1、成釉細胞瘤和角化囊腫細胞生長特點的研究【摘要】目的觀察、比較成釉細胞瘤和角化囊腫細胞的生長特點，探討角化囊腫復發的原因。方法原代體外培養成釉細胞瘤細胞、牙源性角化囊腫、根端囊腫及口腔粘膜的上皮細胞和成纖維細胞，倒置光相差顯微鏡觀察。結果成釉細胞瘤上皮細胞生長較快，細胞生長暈周圍不規則，大細胞生長暈周圍有許多衛星樣小生長暈，成纖維細胞呈網格狀。角化囊腫與其他囊腫和正常粘膜的上皮細胞相同，生長緩慢，細胞生長暈周圍規則，由呈漩渦狀生長的成纖維細胞圍繞。結論成釉細胞瘤細胞生長活躍，而角化囊腫細胞的生長特點與其他囊腫和粘膜相似，提示成釉細胞瘤細胞的浸潤性生長特點，推測角化囊腫復發的主要因素不是因為其具有

2、腫瘤的生長特點。【關鍵詞】上皮細胞 組織培養 成釉細胞瘤 角化囊腫 Growth behavior of cells of ameloblastoma and odontogenic keratocystZHAO Ningxia，YU Shifeng，WANG Weihua，et al.School of Stomatology,Beijing Medical University, Beijing 100081【Abstract】ObjectiveTo compare the growth behavior of epithelium and fibroblast from amelobla

3、stoma and keratocyst and to discuss the recurrence reason for the keratocyst.MethodsEpithelial cells and fibroblast from ameloblastoma, keratocyst, dentigerous cyst, radicular cyst and oral mucosa were cultured and observed by phase-contrast microscope. ResultsThe epithelial cells of ameloblastoma g

4、rew faster, with an irregular area around the cell mass and some small satellite-shaped cell mass. The epithelial cells of all the cysts and mucosa grew slower with the cell masses surrounded by fibroblasts which grew in whirl manner with a round and smooth periphery. ConclusionThe cells from the am

5、eloblastoma grow faster and more active,and those from the keratocysts grow like the other cysts and the normal mucosa. It is speculated that the ameloblastoma grows in an aggressive manner and it is possible that the recurrence of the keratocyst isnt primarily resulted from its growth behavior as a

6、 tumor.【Key words】Epithelial cells Tissue culture Ameloblastoma Keratocyst epithelium成釉細胞瘤是比較常見的牙源性腫瘤，雖然生長緩慢，屬良性腫瘤，但易呈局部浸潤性生長，手術不徹底常易復發。牙源性角化囊腫也具有較大的復發傾向，關于其原因卻意見不一。上皮細胞原代培養的方法，國外早在六七十年代即已開展，目前成釉細胞瘤細胞的傳代培養，隨著各種材料的出現也日趨成熟，但國內這方面的研究仍然是需要填補的空白。我們通過原代培養的方法，觀察、比較牙源性角化囊腫和成釉細胞瘤細胞不同的生長特點，并對角化囊腫復發的原因進行探討。材料與

7、方法1.材料 ：根端囊腫3例，含牙囊腫2例，口腔粘膜2例，牙源性角化囊腫2例，成釉細胞瘤3例。2.方法：（1）取材， D-Hanks液（含青霉素、鏈霉素各1106U/L）中浸泡3次，每次20 min。（2）將組織塊分切成1mm1mm1mm大小，種于培養皿上，置37培養箱34小時。（3）沿培養皿壁緩慢加入DMEM培養液（含胎牛血清10，青霉素、鏈霉素各1105U/L）。（4）置37、5%CO2孵箱內，更換DMEM培養液2次/周，Olympus倒置光相差顯微鏡觀察。結果1一般生長特點：各囊腫及頰粘膜的組織塊周圍，2天左右首先有梭形的成纖維細胞呈散射樣爬出。含牙囊腫、角化囊腫和頰粘膜分別在23天、3

8、4天和78天左右，上皮細胞從組織塊中爬出，圍繞組織塊周圍，形成膜狀的鋪路石樣結構，最外層由先爬出的成纖維細胞包繞。隨后1周內，上皮細胞生長較快，之后成纖維細胞增多，上皮細胞出現復層，生長速度減慢。根端囊腫無上皮細胞爬出。 成釉細胞瘤在種植后16小時，培養液內即可有大量的細胞懸浮，24小時左右成釉細胞瘤上皮細胞貼壁生長，有的圍繞組織塊周圍，有的散在于組織塊間，形成結構松散的鱗狀細胞團。以后2周內生長較快，成纖維細胞較少，第3周成纖維細胞增多，瘤細胞生長減慢(表1)。表1成釉細胞瘤、各囊腫及頰粘膜的生長特點項目上皮細胞出現時間上皮生長迅速期成纖維細胞生長迅速期成釉細胞瘤24小時貼壁后2周第3周角化

9、囊腫34天貼壁后1周第2天含牙囊腫23天貼壁后1周第2天根端囊腫無無第45天頰粘膜78天貼壁后1周第2天2. 上皮細胞的結構特點： 成釉細胞瘤的上皮細胞大而松散，呈膜狀生長的細胞生長暈周邊不規則，有一些突起伸出。不同的細胞生長暈之間，有些細胞漿延展而互相連接，呈手拉手樣；有些細胞生長暈周圍出現小衛星樣生長暈，并且逐漸增大。牙源性角化囊腫和含牙囊腫的上皮細胞大而緊密，而頰粘膜的上皮細胞小，其細胞生長暈周圍由成纖維細胞圍繞，均十分規則（1、2）。1成釉細胞瘤上皮細胞生長暈周圍有衛星樣小生長暈。倒置光相差顯微鏡(300)2角化囊腫上皮細胞生長暈周圍規則，由纖維細胞圍繞。倒置光相差顯微鏡(300)3.

10、 成纖維細胞的生長特點：成釉細胞瘤的成纖維細胞出現較遲，且生長緩慢，呈網格狀。角化囊腫和含牙囊腫的成纖維細胞出現較早，生長快而多，頰粘膜居中，這幾種成纖維細胞均呈漩渦狀。 討論本研究采用原代培養，方法簡捷明了，而且與體內細胞性狀更接近。1979年Yang等1將成釉細胞瘤組織塊置于膠原凝膠中進行三維培養觀察，結果發現在凝膠中長出許多與組織塊結構相似的瘤樣結構，但關于其浸潤性生長的特點未作報道。本研究中，成釉細胞瘤細胞在培養16 小時后，培養液中有大量的瘤細胞游出，24 小時后有細胞貼壁生長，較其他上皮細胞出現早，說明其不僅具有活躍的增殖能力，且瘤細胞向周圍游走的能力也較強。另外，細胞團周邊不規則

11、，有突起和衛星樣細胞團，更提示細胞具有主動生長的特點。由于牙源性角化囊腫有較高的復發率，Ahlfors等2認為牙源性角化囊腫是良性的囊性腫物，Partridge和Towers3則認為其具有腫瘤的生物學行為，Stenman等4通過體外培養的方法，發現含牙囊腫無上皮細胞生長，而成釉細胞瘤和角化囊腫有，認為角化囊腫不僅是單純的囊腫，而更具腫物的生長特點。本研究中2例含牙囊腫均有上皮細胞生長，且較角化囊腫出現早。另外，角化囊腫的上皮細胞團與頰粘膜基本相似，周圍平滑規則，與松散的成釉細胞瘤、向周圍突出生長和在周圍形成衛星樣細胞團的結構明顯不同。故角化囊腫與成釉細胞瘤的差別更大，而與頰粘膜基本相似。所以，

12、角化囊腫易復發，并不是因為具有腫瘤的生物學特點。Hume等5培養的93例牙源性囊腫中，91%的含牙囊腫和58%的角化囊腫有上皮細胞長出，也為此提供了證據。從各實驗組的成纖維細胞生長特點觀察，成釉細胞瘤的成纖維細胞少而生長較遲，對上皮細胞的局限力小，因而較早就有大量的上皮細胞游出。而各囊腫的成纖維細胞生長快而多，且呈漩渦狀緊密圍繞于上皮細胞團周圍，所以對上皮細胞游出有較強的局限力，另外對囊腔內的膨脹壓力也具有較強的對抗力。頰粘膜的成纖維細胞，無論是生長速度還是數量都居于成釉細胞瘤和囊腫之間。High和Robinson6在膠原凝膠中培養各種牙源性囊腫的成纖維細胞，含牙囊腫的凝膠收縮速度較慢，說明各

13、囊腫壁的成纖維細胞及細胞外基質存在差異，因此其對抗囊腔內的膨脹壓的能力不同。另外各實驗組的成纖維細胞具有不同的生長特點，也說明其上皮與結締組織之間存在相互誘導、相互調節的作用。本研究證明，角化囊腫與浸潤性生長的成釉細胞瘤不同，不具有腫瘤的生長特點。根據角化囊腫的成纖維細胞具有較強的對抗能力，推測其膨脹性生長的能力較強，其復發傾向可能主要是由于較強的膨脹性生長，使病變較大，手術不易完全根除而致。國外曾報道，復發的角化囊腫大多范圍較大。經過治療縮小的角化囊腫，復發率則明顯降低。另外，由于上皮與結締組織之間存在相互誘導的作用，手術殘余的組織可能對周圍分化不成熟的幼稚細胞，如剩余牙板、粘膜的基底細胞等

14、誘導而復發。無論是囊腫過大，還是幼稚細胞誘導再生，或是剩余的子囊，主要是與手術不徹底有關。Forsell和Sainio7隨訪121例患者發現，手術破碎不能完全摘除的囊腫，50%以上復發。從臨床治療意義來看，角化囊腫雖然不必象成釉細胞瘤一樣做下頜骨截除，但單純的摘除術必然存在復發的危險，所以，除徹底刮治外，還應在病變區與正常組織間做徹底清掃。國家自然科學基金資助課題（39330220）作者單位：趙寧俠于世鳳王衛華龐淑珍（100081 北京醫科大學口腔醫學院）參考文獻1Yang J, Richards J, Bowman P, et al. Sustained growth and three-d

15、imensional organization of primary mammary tumor epithelial cells embedded in collagen gels. Proc Natl Acad Sci U S A， 1979，76：3401-3405.2Ahlfors E, Larsson A, Sjogren S. The odontogenic keratocyst：a benign cystic tumor? J Oral Maxillofac Surg ，1984，42:10-19. 3Partridge M， Towers JF. The primordial

16、cyst (odontogenic keratocyst): its tumour-like characteristics and behaviour. Br J Oral Maxillofac Surg， 1987，25:271-279. 4Stenman G, Magnusson B, Lennartsson B,et al. In vitro growth characteristic of human odontogenic keratocysts and dentigerous cysts.J Oral Pathol, 1986，15:143-145.5Hume WJ, Moore JK, Main DM. Differences in in vitro growth of epithelium from inflammatory and developmental odontogenic cysts. Br J Oral Maxillofac Surg,1990,28:85-88.6High AS, Robinson PA. Differences in adhesion and collag