1、人類單基因病和染色體病遺傳資源標準化整理、整合的技術規程中國人類遺傳資源平臺項目組 2007年12月 前 言 人類單基因病和染色體病遺傳資源是我國重大疾病遺傳資源的重要組成部分。現代醫學已經進入生物醫學時代，多種疾病的發生都與遺傳因素相關。單基因病和染色體病的研究已成為人類疾病致病機制研究的重要切入點之一。規范的人類單基因病、染色體病遺傳資源庫將為我國人類重大疾病研究提供重要資源平臺。我國自2004年起，就開始陸續有多家單位參與人類遺傳資源平臺的建設，但迄今尚無一個統一的單基因病、染色體病的標準化的整理和整合的技術規范。根據目前的工作積累，我們參考國際相關做法，結合中國已經制定的人類遺傳資源相

2、關技術規范及國內外其他領域技術規范，制定本規程。該規程的制定為進一步完善人類單基因病和染色體病遺傳資源庫，從技術標準和安全標準方面提出了原則性要求。目 次前 言. . .II1.范圍. .12.規范性引用文件. .13.術語和定義. .14.單基因病和染色體病資源庫課題承擔單位的基本條件.25.組織管理. . . . . . . . . . . .35.1 管理. . . . . . . . . . . .35.2 一般管理. .36.人員資質和培訓. .37.實驗室環境. . . .48.設備. . . . . . . . . . . . .48.1 校準、檢測和設備保養. . . . .

3、. . . . .48.2 使用的授權. . . . . . . . . . .48.3 監控. .49.工作程序. . . . . . . . . . . .49.1 采樣前準備. . . . . . . . . . .49.2 樣本采集. . . . . . . . . . .59.3 樣本標識. . . . . . . . . . . .59.4 DNA的提取. . . . . . . . . . .6.9.5 樣本保存和使用.610.計算機信息化管理. . . . .611 質量核查及質量評價. 611.1 目的. . . . .611.2 職責. . . .611.3 執行. .61

4、1.4 規劃和文檔. . . .711.5 質量控制系統. . .712 實驗室安全. . . .713 操作方法. . .713.1 政策和規范. . . . . .713.2 可用性. . . . .713.3 方法和程序文檔. .714 信息記錄系統. . . . . . . . . . .714.1 樣品信息記錄. . . . . . .714.2 保護. . . . . .714.3 保留. . . 815 人類單基因病和染色體病遺傳資源的保密要求. . .8參考文獻. . .81 范圍 本規范規定了人類單基因病和染色體病遺傳資源標準化整理和整合的技術標準和管理規范。本規程內容包括人

5、類單基因病、染色體病遺傳資源庫參與單位的基本條件、人員資質及培訓、建筑和設施、儀器設備、資源采集范圍和分類、采樣前準備、血樣采集、標本標識、標本保存和使用、計算機信息化管理、質量管理體系等。2 規范性引用文件下列文件中的條款通過本規程的引用而成為本規程的條款。凡是注明日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本規程；然而，鼓勵根據本規程達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本適用于本規程。GB/T 1.1-2000 標準的結構和編寫規則GB/T 2261.12261.7-2003 個人基本信息分類與代碼GB15980-1

6、995標準ICD-10 WHO國際疾病分類編碼ICD-10 中國修訂版IND 國際醫學科學組織理事會（CIOMS）遺傳資源的共享原則3.術語和定義 3.1 人類遺傳資源 human genetic resource 人類遺傳資源是指含有人體基因組、基因及其產物的器官、組織、細胞、血液、制備物、重組脫氧核糖核酸（DNA）構建體等遺傳材料及相關的信息資料。3.2 單基因病 monogenic disease，single gene disease 指受一對主基因影響而發生的疾病，遺傳方式符合孟德爾定律，因此也稱孟德爾遺傳的疾病。3.3 染色體病 chromosomal disorder 3.3.1

7、 染色體病 指先天性染色體數目異常或結構畸變而引起的疾病。染色體異常表現為具有多種畸形的綜合征，因此又稱染色體綜合征。 3.3.2 核型 一個體細胞中的全部染色體所構成的圖像即稱核型（karyotype）。Denver體制確定的正常人核型的基本特點是識別人類各種染色體病的基礎。按照Denver體制，將待測細胞的染色體進行分析和確定是否正常以及異常特點即稱核型分析（karyotype analysis）。3.4 知情同意 informed consent保證被收集者了解并理解研究的目的和內容，并自愿同意參加實驗的原則。知情同意具有國際性，是對所有進行人體研究或人體取樣調查的研究人員的倫理要求。在

8、以人為研究/試驗對象的科研領域，收集者必須獲得研究對象/參與者的知情同意，保護被收集者合法權益的同時保護收集者免予訴訟。3.5 知情同意書 informed consent form 是每位被收集者表示自愿參加某一項試驗而簽署的文件。知情同意的具體體現實知情同意書的簽署。知情同意書由收集者和被收集者共同簽署，一式兩份。正本由收集者保存，被收集者保存副本。3.6 設備 equipment 非消耗性有形財產的某物品，其使用壽命超過一年，并且其單位數量的獲得成本等于或大于5000元人民幣或者該組織設定的資產估價金限額（滿足其一即可）。3.7 研究 research 旨在增進對研究對象的知識或理解的系

9、統而廣泛的研究，特別針對新知識的應用以滿足公認的需要，或系統地應用現有知識生產有用的材料、設備和方式或方法，包括設計、開發和原型改造、新工藝的研制生產。3.8 條形碼 是指由一組按一定編碼規則排列的條、空符號，用以表示一定的字符、數字及符號組成的信息。3.9 條形碼系統 是由條碼符號設計、制作及掃描閱讀組成的自動識別系統，現已應用在國防、公共安全、交通運輸、醫療保健、工業、商業、金融、海關及政府管理等多個領域。4 單基因病和染色體病遺傳資源課題承擔單位的基本條件4.1 必須是專門從事人類單基因病和染色體病相關研究的單位4.2 必須是省級以上的計劃生育研究所或臨床3等甲級醫院的遺傳病研究中心4.

10、3 必須建立與其業務相關的組織結構和工作流程4.4 具有符合儲寸1萬份單基因病血樣標本、DNA樣本及染色體玻片標本的高清潔度空間4.5 已經收藏了大量樣本資源4.6 具有相關研究和計算機網絡管理儀器設備4.7 具有可靠的單基因病和染色體病的標本來源4.8 具有多渠道籌集資金和運轉經費的能力4.9 必須經過遺傳病研究相關倫理委員會討論通過5 組織管理5.1 管理國家對人類遺傳資源實行分級管理，統一審批制度。各種類型人類遺傳資源庫及其合作機構在遵守中華人民共和國有關法律、法規及規章制度的前提下進行機構之間的合作。明確各自擁有的權力和義務，并履行其義務與職責。遺傳資源庫的管理包括以下方面：機構或組織

11、遺傳資源庫建立、樣本保存及安全服務范圍5.2 一般管理根據職責權限及范圍，所有工作人員按要求履行各自的職責。按照試驗室程序手冊執行所有程序，不同資源庫的試驗程序應由各自特點。6 人員資質和培訓遺傳資源庫任職人員資格及培訓主要包括以下幾個方面內容：工作人員有多種層次，不論那種層次的工作人員，只有經過嚴格的職業培訓后，才允許上崗；工作人員要根據所服務的資源庫特點，經過特殊的職業培訓，并接受每年的繼續教育的培訓。使用設備等的授權證明資料也要記錄在培訓記錄中。新職員需經過使用培訓，或經資深職員的指導后才可使用高壓滅菌器、凍干設備、低溫儲藏設備及生物安全柜等必須經過專門培訓才能使用的設備。7 實驗室環境

12、 提供一個良好的環境是每個遺傳資源庫建立的前提條件，這個環境應保證免除樣本的污染，并方便的進行準確的測量和記錄。安排專職的工作人員定期檢查實驗室是否符合樣本保存的各項要求，主要參照實驗室生物安全通用要求。8 設備8.1 校準、檢測和設備保養 保存所有設備的詳細目錄及使用登記。在保養合同中記載所有設備的主要條款，并保留記錄。 為保證可重復性，所有測量器具和設備都要定期校準。質量管理機構，負責建立和實施校準項目（根據各自實驗室程序手冊）。資源庫的所有設備的使用和維護，應與制造廠商的指南/手冊中的說明相一致。操作和保養的指導說明一般要保存在設備的附近，以便查閱。測量裝置由有資格的服務機構及校準工程師

13、來校準。8.2 使用的授權 所有的操作人員都要經過全面的設備使用和培訓，并保存在他們個人的培訓記錄中。8.3 監控 任何損壞的設備，或顯示令人懷疑的結果、有故障，或有缺陷不宜使用的設備，都要立即停止使用，并在該設備上迅速貼上標簽或做上標記，在修理好重新生效之后才能重新投入使用。9工作程序9.1 采樣前準備臨床診斷和家系調查 對先證者進行全面的臨床檢查，并根據檢查結果做出診斷。對先證者進行至少三代以上的家族本病發病史調查，直到追溯到最早本病患者為止。對現存全部患者進行臨床檢查和診斷，通過詢問盡可能全面了解已故患者的臨床特征，并繪制詳盡的家系系譜圖，判斷遺傳方式。 填寫健康狀況調查表 需要采樣的所

14、有家系成員填寫健康狀況調查表。逐項填寫，字跡清楚，調查表填寫內容真實、準確。9.1.3 簽署知情同意書 研究者仔細為患者及其家人對疾病的表現、遺傳方式、研究的目的、對患者及其家人可能從研究中獲得的權益進行講解。參與者或參與者的合法監護人（或代理者）在清醒、正常的精神狀態下，仔細閱讀知情同意書，同意后簽字或按手印。同時告知供體的隱私權將被嚴格保密，未經同意不會泄露有關信息，并告知參與者樣本將儲備于國家人類重大疾病遺傳資源數據庫，可能被國內非商業性研究使用。9.2 樣本采集 采血器械 采血所需醫療用品必須符合GB15980-1995標準產品的要求。 血樣采集量 每個個體一次采集量5-10ml,可根

15、據研究需要酌情增減。 采血程序 采血前，采樣人員登記收集管批號，在標簽處填寫樣本編號，并與表格中填寫的被采集人信息進行核對；無菌操作采集周靜脈外周血。 產前診斷樣本 樣本為孕9-11周絨毛或孕16-18周羊水細胞，由專門產科醫生抽取。羊水細胞DNA不用于數據庫收藏。 填寫樣本登記卡 根據數據庫要求，詳細填寫標本登記卡，并進行電子信息錄入。9.3標本標示 采用條形碼技術對樣本進行標示 外周血樣本、 DNA樣本和染色體標本都以條形碼進行標示，標記號與標本的電子檔案一致，點擊時，可獲悉樣本所有信息。 條形碼標簽技術要求標簽的底色應為白色并全部與遺傳資源標本存放管管壁牢固結合；標簽信息應采用實體黑色字

16、體，通過打印或印刷產生；標簽材質能防水、耐低溫、耐磨損。 貼簽 單基因病和染色體病遺傳資源的標識是通過貼簽活動實現的，貼簽活動作為一項關鍵活動，必須將發生錯誤的潛在因素降低到最少。負責貼簽的人員應經過充分培訓和評估。應建立和執行核對制度，并檢測一定百分比的遺傳資源存放管以保證貼簽過程準確無誤。 留樣 所有標本的標簽都應該存檔保留。 標識管理建立單基因病和染色體病遺傳資源標本標識的管理程序，以確保每一份標本均可通過條形碼追溯到被采集者基本信息資料、健康狀況、疾病信息、表型、基因型或核型、標本存放地點、目前使用情況等信息。單基因病和染色體病遺傳資源標本標識管理的關鍵控制點包括標簽的材質、標簽的內容

17、、條形碼系統的應用以及貼簽管理。9.4 DNA的提取 采用常規酚氯仿法或全血基因組DNA提取試劑盒抽取外周血或絨毛組織的基因組DNA。9.5 標本保存和使用 外周血、絨毛及羊水細胞沉淀保存在-80冰箱，DNA樣本保存于-20冰箱。10 計算機信息化管理10.1 應建立和使用單基因病和染色體病遺傳資源標本庫計算機管理系統，對從標本采集、標本信息、入庫、使用情況和質量管理全過程實行計算機管理。10.2 建立和實施計算機管理系統使用的風險分析、培訓、確認、使用以及使用后的評估程序。10.3 建立和實施標本信息儲存、標本保存、標本檢測和計算機管理系統發生意外事件的應急預案和恢復程序，確保標本庫正常運轉

18、。11質量核查及質量評價11.1 目的 人類單基因病和染色體病遺傳資源庫的管理者要定期核查，以保證資源庫建設政策和程序得以執行。所有工作至少每年核查一次。另外每年都要有一次獨立的核查。質量管理系統和實驗室程序的年度審查也要進行。11.2 職責 質量負責機構負責對實驗室程序的效力進行評述，并確保記錄評述及所有評價活動得以貫徹執行；另有一位獨立的工作人員進行獨立的核查；并且驗證核查過程中所要求的矯正活動在規定的時間內是否全部完成。在資源庫監管部門的安排下，另一個相關資源庫的工作人員對本資源庫的質量管理系統和實驗室程序進行年度核查。11.3 執行 根據人類單基因病和染色體病保存樣本的特點，在本實驗室程序手冊中對質量核查和質量系統評價工作的安排進行詳細論述。11.4 規劃和文檔 由質量負責機構掌管所有的核查記錄、評價和執行記錄。11.5 質量控制系統 除了核查和評價以外，在各自實驗室程序手冊中詳細論述的方法和程序質量檢查也要貫徹執行。12 實驗室安全12.1 應遵從實驗室生物安全通用要求（G B19489-2004）和微生物和生物醫學實驗室生物安全通用準則（WS 233-2002）的要求。12.2 建立和實施實驗室安全與衛生管理程序，覆蓋從標本采集到標本貯存整個過程。12.3 限制非授權人員進入遺傳資源標本庫。13 操作方法13.1 政策和規范 單基