1、精選優質文檔-傾情為你奉上植物組織中葉綠素含量測定（無機及分析化學實驗II-設計性實驗）一、 實驗目的1設計用分光光度計測定植物組織中的葉綠素2. 學習利用文獻資料設計研究方案3. 掌握分光光度計測定植物組織中的葉綠素的原理與方法二、 原理：葉綠素廣泛存在于果蔬等綠色植物組織中，并在植物細胞中與蛋白質結合成葉綠體。當植物細胞死亡后，葉綠素即游離出來，游離葉綠素很不穩定，對光、熱較敏感；在酸性條件下，葉綠素生成綠褐色的脫鎂葉綠素，在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠酸鹽以及葉綠醇和甲醇。高等植物中葉綠素有兩種，均易溶于乙醇、乙醚、酒精和氯仿。葉綠素a 葉綠素b 葉綠素a、b在長波方面最大吸收峰分別位于

2、663nm和645nm，且兩吸收曲線相交于652nm處。葉綠素a、b的比吸收系數K為已知，可在663nm和645nm測定試樣吸光度（兩組份混合試樣測定，雙波長法），根據LambertBeer定律，列出濃度c與吸光度A之間的關系式：A66382.04ca9.27cb （1）A64516.75ca45.6cb（2）（1）、（2）式中的A663、A645為葉綠素溶液在波長663nm和645nm時的吸光度度。ca、cb為葉綠素a、b的濃度，單位為g/L。82.04、9.27為葉綠素a、b在波長663nm時的比吸收系數16.75、45.6為葉綠素a、b在波長645nm時的比吸收系數。解方程式（1）（2）

3、，則得經驗公式：ca=12.7 A663-2.69 A645 （3）cb=22.9 A645-4.68 A663（4）cT=（ca + cb ）=20.2 A645+8.02 A663 （5） 此時，cT為總葉綠素濃度，ca、cb為葉綠素a、b的濃度，單位為mg/L ，利用上面（3）（4）（5）式，即可以計算a、b總葉綠素的濃度。儀器：分光光度計、電子天平、棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用報紙遮光）、小漏斗、濾紙試劑：95%乙醇三、 實驗步驟1、試材的采集采集新鮮植株葉片（或含葉綠素的其他組織），夾于雙層報紙中，風干（不能置于太陽光下曬）。將風干材料處理成細小顆粒，裝入封口塑料袋，避光保存。

4、2、待測液的制備（1）葉綠素的浸提 精密稱定風干后的樣品（約0.1g）于20mL 95%乙醇中，在室溫浸提36-48h。（2）葉綠素浸提液定容提取液過濾到50mL棕色容量瓶（如使用白玻容量瓶，可用報紙遮光），用95%乙醇定容至50mL，搖勻，置于暗處備用待測。3、測量吸光度取1cm的比色皿，注入上述葉綠素酒精溶液，用95%乙醇為參比液，1cm的比色皿為吸收池，分別在663nm和645nm波長測吸光度，每一波長讀三次數，取平均值帶入公式計算。如吸光度大于0.8，按倍數準確稀釋（稀釋倍數為n ），盡量使吸光度的測量值在0.2-0.8范圍內。4、結果計算 用測得的吸光度 A663、 A645，代入（3）式計算溶液中葉綠素a的含量；代入（4）式中計算得到葉綠素b的含量，代入（5）式計算得到葉綠素總含量。 計算植株中葉綠素含量時，需要考慮稀釋因子。 數據記錄及處理：表1波長A1A2A3A平均值663nmA663(平均值)=645nmA645(平均值)=表2cacbcTwT17周星期一、星期二（全天開放）采集新鮮樹葉并把樣品帶到實驗室來領塑料密封的試管，然后稱量0.1g新鮮樣品用研缽磨碎，并用少量酒精洗滌并轉移到塑料密封試管，