1、注射用水微生物限度檢查方法驗證方案文件編碼：項 目姓 名簽 名日 期起 草審 核審 核批 準生效日期年 份 注射用水微生物限度檢查方法驗證目錄1、注射用水微生物限度檢查方法驗證計劃2、注射用水微生物限度檢查方法驗證小組名單3、注射用水微生物限度檢查方法驗證方案4、注射用水微生物限度檢查方法驗證培訓記錄5、注射用水微生物限度檢查方法驗證附屬記錄6、注射用水微生物限度檢查方法驗證報告7、注射用水微生物限度檢查方法驗證合格證書注射用水微生物限度檢查方法驗證計劃根據我公司認證領導小組的要求及驗證委員會的安排，對注射用水微生物限度檢查方法進行驗證，具體安排如下：一、年月日年月日，制定驗證方案，由注射用水

2、微生物限度檢查方法驗證小組組長負責起草。二、年月日年月日，驗證方案討論、修改、審批和培訓。三、年月日年月日，驗證工作實施。 四、年月日年月日，根據驗證情況與記錄，書寫驗證報告。五、年月日年月日，驗證報告審核批準，合格證發放。注射用水微生物限度檢查方法驗證小組名單組 長： 成 員： 一、 目的中華人民共和國藥典2010版二部規定注射用水微生物限度檢查采用薄膜過濾法，確認該方法適合于本公司注射用水中細菌、霉菌及酵母菌數測定。二、 適用范圍本公司注射用水中細菌、霉菌及酵母菌的測定。三、 內容1. 概述 當建立微生物限度檢查法時，應進行細菌、霉菌及酵母菌的計數方法驗證 ，已確認所采用的方法適合于該產品

3、的細菌、霉菌及酵母菌的測定。若產品的組分或原檢驗條件發生改變可能影響檢驗結果時，計數方法應重新驗證。 2. 驗證項目及認可標準對各試驗菌的回收率逐一進行驗證，試驗組的菌回收率不得低于70%（試驗組的平均菌落數減去供試品對照組的平均菌落數的值占菌液組的平均菌落數的百分率）。3. 驗證依據 中華人民共和國藥典2010版二部附錄XI J微生物限度檢查法。4. 驗證方法與內容 4.1. 驗證方法 采用薄膜過濾法進行細菌、霉菌及酵母菌的測定。4.2. 驗證試驗分3組，至少應進行3次獨立的平行試驗，并分別計算供試品組和對照組試驗的菌回收率。4.3. 儀器設備4.3.1. TMQ.R-3870型臺式滅菌器

4、4.3.2. HPX-9272MBE型電熱恒溫培養箱 (3035)4.3.3. 單人凈化工作臺 4.3.4. MJ-160霉菌培養箱 (2328)4.4. 培養基4.4.1. 營養肉湯培養基4.4.2. 營養瓊脂培養基4.4.3. 玫瑰紅鈉瓊脂培養基4.4.4. 酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基4.4.5. 改良馬丁培養基4.5. 驗證過程與方法4.5.1. 取樣：由質量部生測室檢驗人員負責取樣。用滅菌好的錐形瓶取注射用水（注A-0、注A-7、注B-8、注B-0）取樣點水樣各1500ml,立即送質量部生測室檢驗。4.5.2. 菌液制備 a. 取經3536培養1824小時的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌

5、、與枯草芽孢桿菌營養肉湯新鮮培養物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-610-7約50100cfuml的菌懸液備用。b. 取經2425培養2448小時的白色念珠菌改良馬丁液體培養物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5約為50100cfuml的菌懸液備用。c. 取經2425培養一周的黑曲霉菌斜面培養物，加35ml含0.05%（mlml）聚山梨脂80的0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫，然后吸出孢子懸液，用墊有脫脂棉的漏斗（濕熱滅菌）過濾，除去菌絲，收集孢子懸液至另一無菌試管內作為菌原液，取此孢子懸液1ml加到9ml含0.05%（mlml）聚山梨

6、脂80的0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5約為50100cfuml的菌懸液備用。4.5.3. 菌液計數（每種菌液至少接種2個平皿）a. 取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌與枯草芽孢桿菌各1ml分別接種至營養瓊脂培養基，置3035培養48小時計數；b. 取白色念珠菌、黑曲霉各1ml分別接種至玖瑰紅鈉瓊脂培養基，置2328培養72小時計數；c. 取白色念珠菌1ml接種至酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基置2328培養72小時計數。d. 計數結果見驗證記錄4.5.4. 驗證方法a. 試驗組 取注射用水100ml 和50100cfu試驗菌，過濾，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂培養基平板上培養。每株試驗菌平

7、行制備2個平皿，按薄膜過濾法測定其菌數，每片濾膜上的菌落數應不超過100cfu。b. 菌液組 取50100cfu試驗菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿菌落計數法測定其菌數。c. 供試品對照組 取注射用水100ml，過濾，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂培養基平板上培養。同法，細菌、霉菌及酵母菌各制備2個平皿，測定供試品本底菌數。d. 驗證結果見驗證記錄。5. 組織實施5.1. 驗證機構的組成5.1.1. 公司驗證委員會，負責所有驗證工作的領導和組織、審批驗證方案和驗證報告、發放驗證證書。5.1.2. 注射用水微生物限度檢查方法驗證工作小組，負責該驗證項目的驗證

8、方案起草、實施、組織與協調實施，負責驗證樣品檢測，完成各項記錄，根據檢驗和確認結果進行評定、完成驗證報告。部門部門職責責任人工作劃分質量部方案起草、實施、書寫報告操作實施質量部取樣、檢驗、出報告操作實施驗證委員會方案審定、批準、實施、發放驗證合格證方案審核方案批準5.2. 實施時間為：年月日年月日。四、 附件及相關表格文件注射用水微生物限度檢查方法驗證報告文件編碼：項 目姓 名簽 名日 期起 草審 核審 核批 準生效日期年 份一、 驗證概述為保證藥品質量，根據本公司驗證工作領導小組的要求及驗證委員會的安排，對C/D生產線注射用水系統進行微生物限度檢查方法驗證。1. 驗證組織與實施1.1. 驗證

9、小組成員及職責分工部門部門職責責任人工作劃分質量部方案起草、實施、書寫報告操作實施質量部取樣、檢驗、出報告操作實施驗證委員會方案審定、批準、實施、發放驗證合格證方案審核方案批準1.2. 本驗證由質量部負責并由相關人員根據注射用水微生物限度檢查方法驗證方案所規定的方法與步驟實施。二、 各項目驗證結論1. 驗證用培養基 名稱生產廠家批號配制批號營養瓊脂培養基營養肉湯培養基玫瑰紅鈉瓊脂培養基改良馬丁培養基酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基2. 驗證用菌株：來源于貴州省藥品檢驗所驗證菌株菌株代數增菌培養基培養溫度培養時間（小時）大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌3. 各取樣點菌落計數回收

10、率 驗證結果見下表獨立試驗一 ：各試驗組菌落計數（回收率%） 取樣點 試驗日期 年 月 日 報告日期 年 月 日驗證菌株平皿號試驗組CFU100ml菌液組CFU/ml供試品對照組CFU100ml試驗組菌回收率（%）大腸埃希菌(營養瓊脂)12平均值金黃色葡萄球菌(營養瓊脂)12平均值枯草芽孢桿菌(營養瓊脂)12平均值白色念珠菌(玖瑰紅鈉瓊脂培養基)12平均值黑曲霉(玖瑰紅鈉瓊脂培養基)12平均值白色念珠菌（酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基）12平均值結論： 試驗人 復核人 獨立試驗二：各試驗組菌落計數（回收率%） 取樣點 試驗日期 年 月 日 報告日期 年 月 日驗證菌株平皿號試驗組CFU100ml

11、菌液組CFU/ml供試品對照組CFU100ml試驗組菌回收率（%）大腸埃希菌(營養瓊脂)12平均值金黃色葡萄球菌(營養瓊脂)12平均值枯草芽孢桿菌(營養瓊脂)12平均值白色念珠菌(玖瑰紅鈉瓊脂培養基)12平均值黑曲霉(玖瑰紅鈉瓊脂培養基)12平均值白色念珠菌（酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基）12平均值結論： 試驗人 復核人 獨立試驗三 ：各試驗組菌落計數（回收率%） 取樣點 試驗日期 年 月 日 報告日期 年 月 日驗證菌株平皿號試驗組CFU100ml菌液組CFU/ml供試品對照組CFU100ml試驗組菌回收率（%）大腸埃希菌(營養瓊脂)12平均值金黃色葡萄球菌(營養瓊脂)12平均值枯草芽孢桿菌

12、(營養瓊脂)12平均值白色念珠菌(玖瑰紅鈉瓊脂培養基)12平均值黑曲霉(玖瑰紅鈉瓊脂培養基)12平均值白色念珠菌（酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基）12平均值結論： 試驗人 復核人 獨立試驗四 ：各試驗組菌落計數（回收率%） 取樣點 試驗日期 年 月 日 報告日期 年 月 日驗證菌株平皿號試驗組CFU100ml菌液組CFU/ml供試品對照組CFU100ml試驗組菌回收率（%）大腸埃希菌(營養瓊脂)12平均值金黃色葡萄球菌(營養瓊脂)12平均值枯草芽孢桿菌(營養瓊脂)12平均值白色念珠菌(玖瑰紅鈉瓊脂培養基)12平均值黑曲霉(玖瑰紅鈉瓊脂培養基)12平均值白色念珠菌（酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基）12平均值結論： 試驗人 復核人 三、 建議、結果分析和驗證總結1. 建議1.1. 加強生測室檢驗人員的操作技能培訓，使檢驗過程標準化，程序化。1.2. 當注射用水系統在日常微生物限度檢測時出現異常的檢測結果時，應進行實驗室偏差處理或應再次進行注射用水微生物限度檢查方法的再驗證。2. 結果分析及驗證總結2.1. 試