 d，第8天海馬注射A25-35，繼續灌胃，各組于第15天采用Morris水迷宮實驗觀察大鼠學習記憶能力，1次/d，測5 d，處死，Nissl染色觀察海馬錐體細胞的變化。結果模型組大鼠逃避潛伏期較對照組明顯延長，海馬CA1區錐體細胞帶脫失，不完整，細胞出現空泡樣變性，給藥組大鼠逃避潛伏期較模型組縮短，細胞損傷較輕。結論黃芩莖葉總黃酮對海馬注射A2535引起的學習記憶損傷及海馬神經元形態變化具有保護作用。 【關鍵詞】  

3、 阿爾茨海默病 淀粉樣蛋白 黃芩莖葉總黃酮    Abstract:ObjectiveTo investigate the protection of SSTF on memory deficit, neuronal degeneration  induced by bilateral injection A2535 in rat hippocampus.Methods30 male Wistar rats were randomly divided into three groups. The distilled water  was giv

4、en (ig, 1/d) to the comparision group and the model group, SSF (ig 50mg/kg/d  1/d)was given to SSF group. On the Eighth day  saline or A was injected to bilateral hippocampus of the control group or the model and SSF group .  Morris water maze task was used to evaluate the memory on t

5、he fifteenth day,once for 5d. Nissl staining was used to investigate the change of hippocampus nerve cells.ResultsThe model group resulted in a significantly increased latency to find the hidden platform . SSF group resulted in a significantly reduced latency as compared with the model group. The pa

6、thological changes included neuron loss,nuclear disappearance in the model group. SSF group showed the reduced damage compared with the model group .ConclusionSSF may be beneficial for improving the learning and memory deficit induced by A25-35.    Key words:AlzhEImer's disease;&#

7、160; Amyloid-beta protein;  Total flavonoid of Scutellarea Baicalensis stem-leaf (SSTF)    阿爾茨海默病（Alzheimer's disease, AD）亦稱老年性癡呆癥，是一種以進行性認知功能障礙和記憶力損害為主的中樞神經系統退行性疾病，與年齡的增長密切相關。AD的發病機制復雜，目前研究主要集中在氧自由基、炎癥因子及中樞神經元凋亡3個方面。黃芩是我國傳統的中草藥，眾多研究集中在其有效成分黃酮類化合物的研究上，研究表明黃芩莖葉總黃酮具有抗炎、抗免疫、保護心肌

8、缺血再灌注損傷、 治療 腦缺血等作用1。本實驗采用大鼠海馬內注射淀粉樣蛋白（A）致大鼠癡呆模型，采用Morris水迷宮實驗觀察黃芩莖葉總黃酮（SSTF）對癡呆大鼠學習、記憶的影響。     1  材料     1.1  動物雄性Wistar大鼠30只，體質量（280±20）g, 動物證號712123，由河北醫科大學實驗動物中心提供，標準環境下飼養； 自然 光線，自由進食水。    1.2  試劑A2535由Sigma公司提供，黃芩莖葉總黃酮由承德醫學院中藥研究所提供

9、，純度61.88。     2  方法     2.1  分組及處理將Wistar大鼠隨機分為3組，每組10只。空白對照組大鼠給予蒸餾水灌胃，1次/d，7 d，第8天雙側海馬各注射5 l的無菌生理鹽水，繼續灌胃給蒸餾水；模型組第8天雙側海馬各注射凝膠態A2535 5 l含10 g, 其它同空白對照組。給藥組黃芩莖葉總黃酮50 mg/（kg?d）灌胃，1次/d，7 d，第8天雙側海馬各注射凝膠態A2535 5 l含10 g，繼續灌胃給藥，3組大鼠于第15天進行水迷宮實驗，連續測5 d后處死。  &

10、#160; 2.2  制作動物模型大鼠灌胃第8天，用4的水合氯醛腹腔麻醉（1 ml/100 g），固定于腦立體定位儀（江灣1號C型腦立體定向儀），剪去頭頂部毛發，于AP -3.5 mm，ML ±2 mm，DV 2.7mm定位海馬，用三棱針鉆開顱骨，暴露硬腦膜，微量注射器5 min內緩慢注入A（A溶于無菌生理鹽水2 g/L,20保存，臨用前置于37孵育7 d成凝膠態），留針2 min，緩慢撤針，肌注青霉素3 d，1次/d，10萬u。     2.3  Morris水迷宮行為學實驗迷宮裝置由 中國 醫學 科學 院藥物研究所提供，圓形不銹鋼

11、水池，直徑120 cm,高60 cm，水池底和筒壁皆為黑色；將水池等分為4個象限；目標象限的中央放置一直徑為10 cm，高23.5 cm的圓形隱藏平臺，整個實驗期間其位置保持不變；水池中水面高于平臺1.5 cm，水溫（21±1）；水池周圍安裝環形布簾，實驗期間迷宮周圍參照物不變，迷宮上方安置攝像機，同步記錄大鼠運動軌跡。實驗前動物自由游泳2 min，如果大鼠找不到平臺，將大鼠放在平臺20 s, 每天將大鼠從4個象限點面向池壁各測驗兩次，記錄動物尋找并爬上平臺所需時間，如果動物在60 s內未找到平臺，由實驗者將其引至平臺，潛伏期記為60 s。第12天為訓練，后3 d數據作為學習、記憶成

12、績。    2.4  取材、固定、切片、染色動物麻醉后，經左心室快速灌注250 ml的生理鹽水，然后灌注含4多聚甲醛的PB液250 ml(先快后慢)進行固定，1 h后取腦，后固定過夜，脫水，石蠟包埋，行冠狀切片，片厚5 m，切片取含海馬部位，用硫堇作Nissl染色。    2.5  統計學處理實驗數據以±s，用SSPS12.0軟件進行單因素方差分析。     3  結果     3.1  Morris水迷宮實驗模型組的逃避潛伏

13、期較空白對照組明顯延長（P<0.05）, 藥物組與模型組相比明顯縮短（P<0.05）。表1  各組大鼠在隱藏平臺的平均逃避潛伏期與對照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05；n=10    3.2  海馬的Nissl 染色模型組海馬CA1區錐體細胞帶脫失，不完整，核邊聚，部分錐體細胞出現空泡樣變性，注射針道附近可見膠質細胞明顯增生。空白對照組細胞帶完整，排列有序，未見明顯的細胞增生，給藥組錐體細胞損傷較小，膠質細胞增生不明顯。     4  討論  

14、0;  阿爾茨海默病（AlzhEimer's disease, AD）是一種以進行性記憶力下降和智能衰退為主要臨床特征的中樞神經系統變性疾病，其主要的病理特征是腦內細胞外老年斑（SP）和細胞內神經纖維纏結形成(NFT)，老年斑的核心是淀粉樣肽（A）沉積，A沉積是AD發病的中心環節。體內產生的A有兩種即A140，A142，凝聚態的A可構成淀粉樣蛋白纖維，體外凝聚態A與AD患者腦中的A有相似的結構，其中2535位的氨基酸序列的多肽片斷是A的生物活性片斷。多項研究表明A體內、體外均可引起學習記憶功能減退及細胞形態改變24。本實驗大鼠雙側海馬注射A2535引起大鼠學習記憶功能的減退，

15、Morris實驗顯示模型組大鼠的逃避潛伏期明顯延長，給藥組較模型組的逃避潛伏期明顯縮短，Nissl染色顯示模型組CA1區錐體細胞帶脫失，不完整，部分錐體細胞出現核邊聚，出現空泡樣變性。結果顯示凝聚態A對海馬神經元造成了損傷，黃芩莖葉總黃酮對A引起的損傷有一定保護作用。    A引起錐體細胞損傷，學習、記憶能力減退的機制研究主要集中在氧自由基、炎癥因子、神經元凋亡方面。A本身可產生活性氧（ROS），也可通過多種途徑誘導ROS產生，使神經細胞胞漿中自由基濃度升高，使脂質過氧化，形成脂質過氧化物，當線粒體和內質網的膜結構氧化損傷后，鈣離子進入胞質，線粒體腫脹，影響到細胞

16、色素氧化酶（COX），細胞色素釋放，啟動caspase凋亡系統，引起神經元凋亡5。    目前臨床對AD的 治療 沒有較好的藥物，開發抗AD藥物主要集中在通過研究AD發病的分子機制尋找新的靶點及抗氧化中藥的開發上。對黃芩的研究集中在其有效成分黃酮類化合物，趙淑敏等研究顯示總黃酮預處理能保護心肌抗氧化酶的活性，抵制脂質過氧化反應，減輕自由基對心肌的損害；商亞珍等6研究顯示總黃酮通過影響AlCl3引起小鼠海馬組織MDA、SOD的變化減輕鋁中毒小鼠癡呆程度。因此黃芩莖葉總黃酮預處理可能通過減輕A引起的氧自由基的產生等機制而減輕A引起的損傷。黃芩莖葉總黃酮在抗炎、抗心肌缺

17、血、腦缺血等疾病模型中已顯示出其保護作用，其在鋁中毒、A引起的癡呆中亦顯示出保護作用，其作用機制還有待于進一步探討。 【 參考 文獻 】   1 趙淑敏，劉 勝，楊宏光,等.黃芩莖葉總黃酮預處理對缺血再灌注心肌脂質過氧化損傷的保護作用J.解剖學雜志，2006，29（4）：450.2 Zambrano A, Otth C, Mujica L, et al.Interleukin-3 prevents neuronal death induced by amyloid peptideJ.BMC Neurosci，2007,8:82.3 Rodrigo MedEIros, Rui D.S.

18、 Prediger, Giselle F, et al. Connecting TNF- signaling pathways to iNOS expression in a mouse model of Alzheimer's disease: Relevance for the behavioral and synaptic deficits induced by amyloid proteinJ.The Journal of Neuroscience，2007,27(20):5394.4 Berson A, Knobloch M, Hanan M, et al. Changes in readthrough acetylcholinesterase expression modulate amyloid-beta pathologyJ. Brain,2008,131(1):109.5 Kim SY, Moon JH, Lee HG, et al. ATP released from beta-amyloid-stimulated microglia induced reac